來源與構(gòu)建機制：該細(xì)胞系源自 Vero IgCD4 細(xì)胞，利用 CRISPR/Cas9 技術(shù)靶向切割 IgRCD4 基因的 Fc 段編碼區(qū)，經(jīng)單細(xì)胞克隆篩選獲得純合敲除株（命名中 “?" 表示受體缺失）。測序驗證顯示 IgRCD4 基因存在 2bp 移碼突變，導(dǎo)致受體表達(dá)wan全缺失（流式細(xì)胞術(shù)檢測陽性率＜0.5%），全基因組測序證實除靶位點外，與 Vero IgCD4 遺傳相似度＞99.9%，核型穩(wěn)定（2n=60），傳代 50 次無額外突變累積。

形態(tài)與增殖：體外培養(yǎng)呈典型上皮樣形態(tài)，貼壁生長時呈多角形，胞質(zhì)均勻，細(xì)胞排列密度較 Vero IgCD4 更高；懸浮培養(yǎng)適應(yīng)性差，以貼壁生長為主。37℃、5% CO?條件下，增殖周期約 28-32 小時，較 Vero IgCD4 縮短 5%-8%（因消除外源受體表達(dá)的代謝負(fù)荷），適應(yīng)含 10% 胎牛血清的 DMEM 培養(yǎng)基，傳代 60 次以上生長速率衰減＜10%，凍存復(fù)蘇后存活率超 88%。

功能特征：核心特征是 IgRCD4 受體功能缺失：無法結(jié)合 HIV-1 gp120 蛋白（ELISA 結(jié)合實驗顯示親和力較 Vero IgCD4 降低＞100 倍），HIV-1 感染后 48 小時病毒滴度＜102 TCID??/mL（僅為 Vero IgCD4 的 0.01%），且無病毒復(fù)制支持能力（p24 抗原檢測陰性）。同時，其保留 Vero 細(xì)胞固有的病毒復(fù)制 machinery，對非 CD4 依賴型病毒（如腺病毒）的敏感性與親本 Vero 一致（滴度差異＜10%），確保僅特異性缺失 CD4 介導(dǎo)的感染途徑。

貼壁培養(yǎng)操作：

病毒感染對照實驗流程：

凍存流程：取對數(shù)生長期細(xì)胞，1000rpm 離心 5 分鐘，凍存液（70% DMEM+20% 胎牛血清 + 10% DMSO）重懸至 8×10?個 /mL，分裝凍存管，程序降溫盒 - 80℃過夜后移至液氮，保存期超 5 年，復(fù)蘇后傳代 1 次即可用于實驗（無需篩選壓力）。

優(yōu)勢：IgRCD4 受體缺失徹di（陽性率＜0.5%），對照特異性強；與 Vero IgCD4 遺傳背景高度一致（差異＜0.1%），排除遺傳干擾；培養(yǎng)無需篩選藥物，操作簡便；對非 CD4 依賴型病毒敏感性正常，可同時作為多種實驗的平行對照。

局限性：僅適用于 CD4 依賴型病毒研究，應(yīng)用范圍較窄；長期傳代可能出現(xiàn)受體基因回復(fù)突變（雖概率＜0.1%，仍需定期檢測）；無法模擬天然細(xì)胞的受體動態(tài)調(diào)控（需結(jié)合原代細(xì)胞驗證）。