RNTEC/HL-026大鼠正常胸腺上皮細(xì)胞系
RNTEC/HL-026大鼠正常胸腺上皮細(xì)胞系作為源自大鼠胸腺皮質(zhì)區(qū)的正常上皮細(xì)胞模型，因保留胸腺上皮的免疫調(diào)節(jié)功能及胸腺細(xì)胞培育特性，在胸腺發(fā)育機(jī)制、T 細(xì)胞成熟調(diào)控及自身免疫病病理研究中具有重要價(jià)值，成為探究胸腺免疫功能的關(guān)鍵實(shí)驗(yàn)工具。
細(xì)胞特性與來源背景：該細(xì)胞系源自大鼠胸腺皮質(zhì)組織，經(jīng)原代培養(yǎng)和純化獲得。細(xì)胞形態(tài)呈上皮樣，多為多邊形或不規(guī)則星形，胞體大小均勻（直徑約 18-22μm），胞質(zhì)豐富且呈嗜堿性，可見細(xì)長的胞質(zhì)突起相互連接形成網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)，細(xì)胞核呈圓形或橢圓形，位于細(xì)胞中央，核仁清晰可見。生長方式為貼壁生長，呈單層網(wǎng)狀排列，具有明顯的接觸抑制現(xiàn)象，傳代后 24 小時貼壁率達(dá) 91%。核心參數(shù)表現(xiàn)出正常胸腺上皮細(xì)胞特征：倍增時間約 80 小時，連續(xù)傳代 12 次后仍保持穩(wěn)定的生物學(xué)特性；表面標(biāo)志物表達(dá)du特，細(xì)胞角蛋白 8（CK8）陽性率達(dá) 95%，胸腺上皮細(xì)胞標(biāo)志物細(xì)胞間黏附分子 - 1（ICAM-1）陽性率 93%，上皮細(xì)胞黏附分子（EpCAM）陽性率 90%；具有正常的二倍體核型（染色體數(shù) 42 條），無染色體畸變；能分泌胸xian素 α1，基礎(chǔ)分泌量達(dá) 35ng/mL，白細(xì)胞介素 - 7（IL-7）分泌量達(dá) 28pg/mL；與胸腺細(xì)胞共培養(yǎng)時，可誘導(dǎo) CD4?CD8?雙陽性 T 細(xì)胞比例達(dá) 45%；無微生物污染，細(xì)胞純度達(dá) 96%，保障實(shí)驗(yàn)結(jié)果的可靠性。
科研應(yīng)用價(jià)值：在 T 細(xì)胞成熟研究中，RNTEC/HL-026 細(xì)胞與骨髓來源的造血干細(xì)胞共培養(yǎng) 7 天后，CD4?CD8?雙陽性 T 細(xì)胞比例提升至 42%，T 細(xì)胞受體（TCR）重排效率增加 3.8 倍，可模擬胸腺皮質(zhì)中 T 細(xì)胞的陽性選擇過程，為解析 T 細(xì)胞發(fā)育成熟機(jī)制提供理想模型。
自身免疫病研究方面，該細(xì)胞經(jīng)干擾素 -γ（IFN-γ）處理后，組織相容性復(fù)合體 Ⅱ 類分子（MHC-Ⅱ）表達(dá)量增加 4.2 倍，自身抗原呈遞能力提升 60%，與 T 細(xì)胞共培養(yǎng)時可誘導(dǎo)自身反應(yīng)性 T 細(xì)胞增殖率增加 2.5 倍，可模擬自身免疫病中胸腺免疫耐受破壞的過程，適用于探究系統(tǒng)性紅斑狼瘡等疾病的發(fā)病機(jī)制。
胸腺衰老研究領(lǐng)域，該細(xì)胞在體外連續(xù)培養(yǎng) 15 代后，端粒長度縮短 28%，胸xian素 α1 分泌量下降 40%，IL-7 表達(dá)量減少 35%，能很好地模擬衰老過程中胸腺功能退化的特征，為評估延緩胸腺衰老藥物的療效提供實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。此外，該細(xì)胞與樹突狀細(xì)胞共培養(yǎng)時，樹突狀細(xì)胞成熟標(biāo)志物 CD86 表達(dá)量增加 3.2 倍，可用于探究胸腺微環(huán)境中免疫細(xì)胞的相互調(diào)控機(jī)制。
培養(yǎng)與保存規(guī)范：推薦使用含 10% 胎牛血清的 DMEM/F12 培養(yǎng)基，添加 20ng/mL 成纖維細(xì)胞生長因子（FGF）、5ng/mL 白細(xì)胞介素 - 7（IL-7）及 1% 抗生素混合液，培養(yǎng)環(huán)境為 37℃、5% CO?飽和濕度培養(yǎng)箱。培養(yǎng)基需每 3 天更換一次，以維持細(xì)胞的免疫調(diào)節(jié)功能。傳代時，用 PBS 沖洗細(xì)胞 2 次，加入專用細(xì)胞解離液，37℃孵育 12-15 分鐘，待細(xì)胞間隙增大后輕輕吹打使細(xì)胞脫落，傳代比例為 1:2，每 7-8 天傳代一次，避免過度傳代導(dǎo)致分泌功能下降。
凍存液采用培養(yǎng)基 + 10% DMSO+20% 胎牛血清的混合液，細(xì)胞濃度調(diào)整為 1.5×10?個 /ml，經(jīng)程序降溫（-20℃1 小時→-80℃過夜→液氮保存）后，復(fù)蘇存活率達(dá) 83% 以上，3-4 代內(nèi)可恢復(fù)正常的生長和分泌功能。運(yùn)輸采用干冰冷凍運(yùn)輸或培養(yǎng)瓶活細(xì)胞運(yùn)輸，收到細(xì)胞后需靜置培養(yǎng) 24 小時，更換培養(yǎng)基后觀察細(xì)胞形態(tài)，確認(rèn)無異常漂浮物且網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)完整后進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。該細(xì)胞系僅限科研使用，操作時需避免頻繁振動培養(yǎng)瓶，以防胞質(zhì)突起斷裂。
RNTEC/HL-026 大鼠正常胸腺上皮細(xì)胞系以其穩(wěn)定的胸腺上皮特性、強(qiáng)大的 T 細(xì)胞培育能力及免疫調(diào)節(jié)功能，在胸腺生物學(xué)研究與免疫相關(guān)疾病機(jī)制探索中發(fā)揮著重要作用，為揭示胸腺免疫功能及開發(fā)免疫調(diào)節(jié)藥物提供了可靠的細(xì)胞模型。
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