IEC-6大鼠小腸上皮細(xì)胞系
IEC-6大鼠小腸上皮細(xì)胞系作為源自大鼠小腸隱窩的正常上皮細(xì)胞模型，因保留小腸上皮的增殖分化特性及物質(zhì)吸收功能，在腸黏膜屏障穩(wěn)態(tài)、營(yíng)養(yǎng)吸收機(jī)制及腸道疾病病理研究中具有重要價(jià)值，成為探究小腸上皮生理功能及相關(guān)疾病的關(guān)鍵實(shí)驗(yàn)工具。
細(xì)胞特性與來(lái)源背景：該細(xì)胞系源自大鼠小腸上段隱窩組織，經(jīng)原代培養(yǎng)和純化獲得。細(xì)胞形態(tài)呈上皮樣，多為立方形或短柱狀，胞體大小均勻（直徑約 14-18μm），胞質(zhì)豐富且呈嗜酸性，可見(jiàn)較多的線粒體和內(nèi)質(zhì)網(wǎng)，約 12% 細(xì)胞可見(jiàn)刷狀緣結(jié)構(gòu)，細(xì)胞核呈圓形或橢圓形，位于細(xì)胞基底部，核仁清晰。生長(zhǎng)方式為貼壁生長(zhǎng)，呈單層鋪路石樣排列，具有明顯的接觸抑制現(xiàn)象，傳代后 24 小時(shí)貼壁率達(dá) 92%。核心參數(shù)表現(xiàn)出正常小腸上皮細(xì)胞特征：倍增時(shí)間約 62 小時(shí)，連續(xù)傳代 18 次后仍保持穩(wěn)定的生物學(xué)特性；表面標(biāo)志物表達(dá)du特，細(xì)胞角蛋白 18（CK18）陽(yáng)性率達(dá) 95%，小腸上皮標(biāo)志物絨毛蛋白（villin）陽(yáng)性率 93%，上皮細(xì)胞黏附分子（EpCAM）陽(yáng)性率 91%；具有正常的二倍體核型（染色體數(shù) 42 條），無(wú)染色體畸變；細(xì)胞間連接緊密，緊密連接蛋白 ZO-1、occludin 表達(dá)豐富，跨上皮電阻值達(dá) 350Ω?cm2；能主動(dòng)吸收葡萄糖和氨基酸，葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)速率達(dá) 32nmol/(h?mg 蛋白)；可分泌腸三葉因子（TFF3），基礎(chǔ)分泌量達(dá) 38ng/mL；無(wú)微生物污染，細(xì)胞純度達(dá) 96%，保障實(shí)驗(yàn)結(jié)果的可靠性。
科研應(yīng)用價(jià)值：在腸黏膜修復(fù)研究中，IEC-6 細(xì)胞經(jīng)表皮生長(zhǎng)因子（EGF）處理 48 小時(shí)后，遷移速率增加 58%，增殖活性提升 45%，絨毛蛋白表達(dá)量增加 3.2 倍，可模擬小腸黏膜損傷后的修復(fù)過(guò)程，為解析腸上皮再生機(jī)制提供理想模型。
在營(yíng)養(yǎng)吸收機(jī)制研究方面，該細(xì)胞經(jīng)胰島素處理后，葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白 GLUT2 表達(dá)量增加 4.2 倍，葡萄糖吸收速率提升 60%，氨基酸轉(zhuǎn)運(yùn)體 B?AT1 表達(dá)量增加 3.5 倍，可模擬胰島素對(duì)小腸營(yíng)養(yǎng)吸收的調(diào)控過(guò)程，適用于探究營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)吸收的分子機(jī)制。
腸道疾病研究領(lǐng)域，該細(xì)胞經(jīng)脂多糖（LPS）處理后，炎癥因子 IL-6 分泌量增加 4.5 倍，腫瘤壞死因子 -α（TNF-α）表達(dá)量提升 3.8 倍，緊密連接蛋白 occludin 表達(dá)量下降 40%，能很好地模擬腸道感染引起的黏膜屏障破壞，為評(píng)估腸道抗炎藥物的療效提供實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。此外，該細(xì)胞與腸道菌群共培養(yǎng)時(shí)，乳酸桿菌可使細(xì)胞的緊密連接蛋白表達(dá)量增加 30%，炎癥因子分泌量減少 25%，可用于探究腸道菌群與腸上皮的相互作用機(jī)制。
培養(yǎng)與保存規(guī)范：推薦使用含 10% 胎牛血清的 DMEM 培養(yǎng)基，添加 0.1U/mL 胰島素、2mM 谷an酰胺及 1% 抗生素混合液，培養(yǎng)環(huán)境為 37℃、5% CO?飽和濕度培養(yǎng)箱。培養(yǎng)基需每 2-3 天更換一次，以維持細(xì)胞的正常功能。傳代時(shí)，用 PBS 沖洗細(xì)胞 2 次，加入 0.25% 胰dan白酶 - EDTA 混合液，37℃孵育 8-10 分鐘，待細(xì)胞間隙增大后輕輕吹打使細(xì)胞脫落，傳代比例為 1:3-1:4，每 5-6 天傳代一次，避免過(guò)度傳代導(dǎo)致分化能力下降。
凍存液采用培養(yǎng)基 + 10% DMSO+20% 胎牛血清的混合液，細(xì)胞濃度調(diào)整為 3×10?個(gè) /ml，經(jīng)程序降溫（-20℃1 小時(shí)→-80℃過(guò)夜→液氮保存）后，復(fù)蘇存活率達(dá) 85% 以上，2-3 代內(nèi)可恢復(fù)正常的生長(zhǎng)和吸收功能。運(yùn)輸采用干冰冷凍運(yùn)輸或培養(yǎng)瓶活細(xì)胞運(yùn)輸，收到細(xì)胞后需靜置培養(yǎng) 24 小時(shí)，更換培養(yǎng)基后觀察細(xì)胞形態(tài)，確認(rèn)無(wú)異常漂浮物且排列整齊后進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。該細(xì)胞系僅限科研使用，操作時(shí)需避免頻繁更換培養(yǎng)條件，以防影響其吸收功能。
IEC-6 大鼠小腸上皮細(xì)胞系以其穩(wěn)定的小腸上皮特性、完整的吸收功能及典型的黏膜屏障構(gòu)建能力，在腸道生物學(xué)研究與腸道疾病機(jī)制探索中發(fā)揮著重要作用，為揭示腸道疾病的發(fā)病機(jī)制和開(kāi)發(fā)新型治療藥物提供了可靠的細(xì)胞模型。
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