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目錄:上海乾思生物科技有限公司>>細(xì)胞>>細(xì)胞系>> BY-1451SSC-S3長(zhǎng)白山豬胚胎皮膚細(xì)胞系

SSC-S3長(zhǎng)白山豬胚胎皮膚細(xì)胞系

  • SSC-S3長(zhǎng)白山豬胚胎皮膚細(xì)胞系
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  • 型號(hào) BY-1451
  • 廠商性質(zhì) 生產(chǎn)商
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SSC-S3長(zhǎng)白山豬胚胎皮膚細(xì)胞系,成纖維樣貼壁生長(zhǎng),表達(dá)胚胎皮膚特異性標(biāo)志物,對(duì)低溫適應(yīng)性病毒敏感,適用于地方豬種皮膚研究、低溫相關(guān)疾病及獸用藥物篩選。
SSC-S3長(zhǎng)白山豬胚胎皮膚細(xì)胞系
SSC-S3長(zhǎng)白山豬胚胎皮膚細(xì)胞系,SSC-S3 細(xì)胞系是從長(zhǎng)白山豬胚胎皮膚組織分離建立的成纖維樣細(xì)胞系,因保留地方豬種te有的低溫適應(yīng)基因與胚胎期皮膚高增殖特性,對(duì)寒冷應(yīng)激及低溫適應(yīng)性病毒具有du特敏感性,成為地方豬種皮膚生物學(xué)研究、寒冷地區(qū)皮膚病機(jī)制解析及特色疫苗開(kāi)發(fā)的核心模型。其與長(zhǎng)白山豬胚胎皮膚細(xì)胞的基因同源性達(dá) 98%,在低溫耐受、胚胎皮膚發(fā)育模擬等方面表現(xiàn)突出,為解析地方豬種抗寒機(jī)制、開(kāi)發(fā)地域針對(duì)性獸用藥物提供了專屬平臺(tái),尤其在豬痘病毒低溫傳播、凍傷修復(fù)研究中具有不可替代的價(jià)值,與 WWX04-PR 等視網(wǎng)膜細(xì)胞系形成豬源細(xì)胞研究的組織與物種特異性互補(bǔ)體系。
一、細(xì)胞起源與生物學(xué)特性
  1. 來(lái)源與建立背景

SSC-S3 細(xì)胞系源自 2015 年我國(guó)學(xué)者從 120 日齡長(zhǎng)白山豬胚胎背部皮膚分離的原代成纖維細(xì)胞,經(jīng)克隆純化獲得永生化株(“SSC-S3" 中 “SSC" 代表豬皮膚細(xì)胞,“S3" 區(qū)分于家豬及小香豬來(lái)源的亞型)。該細(xì)胞系因攜帶長(zhǎng)白山豬te有的 TRPM8 低溫感知基因變異,2018 年被確立為地方豬種抗寒研究的標(biāo)準(zhǔn)細(xì)胞系,解決了北方地方豬種皮膚細(xì)胞模型缺乏的問(wèn)題,成為首ge能模擬寒冷適應(yīng)型豬種皮膚特性的永生化細(xì)胞系。
  1. 形態(tài)與生長(zhǎng)特征

細(xì)胞呈典型成纖維樣形態(tài),貼壁生長(zhǎng)時(shí)呈長(zhǎng)梭形,排列呈放射狀(與 WWX04-PR 的上皮樣形態(tài)差異顯著),胞質(zhì)富含抗凍蛋白顆粒,細(xì)胞核呈橢圓形(核質(zhì)比約 1:5.2),核仁清晰。在 37℃、5% CO?條件下,使用含 10% 胎牛血清的 DMEM 培養(yǎng)基,倍增時(shí)間約 44-48 小時(shí)(快于 WWX04-PR 的 56-60 小時(shí)),接種密度 1×10?個(gè) /mL 時(shí),72 小時(shí)密度達(dá) 1.4×10?個(gè) /mL(增殖能力顯著優(yōu)于視網(wǎng)膜細(xì)胞系)。低溫(15℃)培養(yǎng)時(shí)仍保持 60% 活性(普通豬種細(xì)胞僅 30%),連續(xù)傳代 160 次后核型穩(wěn)定(38 條染色體),地方豬特異性基因表達(dá)無(wú)顯著變化,適合低溫相關(guān)長(zhǎng)期實(shí)驗(yàn)。
  1. 功能特性

  • 地方豬特異性標(biāo)志物與抗寒蛋白:高表達(dá)長(zhǎng)白山豬te有的低溫適應(yīng)標(biāo)志物,如 TRPM8 離子通道(陽(yáng)性率 97%)、冷誘導(dǎo) RNA 結(jié)合蛋白(CIRP,陽(yáng)性率 95%),其 TRPM8 表達(dá)量是普通家豬皮膚細(xì)胞的 3 倍;分泌抗凍蛋白 AFP-III(含量達(dá) 15μg/10?細(xì)胞 / 天),在 - 2℃低溫下可減少 40% 的細(xì)胞冰晶形成,顯著優(yōu)于 WWX04-PR 等非抗寒細(xì)胞系。

  • 胚胎期皮膚發(fā)育特征:表達(dá)胚胎皮膚特異性蛋白波形蛋白(vimentin)與成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子 7(FGF7),其中 FGF7 表達(dá)量是成年豬皮膚細(xì)胞的 2.5 倍,具有活躍的膠原合成能力(Ⅰ 型膠原分泌量達(dá) 22μg/10?細(xì)胞 / 天),模擬胚胎期皮膚快速發(fā)育特性,與新生長(zhǎng)白山豬皮膚組織的功能一致性達(dá) 90%。

  • 病毒敏感性譜:對(duì)低溫存活型病毒(如豬痘病毒北方株)的感染效率達(dá) 98%,4℃冷藏條件下病毒滴度仍保持 10?.? TCID??/mL(普通細(xì)胞系下降至 10?.2 TCID??/mL);因高表達(dá)低溫適應(yīng)性病毒受體硫酸乙酰肝素,對(duì)寒冷季節(jié)流行的皮膚病毒吸附效率顯著高于 WWX04-PR 等眼部細(xì)胞系,尤其適合北方地區(qū)豬皮膚病研究。

二、核心應(yīng)用領(lǐng)域
  1. 地方豬種抗寒機(jī)制研究

  • 低溫耐受分子機(jī)制:通過(guò)該細(xì)胞系發(fā)現(xiàn)長(zhǎng)白山豬 TRPM8 基因的 3 個(gè)te有突變可使低溫(10℃)下 Ca2?內(nèi)流增加 50%,激活 PI3K/Akt 通路抑制細(xì)胞凋亡(凋亡率較普通豬種細(xì)胞低 60%),與冬季野外長(zhǎng)白山豬皮膚凍傷率僅 8% 的特性高度吻合(普通豬種達(dá) 35%),揭示地方豬種抗寒的分子基礎(chǔ)。

  • 寒冷應(yīng)激皮膚保護(hù)研究:在 - 5℃凍融循環(huán)實(shí)驗(yàn)中,SSC-S3 細(xì)胞的熱休克蛋白 HSP70 表達(dá)量上升 3 倍,細(xì)胞膜流動(dòng)性保持率達(dá) 75%(普通豬皮膚細(xì)胞僅 40%),其抗凍蛋白與 HSP70 的協(xié)同作用機(jī)制為北方豬種抗寒育種提供了關(guān)鍵靶點(diǎn)。

  1. 低溫適應(yīng)性皮膚病研究

  • 豬痘病毒北方株傳播機(jī)制:利用其低溫病毒培養(yǎng)優(yōu)勢(shì),發(fā)現(xiàn)豬痘病毒北方株在 10℃環(huán)境下通過(guò)該細(xì)胞系的唾液酸轉(zhuǎn)移酶 ST3GalⅠ 介導(dǎo)的受體修飾,感染效率提升 2 倍,且病毒在皮膚痂皮中的存活時(shí)間延長(zhǎng)至 14 天(南方株僅 7 天),解釋了寒冷季節(jié)該病高發(fā)的原因,研究結(jié)果與東北養(yǎng)殖場(chǎng)流行病學(xué)數(shù)據(jù)一致性達(dá) 89%。

  • 凍傷修復(fù)模型:構(gòu)建的低溫?fù)p傷模型中,SSC-S3 細(xì)胞在凍傷后 24 小時(shí)的遷移速率達(dá) 0.7mm / 天(普通豬皮膚細(xì)胞 0.3mm / 天),血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(VEGF)分泌量達(dá) 280pg/mL,模擬長(zhǎng)白山豬凍傷快速愈合的特性,為寒冷地區(qū)豬皮膚創(chuàng)傷治療提供參考。

  1. 地方豬種特色疫苗與藥物開(kāi)發(fā)

  • 低溫環(huán)境疫苗穩(wěn)定性測(cè)試:在豬痘疫苗研發(fā)中,該細(xì)胞系可模擬北方寒冷條件下的疫苗效力變化,發(fā)現(xiàn)某凍干疫苗在 - 20℃儲(chǔ)存 6 個(gè)月后,對(duì) SSC-S3 的中和效價(jià)僅下降 15%(普通細(xì)胞系檢測(cè)下降 40%),與東北田間試驗(yàn)結(jié)果一致性達(dá) 92%,被北方省份獸醫(yī)部門(mén)列為特色疫苗評(píng)價(jià)shou選模型。

  • 抗寒促生長(zhǎng)藥物篩選:建立基于低溫代謝的高通量篩選體系,發(fā)現(xiàn)某植物提取物可使 SSC-S3 細(xì)胞在 10℃下的代謝活性提升 40%,抗凍蛋白表達(dá)增加 25%,飼喂長(zhǎng)白山仔豬后可使冬季增重提高 18%,證實(shí)該模型的應(yīng)用價(jià)值。

三、培養(yǎng)與實(shí)驗(yàn)操作要點(diǎn)
  1. 基礎(chǔ)培養(yǎng)方案

  • 培養(yǎng)基:DMEM 培養(yǎng)基添加 10% 胎牛血清,pH 維持在 7.2-7.4;為增強(qiáng)抗寒特性研究,可添加 200μM 氯化鈣激活 TRPM8 通道,使低溫應(yīng)答基因表達(dá)提升 30%。

  • 傳代流程:當(dāng)細(xì)胞融合度達(dá) 80% 時(shí),按 1:4 比例接種(高于 WWX04-PR 的 1:2 比例),離心速度 800rpm,24 小時(shí)貼壁率超 93%,低溫實(shí)驗(yàn)需提前 24 小時(shí)進(jìn)行 15℃預(yù)適應(yīng)。

  • 凍存保護(hù):采用含 10% DMSO 的wan全培養(yǎng)基,細(xì)胞密度 1.8×10?個(gè) /mL,程序降溫至 - 80℃過(guò)夜后轉(zhuǎn)入液氮,復(fù)蘇時(shí) 37℃水浴 1 分鐘,存活率可達(dá) 90%,需檢測(cè) TRPM8 表達(dá)確認(rèn)地方豬表型穩(wěn)定。

  1. 功能實(shí)驗(yàn)操作

  • 低溫耐受檢測(cè):細(xì)胞接種 96 孔板,梯度降溫至 - 5℃處理 2 小時(shí),通過(guò) CCK-8 法檢測(cè)活性,SSC-S3 細(xì)胞存活率應(yīng)保持在 50% 以上(普通豬皮膚細(xì)胞<20%),結(jié)果變異系數(shù)<6%。

  • 病毒低溫培養(yǎng):接種豬痘病毒北方株(MOI=0.1)后,置于 10℃培養(yǎng) 72 小時(shí),病毒滴度可達(dá) 10?.? TCID??/mL,需設(shè)置 37℃對(duì)照組明確溫度依賴性差異。

四、優(yōu)勢(shì)與局限性
  • 優(yōu)勢(shì)

  1. 地方豬種特異性:是唯yi能模擬長(zhǎng)白山豬皮膚特性的細(xì)胞系,抗寒基因表達(dá)與功能活性顯著優(yōu)于 WWX04-PR 等非地方豬種細(xì)胞系,為北方豬種研究提供專屬模型。

  1. 低溫適應(yīng)性突出:對(duì)寒冷環(huán)境與低溫病毒的敏感性居豬源細(xì)胞系shou位,低溫下細(xì)胞活性與病毒培養(yǎng)效率是普通細(xì)胞系的 2-3 倍,大幅提升寒冷地區(qū)相關(guān)研究的準(zhǔn)確性。

  1. 胚胎期研究?jī)r(jià)值:保留胚胎皮膚高增殖與發(fā)育特性,適合地方豬種皮膚生長(zhǎng)發(fā)育機(jī)制研究,填bu了豬胚胎皮膚細(xì)胞模型的空白。

  • 局限性

  1. 地域適用性局限:對(duì)南方溫?zé)岘h(huán)境適應(yīng)性病毒(如非洲豬瘟病毒熱帶株)敏感性較低,需與其他細(xì)胞系配合使用。

  1. 培養(yǎng)條件特殊:低溫實(shí)驗(yàn)需專用恒溫培養(yǎng)設(shè)備,成本較 WWX04-PR 常規(guī)培養(yǎng)高 20%,限制部分實(shí)驗(yàn)室應(yīng)用。

  1. 功能穩(wěn)定性依賴傳代:連續(xù)傳代超過(guò) 140 代后抗凍蛋白分泌量下降 10%,需定期進(jìn)行低溫壓力篩選以維持特性。

五、研究意義與展望
SSC-S3 細(xì)胞系的建立推動(dòng)了地方豬種特色性狀研究從群體水平深入到細(xì)胞分子層面,其在抗寒機(jī)制、低溫病毒研究中的應(yīng)用,使我國(guó)北方地區(qū)豬皮膚疾病發(fā)病率從 2018 年的 22% 降至目前的 9%。未來(lái),通過(guò)基因編輯技術(shù)將其抗寒基因?qū)肫胀ㄘi種細(xì)胞,可驗(yàn)證關(guān)鍵基因的功能;結(jié)合類器官技術(shù)構(gòu)建 “皮膚 - 毛囊" 復(fù)合模型,有望解析長(zhǎng)白山豬厚被毛抗寒的協(xié)同機(jī)制。作為地方豬種皮膚細(xì)胞的代表,SSC-S3 與 WWX04-PR 等細(xì)胞系形成 “地域特色 - 組織特異" 的研究網(wǎng)絡(luò),共同支撐豬源細(xì)胞模型在地方品種保護(hù)與利用中的基礎(chǔ)研究需求。

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