RNCEC/HL-028大鼠正常結(jié)腸上皮細胞系
RNCEC/HL-028大鼠正常結(jié)腸上皮細胞系作為源自大鼠結(jié)腸黏膜組織的正常上皮細胞模型，因保留結(jié)腸上皮的屏障功能及物質(zhì)吸收特性，在結(jié)腸黏膜穩(wěn)態(tài)維持、腸道炎癥機制及結(jié)直腸癌變早期研究中具有重要價值，成為探究結(jié)腸上皮生理功能及相關(guān)疾病的關(guān)鍵實驗工具。
細胞特性與來源背景：該細胞系源自大鼠結(jié)腸中段黏膜組織，經(jīng)原代培養(yǎng)和純化獲得。細胞形態(tài)呈柱狀，部分呈高柱狀，胞體大小均勻（直徑約 12-16μm，長度約 20-25μm），胞質(zhì)豐富且呈弱嗜酸性，可見散在的吸收小泡，約 10% 細胞可見刷狀緣結(jié)構(gòu)，細胞核呈橢圓形，位于細胞基底部，核仁不明顯。生長方式為貼壁生長，呈單層有序排列，具有明顯的接觸抑制現(xiàn)象，傳代后 24 小時貼壁率達 93%。核心參數(shù)表現(xiàn)出正常結(jié)腸上皮細胞特征：倍增時間約 75 小時，連續(xù)傳代 16 次后仍保持穩(wěn)定的生物學(xué)特性；表面標志物表達du特，細胞角蛋白 20（CK20）陽性率達 96%，上皮細胞黏附分子（EpCAM）陽性率 95%，緊密連接蛋白 ZO-1 陽性率 94%；具有正常的二倍體核型（染色體數(shù) 42 條），無染色體畸變；細胞間連接緊密，跨上皮電阻值達 400Ω?cm2，能有效阻擋大分子物質(zhì)透過；可吸收葡萄糖和短鏈脂肪酸，葡萄糖轉(zhuǎn)運速率達 25nmol/(h?mg 蛋白)；無微生物污染，細胞純度達 97%，保障實驗結(jié)果的可靠性。
科研應(yīng)用價值：在結(jié)腸黏膜屏障功能研究中，RNCEC/HL-028 細胞經(jīng)脂多糖（LPS）處理 24 小時后，跨上皮電阻值下降 45%，緊密連接蛋白 occludin 表達量減少 40%，炎癥因子 IL-1β 分泌量增加 4.2 倍，可模擬腸道感染時結(jié)腸屏障的損傷過程，為解析腸道屏障破壞機制提供理想模型。
在腸道炎癥研究方面，該細胞經(jīng)腫瘤壞死因子 -α（TNF-α）處理 48 小時后，凋亡率增加 35%，黏膜修復(fù)相關(guān)因子 TGF-β1 表達量提升 50%，遷移速率增加 55%，可模擬潰瘍性結(jié)腸炎中結(jié)腸上皮的損傷與修復(fù)過程，適用于探究腸道炎癥的發(fā)病機制及評估抗炎藥物療效。
結(jié)直腸癌變早期研究領(lǐng)域，該細胞經(jīng)氧化偶氮甲烷（AOM）處理后，增殖標志物 Ki67 陽性率增加至 42%，抑癌基因 p53 表達量下降 38%，細胞形態(tài)出現(xiàn)輕度異型性，能很好地模擬結(jié)直腸癌變早期的細胞變化，為篩選結(jié)直腸癌早期預(yù)警標志物提供實驗基礎(chǔ)。此外，該細胞與腸道菌群共培養(yǎng)時，乳酸桿菌可使細胞的緊密連接蛋白表達量增加 30%，炎癥因子分泌量減少 25%，可用于探究腸道菌群與結(jié)腸上皮的相互作用機制。
培養(yǎng)與保存規(guī)范：推薦使用含 10% 胎牛血清的 DMEM/Ham's F-12 培養(yǎng)基，添加 20ng/mL 表皮生長因子（EGF）、1% 胰島素 - 轉(zhuǎn)鐵蛋白 - 硒混合液及 1% 抗生素混合液，培養(yǎng)環(huán)境為 37℃、5% CO?飽和濕度培養(yǎng)箱。培養(yǎng)基需每 2-3 天更換一次，以維持細胞的正常功能。傳代時，用 PBS 沖洗細胞 2 次，加入專用細胞解離液，37℃孵育 10-12 分鐘，待細胞間隙增大后輕輕吹打使細胞脫落，傳代比例為 1:2-1:3，每 7-8 天傳代一次，避免過度傳代導(dǎo)致刷狀緣結(jié)構(gòu)減少。
凍存液采用培養(yǎng)基 + 10% DMSO+20% 胎牛血清的混合液，細胞濃度調(diào)整為 2×10?個 /ml，經(jīng)程序降溫（-20℃1 小時→-80℃過夜→液氮保存）后，復(fù)蘇存活率達 85% 以上，3-4 代內(nèi)可恢復(fù)正常的生長和吸收功能。運輸采用干冰冷凍運輸或培養(yǎng)瓶活細胞運輸，收到細胞后需靜置培養(yǎng) 24 小時，更換培養(yǎng)基后觀察細胞形態(tài)，確認無異常漂浮物且排列整齊后進行實驗。該細胞系僅限科研使用，操作時需避免頻繁擾動培養(yǎng)瓶，以防影響細胞極性。
RNCEC/HL-028 大鼠正常結(jié)腸上皮細胞系以其穩(wěn)定的結(jié)腸上皮特性、完整的屏障功能及正常的物質(zhì)吸收能力，在結(jié)腸生物學(xué)研究與腸道疾病機制探索中發(fā)揮著重要作用，為揭示腸道疾病的發(fā)病機制和開發(fā)新型治療藥物提供了可靠的細胞模型。
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