T-47D人乳腺管癌細胞系
T-47D人乳腺管癌細胞系是探究激素依賴性乳腺管癌的核心模型，憑借高表達雌激素受體（ER）、孕激素受體（PR），以及對激素調(diào)控的高度敏感性，在乳腺管癌的激素作用機制、內(nèi)分泌治療響應(yīng)及耐藥研究中占據(jù)重要地位，為解析該類型癌癥的發(fā)生發(fā)展與治療提供了有力的實驗支撐。
來源與背景：該細胞系于 1976 年從一名 54 歲女性乳腺管癌患者的胸腔積液中成功分離建立，隸屬于 luminal 型乳腺癌細胞系。乳腺管癌作為乳腺癌中最常見的類型，約占所有乳腺癌的 70%，其中激素受體陽性的病例占比較高。T-47D 細胞系因完整保留了激素受體信號通路，成為研究激素依賴性乳腺管癌的理想模型。相較于三陰性乳腺癌細胞系（如 MDA-MB-231），它更能精準體現(xiàn)激素依賴的生長特點，尤其適用于研究雌激素在乳腺管癌發(fā)生過程中的作用機制，至今仍是該領(lǐng)域內(nèi)分泌治療研究的關(guān)鍵參照。
細胞特性：在形態(tài)上，呈現(xiàn)典型的上皮樣特征，貼壁生長且排列緊密，呈鋪路石樣，細胞多為圓形或多邊形，細胞質(zhì)豐富，細胞核大而圓，核仁清晰可見，核質(zhì)比約為 1:1.3，具備乳腺管癌細胞的典型形態(tài)。其核心特性主要有：高表達激素受體，免疫組化結(jié)果顯示，ER 陽性率高達 90%，PR 陽性率達 85%，ERα 蛋白的表達量是正常乳腺上皮細胞的 5-8 倍，對雌激素刺激極為敏感，經(jīng) 17β- 雌二醇處理后，細胞增殖速率可提升 30%；生長依賴激素，在無血清培養(yǎng)基中，添加雌激素能維持細胞增殖，一旦去除雌激素或加入抗雌激素藥物（如他mo昔芬），細胞生長會受到顯著抑制，其 IC50 值約為 0.5μM；增殖與侵襲能力，體外培養(yǎng)時，倍增時間約為 60-72 小時，克隆形成率約 40%，裸鼠皮下接種成瘤率達 100%，但成瘤速度較慢，6 周時腫瘤體積約為 0.8±0.2 cm3，Transwell 實驗顯示，其穿膜細胞數(shù)遠低于 MDA-MB-231，表明其侵襲轉(zhuǎn)移潛能較低。傳代時，需用常規(guī)消化液處理，由于細胞貼壁較牢固，消化時間需 4-5 分鐘，傳代比例為 1:3-1:5，連續(xù)傳代 50 次后，仍能保持激素受體的高表達及激素依賴特性。
培養(yǎng)條件：最適宜采用含 10% 胎牛血清的 RPMI-1640 培養(yǎng)基，并添加 1% 抗菌劑，培養(yǎng)環(huán)境需控制在 37℃、5% CO?的飽和濕度條件下。為維持細胞的激素敏感性，可在培養(yǎng)基中加入 10μg/ml 胰島素。細胞密度應(yīng)維持在 20%-70%，若密度過高，會導(dǎo)致細胞接觸抑制明顯，增殖速率下降 25%。該細胞系對激素環(huán)境較為敏感，血清中雌激素水平的波動會影響細胞生長的穩(wěn)定性。傳代時，需用含血清培養(yǎng)基終止消化，凍存液推薦使用含 10% DMSO 的胎牛血清，復(fù)蘇后細胞存活率可達 85% 以上，24 小時貼壁率超過 90%，細胞功能可恢復(fù)正常。
檢測鑒定：經(jīng)過微生物篩查，該細胞系無支原體、細菌、真菌及常見病毒污染，符合實驗細胞質(zhì)量標準。免疫細胞化學(xué)檢測顯示，ER、PR 呈強陽性，HER2 為陰性，符合 luminal A 型乳腺癌的表型?；驕y序證實存在 PIK3CA 基因突變，該突變與約 40% 的 ER 陽性乳腺癌患者情況一致，而 TP53 為野生型。染色體核型分析呈現(xiàn)亞三倍體核型，存在 1 號染色體長臂擴增、8 號染色體三體等異常，與 50% 的乳腺管癌患者遺傳學(xué)改變相吻合。功能驗證中，經(jīng)他mo昔芬處理后，細胞周期 G1 期阻滯率達 60%，充分證實了其對激素治療的敏感性。
應(yīng)用領(lǐng)域：在激素機制研究中，該細胞系被廣泛用于探究雌激素通過 ER 調(diào)控下游靶基因（如 Cyclin D1、c-Myc）的分子機制，為理解 “雌激素 - ER - 靶基因" 通路在乳腺管癌細胞增殖中的作用提供了堅實的實驗依據(jù)。在內(nèi)分泌治療研究方面，常用于評估抗雌激素藥物的療效及耐藥機制，研究發(fā)現(xiàn)，長期用他mo昔芬處理可誘導(dǎo)細胞產(chǎn)生耐藥性，耐藥細胞中 ER 共激活因子 SRC-1 的表達上調(diào) 2 倍。在藥物研發(fā)領(lǐng)域，作為篩選新型 ER 拮抗劑的模型，近期有研究發(fā)現(xiàn)，一種新型 ER 降解劑能使 T-47D 細胞的 ER 蛋白水平下降 80%，抑制率明顯高于他mo昔芬。此外，該細胞系還可用于研究激素與其他信號通路的交叉調(diào)控，研究表明，與 PI3K 抑制劑聯(lián)合使用時，對細胞增殖的抑制率從單獨用藥的 40% 提升至 70%，為聯(lián)合治療方案提供了實驗基礎(chǔ)。
與其他乳腺癌細胞系相比，T-47D 的顯著優(yōu)勢在于其擁有完整的激素受體信號通路，且對內(nèi)分泌治療敏感，能夠真實模擬激素依賴性乳腺管癌的生物學(xué)特性，為該類型癌癥的發(fā)病機制研究及內(nèi)分泌治療策略的開發(fā)提供了不可替代的實驗工具，持續(xù)推動著乳腺管癌精準診療的發(fā)展。
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