H9c2(2-1)大鼠胚胎心肌細(xì)胞系
H9c2(2-1)大鼠胚胎心肌細(xì)胞系作為源自大鼠胚胎心室肌組織的心肌樣細(xì)胞模型，因保留心肌細(xì)胞的收縮功能及電生理特性，在心肌發(fā)育機(jī)制、心肌損傷修復(fù)及心血管疾病病理研究中具有重要價(jià)值，成為探究心肌生理功能及相關(guān)疾病的關(guān)鍵實(shí)驗(yàn)工具。
細(xì)胞特性與來(lái)源背景：該細(xì)胞系源自大鼠胚胎 14 天心室肌組織，經(jīng)原代培養(yǎng)和克隆化篩選建立。細(xì)胞形態(tài)呈梭形或多角形，部分呈分支狀，胞體大小均勻（長(zhǎng)度約 50-80μm，寬度約 15-20μm），胞質(zhì)豐富且呈嗜酸性，可見大量排列整齊的肌原纖維，約 30% 細(xì)胞可形成肌管樣結(jié)構(gòu)，細(xì)胞核呈橢圓形，位于細(xì)胞中央，核仁明顯。生長(zhǎng)方式為貼壁生長(zhǎng)，呈平行排列或交織成網(wǎng)，具有一定的接觸抑制，傳代后 24 小時(shí)貼壁率達(dá) 94%。核心參數(shù)表現(xiàn)出心肌細(xì)胞特征：倍增時(shí)間約 55 小時(shí)，連續(xù)傳代 30 次后仍保持穩(wěn)定的生物學(xué)特性；表面標(biāo)志物表達(dá)du特，心肌肌動(dòng)蛋白（α-actin）陽(yáng)性率達(dá) 96%，心肌特異性肌鈣蛋白 T陽(yáng)性率 92%， connexin43 陽(yáng)性率 88%；具有正常的二倍體核型（染色體數(shù) 42 條），無(wú)染色體畸變；可自發(fā)性收縮，收縮頻率約 30-40 次 / 分鐘，在腎上腺素刺激下頻率可增加至 60 次 / 分鐘；能分泌腦鈉肽（BNP），基礎(chǔ)分泌量達(dá) 25pg/mL，在缺氧處理后分泌量增加 3.5 倍；無(wú)微生物污染，細(xì)胞純度達(dá) 97%，保障實(shí)驗(yàn)結(jié)果的可靠性。
科研應(yīng)用價(jià)值：在心肌分化研究中，H9c2 (2-1) 細(xì)胞經(jīng) 5 - 氮雜胞苷處理 7 天后，肌小節(jié)結(jié)構(gòu)成熟度提升 60%，收縮同步性增加 50%，心肌轉(zhuǎn)錄因子 GATA4 表達(dá)量增加 4.2 倍，可模擬心肌細(xì)胞的成熟分化過(guò)程，為解析心肌發(fā)育機(jī)制提供理想模型。
心肌損傷修復(fù)研究方面，該細(xì)胞經(jīng)缺氧 / 復(fù)氧處理后，乳酸脫氫酶（LDH）釋放量增加 4.5 倍，凋亡率達(dá) 38%，活性氧（ROS）水平提升 65%；而經(jīng)血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子（VEGF）處理后，細(xì)胞存活率提升 40%，抗氧化酶 SOD 活性增加 3.2 倍，可模擬心肌缺血再灌注損傷及修復(fù)過(guò)程，適用于探究心肌保護(hù)機(jī)制。
心血管疾病研究領(lǐng)域，該細(xì)胞經(jīng)高糖（30mM）處理后，細(xì)胞外基質(zhì)蛋白 fibronectin 表達(dá)量增加 2.8 倍，心肌纖維化標(biāo)志物 α-SMA 陽(yáng)性率提升 45%，可模擬糖尿病心肌病的心肌重構(gòu)過(guò)程，為探究代謝性心肌病的發(fā)病機(jī)制提供實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。此外，該細(xì)胞與心肌成纖維細(xì)胞共培養(yǎng)時(shí)，成纖維細(xì)胞的膠原分泌量增加 3 倍，可用于探究心肌細(xì)胞 - 成纖維細(xì)胞相互作用在心肌纖維化中的調(diào)控機(jī)制。
培養(yǎng)與保存規(guī)范：推薦使用含 10% 胎牛血清的 DMEM 高糖培養(yǎng)基，添加 2mM 谷an酰胺、1mM 丙酮酸鈉及 1% 抗生素混合液，培養(yǎng)環(huán)境為 37℃、5% CO?飽和濕度培養(yǎng)箱。培養(yǎng)基需每 2 天更換一次，以維持細(xì)胞的收縮功能。傳代時(shí)，用 PBS 沖洗細(xì)胞 2 次，加入 0.25% 胰dan白酶 - EDTA 混合液，37℃孵育 5-8 分鐘，待細(xì)胞間隙增大后輕輕吹打使細(xì)胞脫落，傳代比例為 1:4-1:6，每 3-4 天傳代一次，避免過(guò)度密集影響收縮特性。
凍存液采用培養(yǎng)基 + 10% DMSO+20% 胎牛血清的混合液，細(xì)胞濃度調(diào)整為 5×10?個(gè) /ml，經(jīng)程序降溫（-20℃1 小時(shí)→-80℃過(guò)夜→液氮保存）后，復(fù)蘇存活率達(dá) 86% 以上，2-3 代內(nèi)可恢復(fù)正常的生長(zhǎng)和收縮功能。運(yùn)輸采用 T-25 培養(yǎng)瓶活細(xì)胞運(yùn)輸，收到細(xì)胞后需靜置培養(yǎng) 24 小時(shí)，更換培養(yǎng)基后觀察細(xì)胞形態(tài)及收縮情況，確認(rèn)無(wú)異常漂浮物后進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。該細(xì)胞系僅限科研使用，操作時(shí)需避免頻繁振動(dòng)培養(yǎng)瓶，以防影響細(xì)胞間連接。
H9c2 (2-1) 大鼠胚胎心肌細(xì)胞系以其穩(wěn)定的心肌特性、完整的收縮功能及典型的電生理響應(yīng)，在心肌生物學(xué)研究與心血管疾病機(jī)制探索中發(fā)揮著重要作用，為揭示心肌疾病的發(fā)病機(jī)制和開發(fā)心肌保護(hù)藥物提供了可靠的細(xì)胞模型。
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