來源與亞系特征：該細(xì)胞系源自 Vero 親本細(xì)胞，通過克隆篩選獲得第 1008 代單克隆亞系（“C1008" 代表克隆傳代編號(hào)，“E6" 為功能亞型標(biāo)記）。篩選過程以 ACE2 受體表達(dá)量與冠狀病毒敏感性為核心指標(biāo)，未引入外源基因，全基因組測序顯示其染色體數(shù)目為 60（近二倍體），與 Vero 親本遺傳相似度＞99%，核型穩(wěn)定性在傳代 150 次內(nèi)畸變率＜2%，群體均一性（流式檢測 ACE2 陽性率＞98%）優(yōu)于普通 Vero 細(xì)胞。

形態(tài)與增殖：體外培養(yǎng)呈典型上皮樣形態(tài)，貼壁生長時(shí)呈多角形，胞質(zhì)均勻，細(xì)胞排列緊密呈單層；懸浮培養(yǎng)可形成小聚集體（直徑 20-40μm），但以貼壁培養(yǎng)為主。37℃、5% CO?條件下，增殖周期約 26-30 小時(shí)，適應(yīng)含 10% 胎牛血清的 DMEM/F12 培養(yǎng)基，傳代 100 次以上生長速率衰減＜10%，凍存復(fù)蘇后存活率超 90%，無血清馴化后細(xì)胞密度可達(dá) 4.5×10?個(gè) /cm2。

功能特征：核心優(yōu)勢(shì)在于 ACE2 受體高表達(dá)與病毒親和性：ACE2 蛋白表達(dá)量較 Vero E6 細(xì)胞高 1.8 倍（Western blot 定量），與 SARS-CoV-2 刺突蛋白的結(jié)合親和力（KD=1.2nM）顯著高于其他猴腎細(xì)胞系。感染 SARS-CoV-2 后 48 小時(shí)，病毒滴度可達(dá) 10?-10? TCID??/mL，較普通 Vero 細(xì)胞高 2 個(gè)數(shù)量級(jí)；細(xì)胞病變（CPE）表現(xiàn)為細(xì)胞融合、脫落，60 小時(shí)病變率達(dá) 95%，且能支持病毒連續(xù)傳代 10 次以上（滴度衰減＜30%）。

貼壁培養(yǎng)操作：

病毒培養(yǎng)流程：

凍存流程：取對(duì)數(shù)生長期細(xì)胞，1000rpm 離心 5 分鐘，凍存液（70% DMEM/F12+20% 胎牛血清 + 10% DMSO）重懸至 8×10?個(gè) /mL，分裝凍存管，程序降溫盒 - 80℃過夜后移至液氮，保存期超 6 年，復(fù)蘇后傳代 1 次即可用于實(shí)驗(yàn)（ACE2 表達(dá)穩(wěn)定）。

優(yōu)勢(shì)：ACE2 受體高表達(dá)且穩(wěn)定（傳代 100 次陽性率＞95%），對(duì)冠狀病毒敏感性ji高（滴度較普通 Vero 高 100 倍）；遺傳背景清晰，實(shí)驗(yàn)重復(fù)性好（CV＜6%）；符合 GMP 標(biāo)準(zhǔn)，無內(nèi)源性病毒污染；可適應(yīng)無血清與大規(guī)模培養(yǎng)，便于工業(yè)化生產(chǎn)；病毒復(fù)制周期短，CPE 特征典型。

局限性：對(duì)副黏病毒、腸道病毒敏感性較低；長期傳代（＞150 次）可能出現(xiàn) ACE2 表達(dá)下調(diào)（約 12%）；貼壁依賴性較強(qiáng)，懸浮培養(yǎng)聚集體易增大（＞100μm）；缺乏干擾素系統(tǒng)，可能影響藥物體內(nèi)外活性關(guān)聯(lián)分析。