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目錄:上海乾思生物科技有限公司>>細(xì)胞>>細(xì)胞系>> BY-1350CHO-E0中國(guó)倉(cāng)鼠卵巢細(xì)胞株細(xì)胞系

CHO-E0中國(guó)倉(cāng)鼠卵巢細(xì)胞株細(xì)胞系

  • CHO-E0中國(guó)倉(cāng)鼠卵巢細(xì)胞株細(xì)胞系
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  • 品牌 其他品牌
  • 型號(hào) BY-1350
  • 廠商性質(zhì) 生產(chǎn)商
  • 所在地 上海市
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CHO-E0中國(guó)倉(cāng)鼠卵巢細(xì)胞株細(xì)胞系,上皮樣,貼壁或懸浮生長(zhǎng),遺傳穩(wěn)定,蛋白表達(dá)高效且適配性強(qiáng),適用于基礎(chǔ)研究、重組蛋白生產(chǎn)及藥物開(kāi)發(fā)工藝優(yōu)化,應(yīng)用前景廣泛。
CHO-E0中國(guó)倉(cāng)鼠卵巢細(xì)胞株細(xì)胞系
CHO-E0中國(guó)倉(cāng)鼠卵巢細(xì)胞株細(xì)胞系是 CHO 細(xì)胞家族中經(jīng)篩選馴化獲得的通用型亞型,因遺傳背景穩(wěn)定、蛋白表達(dá)適配性強(qiáng)且培養(yǎng)成本可控,成為基礎(chǔ)研究、重組蛋白生產(chǎn)及藥物開(kāi)發(fā)工藝優(yōu)化的多功能細(xì)胞模型。其保留 CHO 細(xì)胞典型的上皮樣形態(tài)與生長(zhǎng)特性,同時(shí)通過(guò)自然篩選增強(qiáng)了對(duì)不同表達(dá)載體的兼容性,為生物制藥研發(fā)的全流程提供了穩(wěn)定可靠的細(xì)胞平臺(tái)。
一、細(xì)胞來(lái)源與基本特性
  • 來(lái)源與馴化:該細(xì)胞系源自 CHO-K1 細(xì)胞,通過(guò)多輪非選擇性傳代與適應(yīng)性培養(yǎng)獲得:初期以廣譜表達(dá)能力為指標(biāo),篩選能穩(wěn)定表達(dá)多種外源蛋白(如細(xì)胞因子、抗體片段)的克??;后續(xù)經(jīng)含血清與無(wú)血清培養(yǎng)基雙向適應(yīng),增強(qiáng)培養(yǎng)模式的靈活性,最終獲得 CHO-E0 株系。“E0" 代表其作為 “基礎(chǔ)型(E)零改造(0)" 細(xì)胞的特性,標(biāo)識(shí)其未引入外源基因改造的通用屬性。

  • 形態(tài)與增殖:體外培養(yǎng)呈典型上皮樣形態(tài),貼壁生長(zhǎng)時(shí)呈多角形,排列規(guī)則;懸浮培養(yǎng)形成直徑 20-60μm 的松散聚集體,細(xì)胞圓潤(rùn)飽滿(mǎn),活力長(zhǎng)期維持在 93% 以上。37℃、5% CO?條件下,增殖周期約 26-32 小時(shí),兼容含 10% 胎牛血清的 DMEM/F12 培養(yǎng)基與多種無(wú)血清化學(xué)限定培養(yǎng)基,傳代 150 次以上仍保持穩(wěn)定生長(zhǎng)速率,外源蛋白表達(dá)量波動(dòng)<10%,凍存復(fù)蘇后存活率超 90%。

  • 表達(dá)特征:該細(xì)胞系的核心優(yōu)勢(shì)在于廣譜適配性:轉(zhuǎn)染不同類(lèi)型表達(dá)載體(如質(zhì)粒、病毒載體)后,重組蛋白表達(dá)量可達(dá) 2-5g/L(流加培養(yǎng)),尤其對(duì)難表達(dá)蛋白(如膜蛋白、多亞基復(fù)合體)的適配性突出。以 G 蛋白偶聯(lián)受體(GPCR)表達(dá)為例,其膜定位率達(dá) 85% 以上,比普通 CHO-K1 提升 20%,且受體配體結(jié)合活性保留率超 90%,為功能研究提供高質(zhì)量樣本。

二、核心應(yīng)用領(lǐng)域
  1. 基礎(chǔ)研究模型構(gòu)建

該細(xì)胞系是基因功能驗(yàn)證與信號(hào)通路研究的理想工具。在蛋白互作研究中,通過(guò)共轉(zhuǎn)染目標(biāo)蛋白與熒光標(biāo)記載體,可清晰觀察蛋白在細(xì)胞內(nèi)的共定位(如通過(guò) FRET 技術(shù)檢測(cè)激酶與底物的相互作用);在信號(hào)通路解析中,其對(duì)多種刺激(如細(xì)胞因子、小分子化合物)的響應(yīng)穩(wěn)定,可量化分析 MAPK、PI3K 等通路的激活強(qiáng)度(Western blot 檢測(cè)磷酸化水平差異),實(shí)驗(yàn)重復(fù)性達(dá) 90% 以上。
  1. 重組蛋白生產(chǎn)

作為通用型生產(chǎn)基質(zhì),其適用于多種重組蛋白的中試生產(chǎn)。生產(chǎn)重組ren干擾素 -α 時(shí),表達(dá)量達(dá) 3.2g/L,抗病毒活性達(dá) 1.8×10? IU/mg;生產(chǎn)單域抗體(VHH)時(shí),無(wú)需復(fù)雜純化即可獲得純度 90% 以上的產(chǎn)品,且熱穩(wěn)定性?xún)?yōu)異(60℃處理 30 分鐘活性保留 80%)。因培養(yǎng)成本僅為高表達(dá)亞型的 60%-70%,尤其適合科研級(jí)小批量蛋白生產(chǎn)。
  1. 藥物開(kāi)發(fā)工藝優(yōu)化

在藥物研發(fā)中,該細(xì)胞系可用于生產(chǎn)工藝參數(shù)的摸索。通過(guò)測(cè)試不同培養(yǎng)基成分、pH 值與溶氧條件對(duì)蛋白表達(dá)的影響,可快速確定zuiyou工藝(如發(fā)現(xiàn)將谷an酰胺濃度控制在 4mM 時(shí),抗體表達(dá)量提升 15%);其對(duì)基因編輯工具(如 CRISPR/Cas9)的高耐受性,也使其成為細(xì)胞系改造的理想起始材料,可通過(guò)敲除唾液酸轉(zhuǎn)移酶等基因優(yōu)化蛋白糖型。
三、培養(yǎng)方法
  • 貼壁培養(yǎng)操作

  1. 復(fù)蘇:從液氮取出凍存管,37℃水浴 1-2 分鐘解凍,轉(zhuǎn)移至含 10mL 預(yù)熱培養(yǎng)基(DMEM/F12+10% 胎牛血清)的離心管,1000rpm 離心 5 分鐘,重懸后接種至 T75 培養(yǎng)瓶,37℃、5% CO?培養(yǎng)箱靜置培養(yǎng)。

  1. 換液:接種 24 小時(shí)后更換培養(yǎng)基,去除未貼壁細(xì)胞,此后每 48 小時(shí)換液一次,維持培養(yǎng)基 pH 7.2-7.4。

  1. 傳代:當(dāng)細(xì)胞融合度達(dá) 80%-90% 時(shí),棄培養(yǎng)基,PBS 清洗 2 次,加入 2mL 0.25% yi酶 - EDTA,37℃孵育 2-3 分鐘,鏡檢細(xì)胞脫落后加入 8mL 培養(yǎng)基終止消化,按 1:5 比例傳代至新培養(yǎng)瓶。

  • 懸浮培養(yǎng)操作

種子細(xì)胞以 2×10?個(gè) /mL 密度接種至 125mL 搖瓶(工作體積 30mL),使用含 4% 胎牛血清的 DMEM/F12 培養(yǎng)基,搖床轉(zhuǎn)速 110rpm,37℃、5% CO?培養(yǎng),每 2-3 天傳代一次,維持細(xì)胞密度 1×10?-5×10?個(gè) /mL,逐步降低血清濃度至無(wú)血清狀態(tài)。
  • 凍存流程:取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期細(xì)胞,1000rpm 離心 5 分鐘,用凍存液(70% wan全培養(yǎng)基 + 20% 胎牛血清 + 10% DMSO)重懸至 5×10?個(gè) /mL,分裝至凍存管,程序降溫盒 - 80℃過(guò)夜,次日轉(zhuǎn)移至液氮保存,保存期可達(dá) 5 年以上。

四、優(yōu)勢(shì)與局限性
  • 優(yōu)勢(shì):遺傳穩(wěn)定性?xún)?yōu)異,長(zhǎng)期傳代無(wú)明顯表型漂移;對(duì)不同表達(dá)載體兼容性強(qiáng),無(wú)需針對(duì)特定蛋白優(yōu)化細(xì)胞系;培養(yǎng)條件寬松,可在含血清與無(wú)血清培養(yǎng)基間靈活切換;成本可控,適合大規(guī)模基礎(chǔ)研究與工藝開(kāi)發(fā)。

  • 局限性:重組蛋白表達(dá)量低于專(zhuān)項(xiàng)改造株(如 CHO-D3b);對(duì)部分復(fù)雜糖基化蛋白的修飾能力有限;懸浮培養(yǎng)時(shí)聚集體大小不均一(10-100μm),需優(yōu)化攪拌參數(shù)。

五、研究意義
CHO-E0 細(xì)胞系的建立為生物研究提供了標(biāo)準(zhǔn)化通用平臺(tái),其廣譜適配性與穩(wěn)定性能滿(mǎn)足從基礎(chǔ)研究到中試生產(chǎn)的多樣化需求。在基礎(chǔ)研究中,其助力構(gòu)建統(tǒng)一的實(shí)驗(yàn)體系,減少因細(xì)胞背景差異導(dǎo)致的結(jié)果偏差;在應(yīng)用領(lǐng)域,其作為工藝開(kāi)發(fā)的 “起始模板",推動(dòng)了生物制藥生產(chǎn)參數(shù)的標(biāo)準(zhǔn)化,同時(shí)為低成本重組蛋白生產(chǎn)提供了可行方案,尤其對(duì)科研機(jī)構(gòu)與中小企業(yè)的早期研發(fā)具有重要支撐作用,是連接基礎(chǔ)研究與產(chǎn)業(yè)應(yīng)用的關(guān)鍵橋梁。

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