來(lái)源與構(gòu)建：該細(xì)胞系以 CHO-DG44 為親本（區(qū)別于 247A 的 CHO-S 背景），采用 TALEN 介導(dǎo)的定點(diǎn)整合技術(shù)，將含優(yōu)化版 B9Z4 啟動(dòng)子、目的基因克隆位點(diǎn)及 Zeocin 抗性基因的表達(dá)盒插入 CHO 基因組的 HPRT 位點(diǎn)。名稱中 “247B-B9Z4-01-C-T9" 標(biāo)識(shí)其為 247 系列的 B 亞型克隆，核心調(diào)控元件 B9Z4 啟動(dòng)子經(jīng)序列修飾，增強(qiáng)了對(duì) ponasterone A 的響應(yīng)靈敏度，同時(shí)刪除潛在沉默子序列，使外源基因表達(dá)穩(wěn)定性進(jìn)一步提升。

形態(tài)與增殖：體外培養(yǎng)呈上皮樣形態(tài)，貼壁生長(zhǎng)時(shí)細(xì)胞鋪展面積略大于 247A 株系，排列更疏松；懸浮培養(yǎng)形成直徑 10-30μm 的細(xì)密聚集體，均一度優(yōu)于 247A（變異系數(shù)＜15%）。37℃、5% CO?條件下，增殖周期約 26-32 小時(shí)，較 247A 縮短 2-4 小時(shí)，適應(yīng)無(wú)血清培養(yǎng)基范圍更廣（含 Ex-Cell CHO、PowerCHO 等），傳代 120 次以上生長(zhǎng)速率衰減＜5%，誘導(dǎo)后蛋白表達(dá)量波動(dòng)＜5%，凍存復(fù)蘇存活率超 92%。

功能特征：核心優(yōu)勢(shì)在于 B9Z4 啟動(dòng)子的高靈敏度與快速響應(yīng)：未誘導(dǎo)時(shí)目標(biāo)蛋白基礎(chǔ)表達(dá)量＜0.03μg/mL（僅為誘導(dǎo)狀態(tài)的 0.3%）；添加 0.5μM ponasterone A 后，24 小時(shí)內(nèi)表達(dá)量達(dá) 4-7g/L（流加培養(yǎng)），誘導(dǎo)倍數(shù)提升至 200-300 倍，較 247A 提高約 50%。對(duì)誘導(dǎo)劑濃度響應(yīng)更精準(zhǔn)（有效范圍 0.05-5μM），便于微調(diào)蛋白表達(dá)量，尤其適合需嚴(yán)格控制劑量的功能實(shí)驗(yàn)。

貼壁培養(yǎng)操作：

懸浮誘導(dǎo)培養(yǎng)：

凍存流程：對(duì)數(shù)期細(xì)胞離心后，用凍存液（90% 無(wú)血清培養(yǎng)基 + 5% 胎牛血清 + 5% DMSO）重懸至 7×10?個(gè) /mL，凍存復(fù)蘇后活力恢復(fù)速度較 247A 快 6-8 小時(shí)，適合緊急實(shí)驗(yàn)啟動(dòng)。

優(yōu)勢(shì)：較 247A 增殖更快，適合高密度培養(yǎng)；誘導(dǎo)響應(yīng)更迅速，達(dá)峰時(shí)間縮短 12 小時(shí)；灌流培養(yǎng)適應(yīng)性更強(qiáng)，代謝副產(chǎn)物積累少；Zeocin 抗性篩選效率更高，陽(yáng)性克隆比例提升 20%。

局限性：對(duì)剪切力略敏感，反應(yīng)器攪拌速率需控制在 100-130rpm（247A 可耐受 140rpm）；高濃度誘導(dǎo)劑（＞5μM）下表達(dá)量反而下降 5%-8%，需嚴(yán)格控制劑量；培養(yǎng)基成本較 247A 高 5%-10%。