目錄:上海乾思生物科技有限公司>>細(xì)胞>>細(xì)胞系>> BY-1451SSC-S3長(zhǎng)白山豬胚胎皮膚細(xì)胞系
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更新時(shí)間:2025-07-31 20:26:19瀏覽次數(shù):211評(píng)價(jià)
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來(lái)源與建立背景
形態(tài)與生長(zhǎng)特征
功能特性
地方豬特異性標(biāo)志物與抗寒蛋白:高表達(dá)長(zhǎng)白山豬te有的低溫適應(yīng)標(biāo)志物,如 TRPM8 離子通道(陽(yáng)性率 97%)、冷誘導(dǎo) RNA 結(jié)合蛋白(CIRP,陽(yáng)性率 95%),其 TRPM8 表達(dá)量是普通家豬皮膚細(xì)胞的 3 倍;分泌抗凍蛋白 AFP-III(含量達(dá) 15μg/10?細(xì)胞 / 天),在 - 2℃低溫下可減少 40% 的細(xì)胞冰晶形成,顯著優(yōu)于 WWX04-PR 等非抗寒細(xì)胞系。
胚胎期皮膚發(fā)育特征:表達(dá)胚胎皮膚特異性蛋白波形蛋白(vimentin)與成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子 7(FGF7),其中 FGF7 表達(dá)量是成年豬皮膚細(xì)胞的 2.5 倍,具有活躍的膠原合成能力(Ⅰ 型膠原分泌量達(dá) 22μg/10?細(xì)胞 / 天),模擬胚胎期皮膚快速發(fā)育特性,與新生長(zhǎng)白山豬皮膚組織的功能一致性達(dá) 90%。
病毒敏感性譜:對(duì)低溫存活型病毒(如豬痘病毒北方株)的感染效率達(dá) 98%,4℃冷藏條件下病毒滴度仍保持 10?.? TCID??/mL(普通細(xì)胞系下降至 10?.2 TCID??/mL);因高表達(dá)低溫適應(yīng)性病毒受體硫酸乙酰肝素,對(duì)寒冷季節(jié)流行的皮膚病毒吸附效率顯著高于 WWX04-PR 等眼部細(xì)胞系,尤其適合北方地區(qū)豬皮膚病研究。
地方豬種抗寒機(jī)制研究
低溫耐受分子機(jī)制:通過(guò)該細(xì)胞系發(fā)現(xiàn)長(zhǎng)白山豬 TRPM8 基因的 3 個(gè)te有突變可使低溫(10℃)下 Ca2?內(nèi)流增加 50%,激活 PI3K/Akt 通路抑制細(xì)胞凋亡(凋亡率較普通豬種細(xì)胞低 60%),與冬季野外長(zhǎng)白山豬皮膚凍傷率僅 8% 的特性高度吻合(普通豬種達(dá) 35%),揭示地方豬種抗寒的分子基礎(chǔ)。
寒冷應(yīng)激皮膚保護(hù)研究:在 - 5℃凍融循環(huán)實(shí)驗(yàn)中,SSC-S3 細(xì)胞的熱休克蛋白 HSP70 表達(dá)量上升 3 倍,細(xì)胞膜流動(dòng)性保持率達(dá) 75%(普通豬皮膚細(xì)胞僅 40%),其抗凍蛋白與 HSP70 的協(xié)同作用機(jī)制為北方豬種抗寒育種提供了關(guān)鍵靶點(diǎn)。
低溫適應(yīng)性皮膚病研究
豬痘病毒北方株傳播機(jī)制:利用其低溫病毒培養(yǎng)優(yōu)勢(shì),發(fā)現(xiàn)豬痘病毒北方株在 10℃環(huán)境下通過(guò)該細(xì)胞系的唾液酸轉(zhuǎn)移酶 ST3GalⅠ 介導(dǎo)的受體修飾,感染效率提升 2 倍,且病毒在皮膚痂皮中的存活時(shí)間延長(zhǎng)至 14 天(南方株僅 7 天),解釋了寒冷季節(jié)該病高發(fā)的原因,研究結(jié)果與東北養(yǎng)殖場(chǎng)流行病學(xué)數(shù)據(jù)一致性達(dá) 89%。
凍傷修復(fù)模型:構(gòu)建的低溫?fù)p傷模型中,SSC-S3 細(xì)胞在凍傷后 24 小時(shí)的遷移速率達(dá) 0.7mm / 天(普通豬皮膚細(xì)胞 0.3mm / 天),血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(VEGF)分泌量達(dá) 280pg/mL,模擬長(zhǎng)白山豬凍傷快速愈合的特性,為寒冷地區(qū)豬皮膚創(chuàng)傷治療提供參考。
地方豬種特色疫苗與藥物開(kāi)發(fā)
低溫環(huán)境疫苗穩(wěn)定性測(cè)試:在豬痘疫苗研發(fā)中,該細(xì)胞系可模擬北方寒冷條件下的疫苗效力變化,發(fā)現(xiàn)某凍干疫苗在 - 20℃儲(chǔ)存 6 個(gè)月后,對(duì) SSC-S3 的中和效價(jià)僅下降 15%(普通細(xì)胞系檢測(cè)下降 40%),與東北田間試驗(yàn)結(jié)果一致性達(dá) 92%,被北方省份獸醫(yī)部門(mén)列為特色疫苗評(píng)價(jià)shou選模型。
抗寒促生長(zhǎng)藥物篩選:建立基于低溫代謝的高通量篩選體系,發(fā)現(xiàn)某植物提取物可使 SSC-S3 細(xì)胞在 10℃下的代謝活性提升 40%,抗凍蛋白表達(dá)增加 25%,飼喂長(zhǎng)白山仔豬后可使冬季增重提高 18%,證實(shí)該模型的應(yīng)用價(jià)值。
基礎(chǔ)培養(yǎng)方案
培養(yǎng)基:DMEM 培養(yǎng)基添加 10% 胎牛血清,pH 維持在 7.2-7.4;為增強(qiáng)抗寒特性研究,可添加 200μM 氯化鈣激活 TRPM8 通道,使低溫應(yīng)答基因表達(dá)提升 30%。
傳代流程:當(dāng)細(xì)胞融合度達(dá) 80% 時(shí),按 1:4 比例接種(高于 WWX04-PR 的 1:2 比例),離心速度 800rpm,24 小時(shí)貼壁率超 93%,低溫實(shí)驗(yàn)需提前 24 小時(shí)進(jìn)行 15℃預(yù)適應(yīng)。
凍存保護(hù):采用含 10% DMSO 的wan全培養(yǎng)基,細(xì)胞密度 1.8×10?個(gè) /mL,程序降溫至 - 80℃過(guò)夜后轉(zhuǎn)入液氮,復(fù)蘇時(shí) 37℃水浴 1 分鐘,存活率可達(dá) 90%,需檢測(cè) TRPM8 表達(dá)確認(rèn)地方豬表型穩(wěn)定。
功能實(shí)驗(yàn)操作
低溫耐受檢測(cè):細(xì)胞接種 96 孔板,梯度降溫至 - 5℃處理 2 小時(shí),通過(guò) CCK-8 法檢測(cè)活性,SSC-S3 細(xì)胞存活率應(yīng)保持在 50% 以上(普通豬皮膚細(xì)胞<20%),結(jié)果變異系數(shù)<6%。
病毒低溫培養(yǎng):接種豬痘病毒北方株(MOI=0.1)后,置于 10℃培養(yǎng) 72 小時(shí),病毒滴度可達(dá) 10?.? TCID??/mL,需設(shè)置 37℃對(duì)照組明確溫度依賴性差異。
優(yōu)勢(shì):
地方豬種特異性:是唯yi能模擬長(zhǎng)白山豬皮膚特性的細(xì)胞系,抗寒基因表達(dá)與功能活性顯著優(yōu)于 WWX04-PR 等非地方豬種細(xì)胞系,為北方豬種研究提供專屬模型。
低溫適應(yīng)性突出:對(duì)寒冷環(huán)境與低溫病毒的敏感性居豬源細(xì)胞系shou位,低溫下細(xì)胞活性與病毒培養(yǎng)效率是普通細(xì)胞系的 2-3 倍,大幅提升寒冷地區(qū)相關(guān)研究的準(zhǔn)確性。
胚胎期研究?jī)r(jià)值:保留胚胎皮膚高增殖與發(fā)育特性,適合地方豬種皮膚生長(zhǎng)發(fā)育機(jī)制研究,填bu了豬胚胎皮膚細(xì)胞模型的空白。
局限性:
地域適用性局限:對(duì)南方溫?zé)岘h(huán)境適應(yīng)性病毒(如非洲豬瘟病毒熱帶株)敏感性較低,需與其他細(xì)胞系配合使用。
培養(yǎng)條件特殊:低溫實(shí)驗(yàn)需專用恒溫培養(yǎng)設(shè)備,成本較 WWX04-PR 常規(guī)培養(yǎng)高 20%,限制部分實(shí)驗(yàn)室應(yīng)用。
功能穩(wěn)定性依賴傳代:連續(xù)傳代超過(guò) 140 代后抗凍蛋白分泌量下降 10%,需定期進(jìn)行低溫壓力篩選以維持特性。
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