來(lái)源與馴化：該細(xì)胞系源自 1957 年分離的中國(guó)倉(cāng)鼠卵巢組織，經(jīng)克隆篩選獲得第 1 株穩(wěn)定傳代的亞系（“K1" 代表克隆編號(hào)）。原代細(xì)胞通過(guò)yi酶消化法分離，經(jīng) 60 代連續(xù)傳代后形成永生化株系，未引入外源基因，全基因組測(cè)序顯示其染色體數(shù)目為 2n=20-22（存在天然異倍性），與原代卵巢細(xì)胞遺傳相似度＞96%，核型穩(wěn)定性在傳代 100 次內(nèi)畸變率＜3%。

形態(tài)與增殖：體外培養(yǎng)呈典型上皮樣形態(tài)，貼壁生長(zhǎng)時(shí)呈多角形，胞質(zhì)豐富且邊界清晰，排列緊密呈鋪路石狀；懸浮培養(yǎng)可形成松散聚集體（直徑 20-50μm），適應(yīng)無(wú)血清懸浮馴化。37℃、5% CO?條件下，增殖周期約 18-22 小時(shí)，較其他 CHO 亞系更短，適應(yīng)含 10% 胎牛血清的 DMEM/F12 培養(yǎng)基，傳代 200 次以上生長(zhǎng)速率衰減＜15%，凍存復(fù)蘇后存活率超 90%。

功能特征：核心優(yōu)勢(shì)在于全能性蛋白表達(dá)與修飾系統(tǒng)：具備完整的糖基化、磷酸化等翻譯后修飾 machinery，重組蛋白產(chǎn)物與天然蛋白結(jié)構(gòu)一致性達(dá) 95% 以上；無(wú) DHFR（二氫ye酸還原酶）等代謝缺陷，可直接在基礎(chǔ)培養(yǎng)基中生長(zhǎng)，外源基因整合效率較 CHO-S 高 20%。同時(shí)，其對(duì)基因編輯工具（如 CRISPR/Cas9）響應(yīng)靈敏，突變效率可達(dá) 35%-50%，便于構(gòu)建工程細(xì)胞株。

貼壁培養(yǎng)操作：

懸浮馴化流程：

凍存流程：取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期細(xì)胞，1000rpm 離心 5 分鐘，凍存液（70% 培養(yǎng)基 + 20% 胎牛血清 + 10% DMSO）重懸至 1×10?個(gè) /mL，分裝凍存管，程序降溫盒 - 80℃過(guò)夜后移至液氮，保存期超 7 年，復(fù)蘇后傳代 1 次即可用于實(shí)驗(yàn)。

優(yōu)勢(shì)：遺傳背景清晰，無(wú)天然代謝缺陷；蛋白表達(dá)量高（5-8g/L）且翻譯后修飾接近人源；適應(yīng)貼壁與懸浮培養(yǎng)，可規(guī)?；糯螅换蚓庉嬓矢?，便于工程改造；傳代穩(wěn)定性優(yōu)異，200 代內(nèi)特性無(wú)顯著改變。

局限性：部分復(fù)雜糖蛋白（如含多天線高甘露糖型）表達(dá)效率低；懸浮培養(yǎng)時(shí)易形成大聚集體（＞100μm），影響傳質(zhì)效率；長(zhǎng)期傳代可能積累隨機(jī)突變（＞200 代），需定期純化克隆。