來源與轉(zhuǎn)化機(jī)制：該細(xì)胞系源自 1964 年分離的非洲綠猴腎原代細(xì)胞，通過轉(zhuǎn)染 SV40 病毒早期區(qū)域基因獲得永生化克隆。轉(zhuǎn)化過程中，SV40 大 T 抗原基因整合入宿主基因組并穩(wěn)定表達(dá)，該抗原可與 p53、Rb 等抑癌蛋白結(jié)合并使其失活，同時激活細(xì)胞周期調(diào)控通路，實(shí)現(xiàn)永生化。全基因組測序顯示其染色體數(shù)目為 60（近二倍體），與原代腎上皮細(xì)胞遺傳相似度＞95%，SV40 大 T 抗原表達(dá)陽性率達(dá) 100%（免疫熒光檢測）。

形態(tài)與增殖：體外培養(yǎng)呈典型上皮樣形態(tài)，貼壁生長時呈多邊形，胞核大而圓，細(xì)胞排列緊密呈單層；懸浮培養(yǎng)易脫落死亡，故以貼壁培養(yǎng)為主。37℃、5% CO?條件下，增殖周期約 18-22 小時，適應(yīng)含 10% 胎牛血清的 DMEM 培養(yǎng)基，傳代 50 次內(nèi)生長速率穩(wěn)定（衰減＜10%），凍存復(fù)蘇后存活率超 85%，群體倍增時間較原代腎細(xì)胞縮短 40%。

功能特征：核心優(yōu)勢在于 SV40 大 T 抗原介導(dǎo)的高效復(fù)制能力：該抗原可與含 SV40 復(fù)制起點(diǎn)（ori）的質(zhì)粒結(jié)合，啟動滾環(huán)復(fù)制，使外源基因拷貝數(shù)在轉(zhuǎn)染后 48 小時內(nèi)擴(kuò)增至 10?-10? copies/cell，瞬時表達(dá)效率較 HEK293 細(xì)胞高 2-3 倍。同時，其具備完整的蛋白加工系統(tǒng)，分泌型重組蛋白的糖基化修飾正確率達(dá) 90% 以上，且無內(nèi)源性病毒污染（經(jīng) WHO 認(rèn)證的無支原體、病毒檢測報告）。

貼壁培養(yǎng)操作：

瞬時轉(zhuǎn)染流程：

凍存流程：取對數(shù)生長期細(xì)胞，1000rpm 離心 5 分鐘，凍存液（70% DMEM+20% 胎牛血清 + 10% DMSO）重懸至 5×10?個 /mL，分裝凍存管，程序降溫盒 - 80℃過夜后移至液氮，保存期超 5 年，復(fù)蘇后需傳代 1 次再用于轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)（確保大 T 抗原表達(dá)恢復(fù)）。

優(yōu)勢：瞬時轉(zhuǎn)染效率高（＞80%），外源基因拷貝數(shù)擴(kuò)增能力強(qiáng)；蛋白表達(dá)周期短（48-72 小時），適合快速實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證；無內(nèi)源性病毒污染，生物安全性高；對多種表達(dá)載體兼容性好，無需特殊篩選標(biāo)記。

局限性：長期傳代（＞60 次）易出現(xiàn)大 T 抗原表達(dá)下調(diào)（約 20%）；懸浮培養(yǎng)能力差，難以規(guī)?；a(chǎn)；部分復(fù)雜膜蛋白的表達(dá)量較低（＜1mg/L）；存在成瘤性（裸鼠接種可形成腫瘤），操作需符合生物安全二級標(biāo)準(zhǔn)。