來源與構(gòu)建：該細(xì)胞系以 BHK-21 細(xì)胞為親本，通過慢病毒介導(dǎo)將人源 HTIGAR 基因?qū)爰?xì)胞基因組，經(jīng)嘌呤霉素抗性篩選及單克隆純化獲得。HTIGAR 基因由 CMV 啟動(dòng)子驅(qū)動(dòng)，C 端融合 FLAG 標(biāo)簽，便于蛋白檢測(cè)與純化，“HTIGAR" 標(biāo)識(shí)其核心功能蛋白 —— 一種可激活磷酸果糖激酶、調(diào)控糖酵解的代謝調(diào)節(jié)因子。

形態(tài)與增殖：體外培養(yǎng)呈典型成纖維樣形態(tài)，貼壁生長(zhǎng)時(shí)呈長(zhǎng)梭形，排列疏松，核仁清晰，細(xì)胞間連接疏松。37℃、5% CO?條件下，增殖周期約 24-30 小時(shí)，適應(yīng)含 10% 胎牛血清的 DMEM 培養(yǎng)基，傳代 80 次以上仍保持穩(wěn)定生長(zhǎng)速率，HTIGAR 表達(dá)量波動(dòng)＜8%，凍存復(fù)蘇后存活率超 85%。

功能特征：該細(xì)胞系的核心優(yōu)勢(shì)在于 HTIGAR 的代謝調(diào)控活性：與空載 BHK 細(xì)胞相比，其糖酵解速率降低 30%-40%（乳酸生成量檢測(cè)），而磷酸戊糖途徑活性提升 25%-35%（NADPH 生成量檢測(cè)），同時(shí)細(xì)胞對(duì)氧化應(yīng)激的抵抗能力增強(qiáng)（H?O?處理后存活率提升 2 倍），wan美模擬腫瘤細(xì)胞中 HTIGAR 介導(dǎo)的代謝重編程表型。

貼壁培養(yǎng)操作：

功能實(shí)驗(yàn)處理：

凍存流程：取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期細(xì)胞，1000rpm 離心 5 分鐘，用凍存液（70% wan全培養(yǎng)基 + 20% 胎牛血清 + 10% DMSO）重懸至 4×10?個(gè) /mL，分裝至凍存管，程序降溫盒 - 80℃過夜，次日轉(zhuǎn)移至液氮保存，保存期可達(dá) 5 年以上。

優(yōu)勢(shì)：HTIGAR 表達(dá)穩(wěn)定，代謝表型均一（批間差異＜10%）；FLAG 標(biāo)簽便于蛋白定位與互作研究；貼壁牢固，適合長(zhǎng)時(shí)程代謝檢測(cè)；可直接與空載 BHK 細(xì)胞對(duì)比，排除背景干擾。

局限性：倉鼠與人類代謝通路存在細(xì)微差異，需結(jié)合人源細(xì)胞驗(yàn)證；高表達(dá) HTIGAR 可能導(dǎo)致細(xì)胞接觸抑制減弱，傳代時(shí)需嚴(yán)格控制密度；部分代謝檢測(cè)需專用試劑盒，實(shí)驗(yàn)成本較高。