來源與遺傳背景：該細(xì)胞系源自 CHO-K1 細(xì)胞的天然篩選克隆，區(qū)別于 DHFR 缺陷型（DHFR?）細(xì)胞，其保留功能性 DHFR 基因，可自主合成四氫ye酸（相關(guān)代謝的關(guān)鍵中間產(chǎn)物），無需外源性胸苷補充。名稱中 “DHFR+" 直接標(biāo)識其核心代謝特征 ——DHFR 基因功能正常，這一特性使其在無選擇壓力條件下仍能穩(wěn)定增殖，避免了 DHFR?細(xì)胞對培養(yǎng)基成分的嚴(yán)苛依賴。

形態(tài)與增殖：體外培養(yǎng)呈典型上皮樣形態(tài)，貼壁生長時呈多角形，排列緊密；懸浮培養(yǎng)形成直徑 30-80μm 的聚集體，細(xì)胞圓潤飽滿，活力長期維持在 91% 以上。37℃、5% CO?條件下，增殖周期約 28-34 小時，兼容含 10% 胎牛血清的 DMEM/F12 培養(yǎng)基與多種無血清培養(yǎng)基，傳代 100 次以上生長速率衰減＜8%，相關(guān)合成能力無明顯下降，凍存復(fù)蘇后存活率超 88%。

功能特征：核心優(yōu)勢在于 DHFR 介導(dǎo)的基因擴增潛力：當(dāng)攜帶 DHFR 基因與目標(biāo)基因的表達(dá)載體轉(zhuǎn)染后，在特定抑制劑逐步加壓篩選下，可通過基因共擴增機制使外源基因拷貝數(shù)增加 10-100 倍，目標(biāo)蛋白表達(dá)量隨之提升 5-20 倍（ELISA 檢測）。與 DHFR?細(xì)胞相比，其無需預(yù)先敲除內(nèi)源性 DHFR，基因編輯步驟簡化 40%，且擴增過程中細(xì)胞存活率提高 25%-30%。

基礎(chǔ)培養(yǎng)操作：

基因擴增與篩選：

凍存流程：取對數(shù)生長期細(xì)胞，1000rpm 離心 5 分鐘，用凍存液（70% wan全培養(yǎng)基 + 20% 胎牛血清 + 10% DMSO）重懸至 5×10?個 /mL，程序降溫盒 - 80℃過夜，次日轉(zhuǎn)移至液氮保存，保存期可達(dá) 5 年以上，復(fù)蘇后需在含特定抑制劑的培養(yǎng)基中恢復(fù) 2-3 代以穩(wěn)定表達(dá)。

優(yōu)勢：無需敲除內(nèi)源性 DHFR，基因操作簡便；特定抑制劑加壓下細(xì)胞存活率高，陽性克隆篩選效率提升 30%；相關(guān)代謝通路完整，可用于代謝相關(guān)研究；擴增后的表達(dá)穩(wěn)定性優(yōu)于 DHFR?細(xì)胞（傳代 50 次衰減＜15%）。

局限性：基礎(chǔ)表達(dá)量低于工程化 CHO 株系；高濃度特定抑制劑（＞1μM）下細(xì)胞形態(tài)易發(fā)生畸變；擴增過程耗時較長（需 6-8 周），快速篩選需求受限。