來源與構建：該細胞系以 CHO-K1 為親本，通過電穿孔轉染將含 E2 全長基因的表達載體導入細胞基因組，經 G418 抗性篩選及單克隆純化獲得穩(wěn)定株。E2 基因由 CMV 啟動子驅動表達，編碼序列源自病毒包膜蛋白（如丙型肝炎病毒、冠狀病毒），未添加任何標簽序列，名稱中 “E2" 直接標識其表達的核心功能蛋白 —— 未經修飾的天然病毒抗原。構建過程中優(yōu)化了信號肽序列，確保 E2 蛋白高效分泌至培養(yǎng)基（分泌效率達 85% 以上），且折疊構象與天然病毒顆粒上的 E2 蛋白一致性達 90% 以上（圓二色譜檢測）。

形態(tài)與增殖：體外培養(yǎng)呈典型上皮樣形態(tài)，貼壁生長時呈多角形，排列規(guī)則；懸浮培養(yǎng)形成直徑 25-60μm 的聚集體，細胞輪廓清晰，活力長期維持在 90% 以上。37℃、5% CO?條件下，增殖周期約 30-36 小時，兼容含 10% 胎牛血清的 DMEM 培養(yǎng)基與多種無血清化學限定培養(yǎng)基，傳代 80 次以上仍保持穩(wěn)定生長速率，E2 蛋白表達量波動＜10%，凍存復蘇后存活率超 87%。

功能特征：該細胞系的核心優(yōu)勢在于 E2 蛋白的天然性：與融合蛋白相比，其表達的 E2 無 Fc 段或 His 標簽干擾，完整保留病毒抗原的原始表位（ELISA 檢測與天然病毒 E2 的交叉反應率＞98%）。流式細胞術顯示，僅 5% 以下的 E2 蛋白滯留于細胞表面，95% 以上分泌至培養(yǎng)基，且蛋白三聚體比例達 30%-40%（接近天然病毒包膜上的聚合狀態(tài)），為研究 E2 的多聚體功能提供了理想材料。

貼壁培養(yǎng)操作：

懸浮培養(yǎng)與蛋白純化：

凍存流程：取對數(shù)生長期細胞，1000rpm 離心 5 分鐘，用凍存液（80% 無血清培養(yǎng)基 + 10% 胎牛血清 + 10% DMSO）重懸至 5×10?個 /mL，分裝至凍存管，程序降溫盒 - 80℃過夜，次日轉移至液氮保存，保存期可達 5 年以上，復蘇后需在含 G418 的培養(yǎng)基中培養(yǎng) 2-3 代以穩(wěn)定表達。

優(yōu)勢：E2 蛋白保留天然構象與表位，免疫原性分析更真實；無標簽干擾，適合表位 mapping 與抗體特異性驗證；分泌效率高，懸浮培養(yǎng)表達量達 4-7g/L；蛋白聚合狀態(tài)接近天然病毒，功能研究可靠性強。

局限性：無標簽導致純化步驟較融合蛋白復雜（需特異性抗體親和柱）；部分 E2 蛋白可能形成錯誤折疊（約 5%-8%），需通過分子篩去除；因無 Fc 段穩(wěn)定作用，體外半衰期較 E2-Fc 短（4℃保存 7 天活性保留 80%）。