RLFHF大鼠肺成纖維細(xì)胞系
RLFHF大鼠肺成纖維細(xì)胞系作為源自大鼠肺間質(zhì)的成纖維細(xì)胞模型，因保留肺成纖維細(xì)胞的膠原合成功能、增殖活性及纖維化應(yīng)答特性，在肺纖維化機(jī)制、肺損傷修復(fù)及肺部炎癥研究中具有重要價(jià)值，成為探究肺間質(zhì)纖維化及相關(guān)疾病的關(guān)鍵實(shí)驗(yàn)工具。
細(xì)胞特性與來源背景：該細(xì)胞系源自大鼠肺間質(zhì)組織，經(jīng)原代培養(yǎng)和純化獲得。細(xì)胞形態(tài)呈典型的成纖維細(xì)胞樣，多為長(zhǎng)梭形或紡錘形，胞體大小均勻（長(zhǎng)度約 50-80μm，寬度約 15-20μm），胞質(zhì)呈弱嗜堿性，可見豐富的粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)和高爾基體，約 10% 細(xì)胞可見分支狀突起，細(xì)胞核呈長(zhǎng)橢圓形，位于細(xì)胞中央，核仁小而清晰。生長(zhǎng)方式為貼壁生長(zhǎng)，呈漩渦狀或平行排列，接觸抑制較弱，傳代后 24 小時(shí)貼壁率達(dá) 95%。核心參數(shù)符合肺成纖維細(xì)胞特征：倍增時(shí)間約 48 小時(shí)，連續(xù)傳代 25 次后仍保持穩(wěn)定的生物學(xué)特性；表面標(biāo)志物表達(dá)du特，α- 平滑肌肌動(dòng)蛋白（α-SMA）陽性率達(dá) 96%，波形蛋白（Vimentin）陽性率 98%，成纖維細(xì)胞特異性蛋白 1（FSP1）陽性率 95%，而上皮細(xì)胞標(biāo)志物 CK18 陽性率低于 2%；具有正常的二倍體核型（染色體數(shù) 42 條），無染色體畸變；膠原合成功能活躍，Ⅰ 型膠原蛋白分泌量達(dá) 55μg/mL，Ⅲ 型膠原蛋白分泌量達(dá) 30μg/mL；可分泌纖維化相關(guān)細(xì)胞因子，轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子 -β1（TGF-β1）基礎(chǔ)分泌量達(dá) 28pg/mL；無微生物污染，細(xì)胞純度達(dá) 97%，保障實(shí)驗(yàn)結(jié)果的可靠性。
科研應(yīng)用價(jià)值：在肺纖維化機(jī)制研究中，RLFHF 細(xì)胞經(jīng) TGF-β1（10ng/mL）處理 48 小時(shí)后，α-SMA 表達(dá)量增加 4.2 倍，Ⅰ 型膠原蛋白合成量提升 60%，細(xì)胞遷移能力增強(qiáng) 55%，可模擬纖維化過程中成纖維細(xì)胞的活化表型，為解析肺纖維化的分子機(jī)制提供理想模型。
肺損傷修復(fù)研究方面，該細(xì)胞經(jīng)脂多糖（LPS）處理后，炎癥因子 TNF-α 分泌量增加 4.8 倍，細(xì)胞增殖活性提升 50%，趨化因子 CCL2 表達(dá)量增加 4.5 倍；而經(jīng)抗炎藥物處理后，炎癥反應(yīng)強(qiáng)度下降 58%，細(xì)胞過度增殖得到抑制，可模擬肺損傷后成纖維細(xì)胞的炎癥應(yīng)答及修復(fù)過程，適用于探究肺損傷修復(fù)的調(diào)控機(jī)制。
肺部疾病研究領(lǐng)域，該細(xì)胞經(jīng)博來mei素（肺纖維化誘導(dǎo)劑）處理后，細(xì)胞外基質(zhì)沉積量增加 65%，基質(zhì)金屬蛋白酶 - 2（MMP-2）活性提升 50%，纖維化相關(guān)基因 COL1A1 表達(dá)量增加 4.2 倍，能很好地模擬肺纖維化的病理過程，為探究特發(fā)性肺纖維化等疾病的發(fā)病機(jī)制提供實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。此外，該細(xì)胞與肺上皮細(xì)胞共培養(yǎng)時(shí)，上皮細(xì)胞的纖維化因子分泌量增加 3.2 倍，可用于探究上皮 - 成纖維細(xì)胞相互作用在肺纖維化中的調(diào)控機(jī)制。
培養(yǎng)與保存規(guī)范：推薦使用含 10% 胎牛血清的 DMEM 培養(yǎng)基，添加 1% 抗生素混合液，培養(yǎng)環(huán)境為 37℃、5% CO?飽和濕度培養(yǎng)箱。培養(yǎng)基需每 2-3 天更換一次，以維持細(xì)胞的增殖活性和功能。傳代時(shí)，用 PBS 沖洗細(xì)胞 2 次，加入專用細(xì)胞解離液，37℃孵育 5-8 分鐘，待細(xì)胞間隙增大后輕輕吹打使細(xì)胞脫落，傳代比例為 1:3-1:5，每 3-4 天傳代一次，避免過度傳代導(dǎo)致功能下降。
凍存液采用培養(yǎng)基 + 10% DMSO+20% 胎牛血清的混合液，細(xì)胞濃度調(diào)整為 5×10?個(gè) /ml，經(jīng)程序降溫（-20℃1 小時(shí)→-80℃過夜→液氮保存）后，復(fù)蘇存活率達(dá) 88% 以上，2-3 代內(nèi)可恢復(fù)正常的生長(zhǎng)和功能。運(yùn)輸采用干冰冷凍運(yùn)輸或培養(yǎng)瓶活細(xì)胞運(yùn)輸，收到細(xì)胞后需靜置培養(yǎng) 24 小時(shí)，更換培養(yǎng)基后觀察細(xì)胞形態(tài)，確認(rèn)無異常漂浮物且排列規(guī)則后進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。該細(xì)胞系僅限科研使用，操作時(shí)需避免頻繁更換培養(yǎng)條件，以防影響細(xì)胞的纖維化應(yīng)答能力。
RLFHF 大鼠肺成纖維細(xì)胞系以其穩(wěn)定的成纖維細(xì)胞特性、活躍的膠原合成功能及顯著的纖維化應(yīng)答能力，在肺纖維化研究與肺部疾病治療探索中發(fā)揮著重要作用，為揭示肺纖維化的發(fā)病機(jī)制和開發(fā)抗纖維化藥物提供了可靠的細(xì)胞模型。
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