目錄:上海乾思生物科技有限公司>>細(xì)胞>>細(xì)胞系>> BY-1352247C-B4Z2-01-C-005重組中國(guó)倉(cāng)鼠卵巢細(xì)胞系
| 參考價(jià) | 面議 |
| 參考價(jià) | 面議 |
更新時(shí)間：2025-08-08 10:49:06瀏覽次數(shù)：209評(píng)價(jià)
聯(lián)系我們時(shí)請(qǐng)說(shuō)明是化工儀器網(wǎng)上看到的信息，謝謝!
| 供貨周期 | 現(xiàn)貨 |
|---|
來(lái)源與構(gòu)建：該細(xì)胞系以 CHO-K1 為親本，采用同源重組技術(shù)將含 B4Z2 啟動(dòng)子、目的基因多克隆位點(diǎn)及 hygromycin 抗性基因的表達(dá)框定點(diǎn)整合至 CHO 基因組安全位點(diǎn)。名稱中 “247C-B4Z2-01-C-005" 為克隆篩選標(biāo)識(shí)，其中 “B4Z2" 代表核心調(diào)控元件 —— 一種受四環(huán)素類似物誘導(dǎo)的啟動(dòng)子，可通過(guò)添加 doxycycline 實(shí)現(xiàn)蛋白表達(dá)的時(shí)空調(diào)控。構(gòu)建過(guò)程中采用絕緣子序列優(yōu)化，使外源基因表達(dá)波動(dòng)幅度控制在 5% 以內(nèi)。
形態(tài)與增殖：體外培養(yǎng)呈典型上皮樣形態(tài)，貼壁生長(zhǎng)時(shí)呈多角形，排列緊密；懸浮培養(yǎng)形成直徑 20-40μm 的松散聚集體，細(xì)胞輪廓清晰，活力長(zhǎng)期維持在 92% 以上。37℃、5% CO?條件下，增殖周期約 30-36 小時(shí)，適應(yīng)無(wú)血清化學(xué)限定培養(yǎng)基（如 HyClone SFM4CHO），傳代 100 次以上仍保持穩(wěn)定生長(zhǎng)速率，誘導(dǎo)后目標(biāo)蛋白表達(dá)量衰減＜7%，凍存復(fù)蘇后存活率超 88%。
功能特征：該細(xì)胞系的核心優(yōu)勢(shì)在于 B4Z2 啟動(dòng)子的誘導(dǎo)調(diào)控特性：未誘導(dǎo)狀態(tài)下，目標(biāo)蛋白基礎(chǔ)表達(dá)量＜0.1μg/mL；添加 1μg/mL doxycycline 后，24 小時(shí)內(nèi)表達(dá)量快速升至 2-4g/L（流加培養(yǎng)），誘導(dǎo)倍數(shù)達(dá) 50-100 倍（ELISA 檢測(cè)），且誘導(dǎo)效率與誘導(dǎo)劑濃度呈線性相關(guān)（有效范圍 0.01-5μg/mL），可精準(zhǔn)控制蛋白合成時(shí)機(jī)，減少毒性蛋白對(duì)細(xì)胞的損傷。
重組蛋白可控生產(chǎn)
生物藥工藝優(yōu)化
表達(dá)系統(tǒng)穩(wěn)定性驗(yàn)證
貼壁培養(yǎng)操作：
復(fù)蘇：從液氮取出凍存管，37℃水浴 1-2 分鐘解凍，轉(zhuǎn)移至含 10mL 預(yù)熱培養(yǎng)基（DMEM/F12+10% 胎牛血清 + 200μg/mL hygromycin）的離心管，1000rpm 離心 5 分鐘，重懸后接種至 T75 培養(yǎng)瓶，37℃、5% CO?培養(yǎng)箱靜置培養(yǎng)。
換液：接種 24 小時(shí)后首ci換液，去除未貼壁細(xì)胞，此后每 48 小時(shí)換液一次，維持細(xì)胞融合度＜80% 以保持活性。
傳代：當(dāng)細(xì)胞融合度達(dá) 70%-80% 時(shí)，棄培養(yǎng)基，PBS 清洗 2 次，加入 2mL 0.25% yi酶 - EDTA，37℃孵育 3 分鐘，鏡檢細(xì)胞脫落后加入 8mL 培養(yǎng)基終止消化，按 1:4 比例傳代，避免過(guò)度密集影響誘導(dǎo)效率。
懸浮誘導(dǎo)培養(yǎng)：
種子準(zhǔn)備：將貼壁細(xì)胞消化后，以 3×10?個(gè) /mL 密度接種至搖瓶，使用無(wú)血清培養(yǎng)基（如 CD FortiCHO），120rpm、37℃、5% CO?培養(yǎng)至密度 4×10?個(gè) /mL。
誘導(dǎo)表達(dá)：添加 doxycycline 至終濃度 1μg/mL，繼續(xù)培養(yǎng) 7-10 天，每日取樣監(jiān)測(cè)細(xì)胞密度與活力，當(dāng)活力＜70% 時(shí)收獲上清。
蛋白純化：上清經(jīng) 0.22μm 濾膜過(guò)濾后，根據(jù)目標(biāo)蛋白特性選擇親和層析（如 Protein A/G）或離子交換層析純化，純度可達(dá) 98% 以上。
凍存流程：取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期細(xì)胞，1000rpm 離心 5 分鐘，用凍存液（80% 無(wú)血清培養(yǎng)基 + 10% 胎牛血清 + 10% DMSO）重懸至 5×10?個(gè) /mL，分裝至凍存管，程序降溫盒 - 80℃過(guò)夜，次日轉(zhuǎn)移至液氮保存，保存期可達(dá) 5 年以上。
優(yōu)勢(shì)：B4Z2 啟動(dòng)子誘導(dǎo)響應(yīng)精準(zhǔn)，基礎(chǔ)表達(dá)極低（＜0.1% 誘導(dǎo)表達(dá)量）；定點(diǎn)整合確保表達(dá)穩(wěn)定性，傳代 60 次無(wú)明顯衰減；兼容貼壁與懸浮培養(yǎng)，可無(wú)縫放大至生物反應(yīng)器；產(chǎn)物糖基化修飾均一，批間差異＜5%，符合生物藥質(zhì)量要求。
局限性：誘導(dǎo)劑 doxycycline 可能殘留于產(chǎn)物中，需優(yōu)化純化工藝去除；高誘導(dǎo)強(qiáng)度下（＞5μg/mL）可能抑制細(xì)胞增殖，需控制誘導(dǎo)濃度；構(gòu)建周期長(zhǎng)（約 3 個(gè)月），初始篩選成本較高。
以上信息僅供參考，詳細(xì)信息請(qǐng)聯(lián)系我們。
(空格分隔,最多3個(gè),單個(gè)標(biāo)簽最多10個(gè)字符)
會(huì)員.png)
13
化工儀器網(wǎng)