Sprague Dawley(SD)大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞系
Sprague Dawley(SD)大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞系作為從 SD 大鼠骨髓中分離純化的成體干細(xì)胞模型，因具有穩(wěn)定的增殖能力和多譜系分化潛能，在干細(xì)胞基礎(chǔ)研究及臨床前轉(zhuǎn)化應(yīng)用中占據(jù)重要地位，成為探究間充質(zhì)干細(xì)胞功能調(diào)控及組織再生機(jī)制的關(guān)鍵實(shí)驗(yàn)工具。
細(xì)胞特性與來(lái)源背景：該細(xì)胞系源自 SD 大鼠股骨與脛骨骨髓腔，經(jīng)全骨髓貼壁法結(jié)合差速傳代純化建立。原代培養(yǎng) 24 小時(shí)可見(jiàn)少量細(xì)胞貼壁，48 小時(shí)后貼壁細(xì)胞伸展為長(zhǎng)梭形，呈典型成纖維細(xì)胞樣形態(tài)，胞體均勻，突起細(xì)長(zhǎng)，細(xì)胞核呈卵圓形，核質(zhì)比適中。生長(zhǎng)方式為貼壁生長(zhǎng)，呈放射狀或柵欄狀排列，傳代后 24 小時(shí)貼壁率達(dá) 92%。核心參數(shù)表現(xiàn)出間充質(zhì)干細(xì)胞特征：倍增時(shí)間約 52 小時(shí)，連續(xù)傳代 35 次后仍保持正常二倍體核型（染色體數(shù) 42 條）；表面標(biāo)志物譜du特，CD29、CD90 免疫熒光陽(yáng)性率分別為 97% 和 95%，造血細(xì)胞標(biāo)志物 CD34、CD45 表達(dá)陰性（陽(yáng)性率 < 2%）；體外連續(xù)培養(yǎng) 50 天仍維持干細(xì)胞表型，無(wú)明顯衰老跡象；無(wú)微生物污染，細(xì)胞純度達(dá) 96%，保障實(shí)驗(yàn)結(jié)果的可靠性。
科研應(yīng)用價(jià)值：在多向分化研究中，SD 大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞展現(xiàn)出優(yōu)異的分化潛能。成骨誘導(dǎo) 14 天后，堿性磷酸酶活性較對(duì)照組升高 7.5 倍，茜素紅染色顯示大量礦化結(jié)節(jié)形成，骨橋蛋白 mRNA 表達(dá)量增加 9 倍；成脂誘導(dǎo) 12 天后，油紅 O 染色陽(yáng)性細(xì)胞率達(dá) 68%，脂聯(lián)素分泌量增加 11 倍，可wan美模擬間充質(zhì)干細(xì)胞向骨和脂肪細(xì)胞的分化過(guò)程，為干細(xì)胞命運(yùn)決定機(jī)制研究提供理想模型。
組織修復(fù)研究方面，該細(xì)胞在炎癥因子刺激下，白細(xì)胞介素 - 10（IL-10）分泌量增加 4.2 倍，腫瘤壞死因子 -α（TNF-α）抑制率達(dá) 58%，可通過(guò)免疫調(diào)節(jié)促進(jìn)組織修復(fù)。在大鼠肝纖維化模型中，輸注該細(xì)胞 4 周后，肝纖維化程度減輕 45%，白蛋白水平提升 32%；在皮膚缺損修復(fù)實(shí)驗(yàn)中，可加速創(chuàng)面愈合，上皮化率提高 38%，體現(xiàn)了其在多組織修復(fù)中的應(yīng)用潛力。
藥物篩選領(lǐng)域，該細(xì)胞對(duì)成骨誘導(dǎo)劑反應(yīng)敏感，經(jīng)地塞mi松處理后，Runx2 轉(zhuǎn)錄因子活性增強(qiáng) 6 倍，成骨分化效率提升 50%，適用于骨質(zhì)shu松治療藥物的活性評(píng)估。此外，通過(guò)基因修飾該細(xì)胞可高效表達(dá)治療性蛋白，在脊髓損傷模型中，分泌神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子的工程化細(xì)胞可促進(jìn)軸突再生，運(yùn)動(dòng)功能評(píng)分提高 40%，為細(xì)胞治療研究提供新策略。
培養(yǎng)與保存規(guī)范：推薦使用含 15% 胎牛血清的 α-MEM 培養(yǎng)基，添加 5ng/ml 堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子（bFGF）及 1% 抗生素混合液，培養(yǎng)環(huán)境為 37℃、5% CO?飽和濕度培養(yǎng)箱。培養(yǎng)基需每 3 天更換一次，換液時(shí)保留 50% 舊培養(yǎng)基以維持細(xì)胞因子微環(huán)境。
傳代時(shí)，當(dāng)細(xì)胞融合度達(dá) 70%-80% 時(shí)進(jìn)行操作，用 PBS 輕柔沖洗 2 次，加入 0.25% 胰dan白酶 - EDTA 消化液，37℃孵育 4 分鐘，待細(xì)胞邊緣收縮后加入含血清培養(yǎng)基終止消化，傳代比例 1:4-1:6，每 4-5 天傳代一次，避免過(guò)度融合導(dǎo)致分化。
凍存采用 90% 胎牛血清 + 10% DMSO 的凍存液，細(xì)胞濃度調(diào)整為 2×10?個(gè) /ml，經(jīng)程序降溫（-1℃/min）至 - 80℃，24 小時(shí)后轉(zhuǎn)入液氮保存，復(fù)蘇存活率達(dá) 88% 以上，3 代后可wan全恢復(fù)分化潛能。運(yùn)輸采用干冰冷凍運(yùn)輸或活細(xì)胞專(zhuān)用運(yùn)輸盒，收到細(xì)胞后需靜置培養(yǎng) 12 小時(shí)再換液，確保細(xì)胞狀態(tài)穩(wěn)定。該細(xì)胞系僅限科研使用，操作需符合干細(xì)胞研究倫理規(guī)范。
SD 大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞以其穩(wěn)定的生物學(xué)特性、高效的分化能力及良好的動(dòng)物模型兼容性，在再生醫(yī)學(xué)研究中具有不可替代的價(jià)值，為干細(xì)胞臨床轉(zhuǎn)化研究提供了可靠的實(shí)驗(yàn)平臺(tái)。
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