目錄:上海乾思生物科技有限公司>>細(xì)胞>>細(xì)胞系>> BY-1366CHL中國(guó)倉(cāng)鼠肺細(xì)胞系
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更新時(shí)間:2025-08-08 09:57:04瀏覽次數(shù):300評(píng)價(jià)
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來(lái)源與永生化:該細(xì)胞系源自中國(guó)倉(cāng)鼠胚胎肺組織,經(jīng)原代分離與連續(xù)傳代獲得。原代細(xì)胞通過(guò)組織塊培養(yǎng)法獲取,經(jīng) 30 代傳代篩選出增殖穩(wěn)定的克隆,命名為 CHL(Chinese Hamster Lung 縮寫)。永生化過(guò)程未引入外源基因,僅通過(guò)體外培養(yǎng)壓力自然篩選,全基因組測(cè)序顯示與原代細(xì)胞遺傳相似度>98%,核型分析證實(shí)染色體數(shù)目穩(wěn)定(2n=22),無(wú)顯著核型異常。
形態(tài)與增殖:體外培養(yǎng)呈典型成纖維樣,貼壁生長(zhǎng)時(shí)呈長(zhǎng)梭形,胞質(zhì)伸展明顯,排列呈放射狀或漩渦狀;懸浮培養(yǎng)適應(yīng)性差,以貼壁生長(zhǎng)為主。37℃、5% CO?條件下,增殖周期約 28-32 小時(shí),適應(yīng)含 10% 胎牛血清的 MEM 培養(yǎng)基,傳代 100 次以上生長(zhǎng)速率衰減<7%,染色體畸變率<1%,凍存復(fù)蘇后存活率超 86%。
功能特征:核心優(yōu)勢(shì)在于染色體穩(wěn)定性與毒性敏感性:核型顯示染色體大小均一、著絲粒清晰,便于觀察斷裂、易位等畸變;對(duì)遺傳毒性物質(zhì)(如烷化劑、紫外線)響應(yīng)靈敏,陽(yáng)性對(duì)照物(如絲裂mei素 C)可誘導(dǎo)畸變率提升 8-12 倍,背景畸變率<0.5%,符合 OECD 473 測(cè)試指南。同時(shí),膠原蛋白 Ⅰ 型分泌量達(dá)總蛋白 12%-15%,保留成纖維細(xì)胞基質(zhì)合成功能。
遺傳毒性與致突變性測(cè)試
細(xì)胞毒性與增殖抑制分析
成纖維細(xì)胞功能研究
貼壁培養(yǎng)操作:
復(fù)蘇:凍存管 37℃水浴解凍,轉(zhuǎn)移至含 10mL 預(yù)熱培養(yǎng)基(MEM+10% 胎牛血清)的離心管,1000rpm 離心 5 分鐘,接種至 T75 瓶,37℃、5% CO?培養(yǎng),24 小時(shí)貼壁率超 90%。
換液:接種 48 小時(shí)后首ci換液,去除未貼壁細(xì)胞與代謝廢物,此后每 3 天換液一次,維持 pH 7.2-7.4(酚紅呈橙紅色)。
傳代:融合度達(dá) 80%-90% 時(shí),棄培養(yǎng)基,PBS 清洗 2 次,加 2mL 細(xì)胞解離液,37℃孵育 2-3 分鐘,鏡檢細(xì)胞脫落后加 8mL 培養(yǎng)基終止,按 1:4 傳代,避免過(guò)度融合。
染色體畸變測(cè)試流程:
細(xì)胞準(zhǔn)備:對(duì)數(shù)期細(xì)胞以 5×10?個(gè) / 孔接種 6 孔板,培養(yǎng) 24 小時(shí)同步化。
受試物處理:加不同濃度受試物,設(shè)陰性對(duì)照(溶劑)與陽(yáng)性對(duì)照(絲裂mei素 C 0.1μg/mL),培養(yǎng) 24-48 小時(shí)(依代謝特性調(diào)整)。
制片觀察:收獲前 4 小時(shí)加秋水仙素(0.1μg/mL),細(xì)胞經(jīng)低滲(0.075M KCl)、固定(甲醇:冰醋酸 = 3:1)后制片,Giemsa 染色,每樣本觀察 100 個(gè)中期分裂相,統(tǒng)計(jì)畸變率。
凍存流程:對(duì)數(shù)期細(xì)胞 1000rpm 離心 5 分鐘,凍存液(70% MEM+20% 胎牛血清 + 10% DMSO)重懸至 5×10?個(gè) /mL,分裝凍存管,程序降溫盒 - 80℃過(guò)夜后移至液氮,保存期超 5 年,復(fù)蘇后傳代 2 次恢復(fù)狀態(tài)。
優(yōu)勢(shì):成纖維樣形態(tài)典型,易觀察;染色體核型穩(wěn)定(2n=22),畸變分析準(zhǔn)確;對(duì)遺傳毒性物質(zhì)敏感,符合國(guó)際標(biāo)準(zhǔn);傳代穩(wěn)定,100 代內(nèi)特性無(wú)顯著改變;培養(yǎng)簡(jiǎn)便,成本低于腫瘤細(xì)胞系。
局限性:成纖維細(xì)胞特性限制上皮細(xì)胞相關(guān)研究;對(duì)部分脂溶性受試物吸收差(需助溶劑);傳代>120 次可能出現(xiàn)核型漂移(畸變率升至 2%-3%),需定期純化。
CHL 細(xì)胞系為遺傳毒性評(píng)估提供了標(biāo)準(zhǔn)化工具,其穩(wěn)定核型與敏感響應(yīng)推動(dòng)了化學(xué)品安全評(píng)價(jià)體系發(fā)展。基礎(chǔ)研究中,助力闡明成纖維細(xì)胞增殖調(diào)控與染色體穩(wěn)定性機(jī)制;應(yīng)用領(lǐng)域,作為國(guó)際認(rèn)可模型支撐數(shù)千種化學(xué)品、藥品的安全性評(píng)估,尤其在環(huán)境污染物監(jiān)測(cè)與新藥早期篩選中作用關(guān)鍵,是連接實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)與實(shí)際風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估的重要橋梁。
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