目錄:上海乾思生物科技有限公司>>細(xì)胞>>細(xì)胞系>> BY-1383FRhK-4恒河猴胚腎細(xì)胞系
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來源與分化特征：該細(xì)胞系源自 20 世紀(jì) 60 年代分離的恒河猴胚胎腎組織，通過原代培養(yǎng)自然永生化獲得（“FRhK" 代表恒河猴胚腎，“4" 為克隆編號）。未引入外源轉(zhuǎn)化基因，全基因組測序顯示其染色體數(shù)目為 42（恒河猴正常核型），與原代胚腎細(xì)胞遺傳相似度＞97%，核型穩(wěn)定性在傳代 100 次內(nèi)畸變率＜3%，胚胎期特異性標(biāo)志物（如 WT1）表達(dá)陽性率達(dá) 85%（免疫組化檢測）。
形態(tài)與增殖：體外培養(yǎng)呈典型上皮樣形態(tài)，貼壁生長時呈多邊形，胞質(zhì)豐富，細(xì)胞排列疏松；懸浮培養(yǎng)可短期存活（72 小時內(nèi)），但以貼壁培養(yǎng)為主。37℃、5% CO?條件下，增殖周期約 24-28 小時，較成年猴腎細(xì)胞短 15%-20%，適應(yīng)含 10% 胎牛血清的 MEM 培養(yǎng)基，傳代 80 次以上生長速率衰減＜12%，凍存復(fù)蘇后存活率超 88%，無血清馴化后細(xì)胞密度可達(dá) 5×10?個 /cm2。
功能特征：核心優(yōu)勢在于病毒受體廣譜表達(dá)與復(fù)制支持能力：脊髓灰質(zhì)炎病毒受體（PVR）與登革病毒受體（DC-SIGN）共表達(dá)陽性率＞90%（流式檢測），對脊髓灰質(zhì)炎病毒 Ⅰ 型的感染效率達(dá) 95%，48 小時病毒滴度可達(dá) 10?-10? PFU/mL；感染登革病毒 2 型后 72 小時，細(xì)胞病變（CPE）表現(xiàn)為細(xì)胞圓縮、網(wǎng)格狀脫落，病毒滴度達(dá) 10? TCID??/mL，顯著高于 Vero 細(xì)胞（高 1-2 個數(shù)量級）。
腸道病毒與蟲媒病毒分離鑒定
減毒活疫苗研發(fā)與生產(chǎn)
抗病du藥物篩選與機(jī)制研究
貼壁培養(yǎng)操作：
復(fù)蘇：凍存管 37℃水浴 1 分鐘解凍，轉(zhuǎn)移至含 10mL 預(yù)熱培養(yǎng)基（MEM+10% 胎牛血清）的離心管，1000rpm 離心 5 分鐘，重懸后接種至 T75 瓶，37℃、5% CO?培養(yǎng)，24 小時貼壁率超 90%。
換液：接種 48 小時后首ci換液，去除代謝廢物，此后每 2 天換液一次，維持細(xì)胞密度在 2×10?-8×10?個 /cm2（密度過高會降低病毒敏感性）。
傳代：融合度達(dá) 75% 時，棄培養(yǎng)基，PBS 清洗 2 次，加 2mL 細(xì)胞解離液，37℃孵育 1.5 分鐘，鏡檢細(xì)胞脫落后加 8mL 培養(yǎng)基終止，按 1:6 比例傳代，避免過度融合導(dǎo)致胚胎特性丟失。
病毒培養(yǎng)流程：
接種準(zhǔn)備：將細(xì)胞以 1×10?個 / 孔接種 24 孔板，培養(yǎng) 24 小時至融合度 60%-70%，接種前用無血清培養(yǎng)基洗滌 2 次。
病毒感染：加入 100μL 系列稀釋的病毒液（如脊髓灰質(zhì)炎病毒懸液），37℃吸附 1 小時，期間每 15 分鐘輕搖一次，吸棄病毒液后加含 2% 血清的維持液。
觀察與收獲：脊髓灰質(zhì)炎病毒感染后 48 小時觀察 CPE，登革病毒感染后 72 小時觀察，待 80% 細(xì)胞病變時收獲上清，-80℃凍存，通過空斑法或 RT-PCR 測定病毒滴度。
凍存流程：取對數(shù)生長期細(xì)胞，1000rpm 離心 5 分鐘，凍存液（70% MEM+20% 胎牛血清 + 10% DMSO）重懸至 6×10?個 /mL，分裝凍存管，程序降溫盒 - 80℃過夜后移至液氮，保存期超 5 年，復(fù)蘇后傳代 2 次再用于病毒實(shí)驗(yàn)（確保受體表達(dá)穩(wěn)定）。
優(yōu)勢：對脊髓灰質(zhì)炎病毒、登革病毒敏感性ji高（滴度較普通猴腎細(xì)胞高 1-2 個數(shù)量級）；保留胚胎細(xì)胞特性，病毒復(fù)制效率高；遺傳背景穩(wěn)定，實(shí)驗(yàn)重復(fù)性好（CV＜7%）；符合 WHO 疫苗生產(chǎn)標(biāo)準(zhǔn)，安全性已通過長期驗(yàn)證；可同時支持多種病毒復(fù)制，適用于廣譜研究。
局限性：對冠狀病毒等包膜病毒敏感性較低；長期傳代（＞100 次）可能出現(xiàn)胚胎標(biāo)志物表達(dá)下調(diào)（約 15%）；貼壁依賴性強(qiáng)，懸浮培養(yǎng)難度高于 CHO 細(xì)胞；部分批次可能攜帶內(nèi)源性逆轉(zhuǎn)錄病毒（需通過 PCR 篩選陰性株）。
FRhK-4 細(xì)胞系的應(yīng)用為*消滅脊髓灰質(zhì)炎計劃提供了核心技術(shù)支撐，其高效分離能力使野毒株檢出靈敏度提升 50%，直接助力*脊髓灰質(zhì)炎病例減少 99.9%（WHO 數(shù)據(jù)）。在基礎(chǔ)研究中，其揭示了胚胎腎細(xì)胞te有的病毒受體表達(dá)譜與病毒嗜性的關(guān)聯(lián)；在公共衛(wèi)生領(lǐng)域，其支撐了數(shù)十億劑口服脊髓灰質(zhì)炎疫苗的生產(chǎn)，同時為登革熱等熱帶傳染病的防控提供關(guān)鍵研究工具，是連接胚胎細(xì)胞生物學(xué)與病毒學(xué)應(yīng)用的重要橋梁。
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