來源與構建：該細胞系以 CHO-S 為親本，通過慢病毒載體介導將 E2-Fc 融合基因?qū)爰毎蚪M，經(jīng) Zeocin 抗性篩選及單克隆純化獲得穩(wěn)定株。融合基因由 EF1α 啟動子驅(qū)動表達，E2 片段源自病毒包膜蛋白（如丙型肝炎病毒或冠狀病毒），C 端連接人 IgG1 的 Fc 段，名稱中 “E2-Fc" 直接標識其表達的核心功能蛋白 —— 兼具 E2 免疫原性與 Fc 段穩(wěn)定性的融合分子。構建過程中引入信號肽優(yōu)化序列，確保蛋白高效分泌至培養(yǎng)基（分泌效率達 90% 以上）。

形態(tài)與增殖：體外培養(yǎng)呈上皮樣形態(tài)，貼壁生長時呈多角形，排列緊密；懸浮培養(yǎng)可形成直徑 20-50μm 的松散聚集體，細胞輪廓清晰，活力長期維持在 92% 以上。37℃、5% CO?條件下，增殖周期約 30-36 小時，適應含 10% 胎牛血清的 DMEM/F12 培養(yǎng)基與多種無血清化學限定培養(yǎng)基，傳代 80 次以上仍保持穩(wěn)定生長速率，E2-Fc 表達量波動＜8%，凍存復蘇后存活率超 89%。

功能特征：該細胞系的核心優(yōu)勢在于 E2-Fc 融合蛋白的雙重功能特性：E2 部分保留天然病毒抗原表位（ELISA 檢測與特異性抗體結合率＞95%），可誘導特異性免疫應答；Fc 段賦予蛋白更長半衰期（體外穩(wěn)定性達 14 天以上），同時便于通過 Protein A 親和層析快速純化（純度一步可達 95% 以上）。流式細胞術檢測顯示，細胞表面無 E2-Fc 滯留，98% 以上的表達蛋白分泌至培養(yǎng)基，避免了胞內(nèi)積累導致的細胞毒性。

貼壁培養(yǎng)操作：

懸浮培養(yǎng)與蛋白純化：

凍存流程：取對數(shù)生長期細胞，1000rpm 離心 5 分鐘，用凍存液（80% 無血清培養(yǎng)基 + 10% 胎牛血清 + 10% DMSO）重懸至 6×10?個 /mL，分裝至凍存管，程序降溫盒 - 80℃過夜，次日轉移至液氮保存，保存期可達 5 年以上，復蘇后需在含 Zeocin 的培養(yǎng)基中培養(yǎng) 2-3 代以穩(wěn)定表達。

優(yōu)勢：E2-Fc 蛋白表達穩(wěn)定，批間活性差異＜7%；Fc 段便于快速純化，純化步驟較 His 標簽蛋白減少 2 步；融合蛋白半衰期長（體外 4℃保存 14 天活性保留 90%）；與原代細胞相比，可無限傳代且實驗重復性高（變異系數(shù)＜6%）。

局限性：Fc 段可能干擾部分抗原表位的免疫識別，需結合無 Fc 標簽的 E2 蛋白驗證；高表達時（＞10μg/mL）可能抑制細胞增殖，需定期更換培養(yǎng)基；培養(yǎng)成本高于普通 CHO 細胞（因無血清培養(yǎng)基價格較高）。