目錄:上海乾思生物科技有限公司>>細(xì)胞>>細(xì)胞系>> BY-1346CHO-D3b中國(guó)倉(cāng)鼠卵巢細(xì)胞株細(xì)胞系
| 參考價(jià) | 面議 |
| 參考價(jià) | 面議 |
更新時(shí)間：2025-08-08 11:03:53瀏覽次數(shù)：370評(píng)價(jià)
聯(lián)系我們時(shí)請(qǐng)說(shuō)明是化工儀器網(wǎng)上看到的信息，謝謝!
| 供貨周期 | 現(xiàn)貨 |
|---|
來(lái)源與優(yōu)化：該細(xì)胞系源自 CHO-D3a，通過(guò) CRISPR/Cas9 技術(shù)微調(diào)關(guān)鍵糖基轉(zhuǎn)移酶（如 β-1,4 - 半乳糖基轉(zhuǎn)移酶）表達(dá)水平，結(jié)合無(wú)血清培養(yǎng)基長(zhǎng)期馴化獲得。名稱中 “D3b" 代表在 D3a 基礎(chǔ)上第 2 輪篩選的優(yōu)勢(shì)克隆，標(biāo)識(shí)其在糖基化與分泌效率上的升級(jí)特性。經(jīng)改造后，細(xì)胞分泌蛋白的半乳糖基化比例提升 20%，唾液酸含量增加 15%，更接近人源糖譜（UPLC 檢測(cè)）。
形態(tài)與增殖：體外培養(yǎng)呈上皮樣形態(tài)，貼壁生長(zhǎng)時(shí)排列緊密，懸浮培養(yǎng)形成直徑 30-50μm 的聚集體，細(xì)胞圓潤(rùn)透亮，活力長(zhǎng)期維持在 94% 以上。37℃、5% CO?條件下，增殖周期約 28-34 小時(shí)，適應(yīng)無(wú)血清化學(xué)限定培養(yǎng)基（如 Gibco CD OptiCHO），高密度流加培養(yǎng)細(xì)胞密度可達(dá) 1.1×10?個(gè) /mL，傳代 100 次以上蛋白表達(dá)量衰減＜6%，凍存復(fù)蘇存活率超 92%。
表達(dá)特征：重組蛋白表達(dá)量達(dá) 6-8g/L（流加培養(yǎng)），較 D3a 提升 15%-20%，尤其擅長(zhǎng)表達(dá)含多結(jié)構(gòu)域的復(fù)雜蛋白（如融合蛋白、凝xue因子）。以重組人凝xue因子 VIII 為例，其分泌效率比 D3a 高 25%，糖鏈完整性達(dá) 98%，體內(nèi)凝血活性提升 10%-15%，符合國(guó)際藥典對(duì)復(fù)雜糖蛋白的質(zhì)量要求。
復(fù)雜重組蛋白生產(chǎn)
糖基化依賴型抗體研發(fā)
生產(chǎn)工藝優(yōu)化研究
貼壁培養(yǎng)操作：
復(fù)蘇：從液氮中取出凍存管，37℃水浴快速解凍（1-2 分鐘），無(wú)菌操作轉(zhuǎn)移至含 10mL 預(yù)熱培養(yǎng)基（CD OptiCHO+4mM 谷an酰胺）的離心管，1000rpm 離心 5 分鐘，棄上清后重懸細(xì)胞，接種至 T75 培養(yǎng)瓶，37℃、5% CO?培養(yǎng)箱靜置培養(yǎng)。
換液：接種后 48 小時(shí)首ci換液，棄去舊培養(yǎng)基，加入 10mL 新鮮培養(yǎng)基，此后每 24-36 小時(shí)換液一次，維持葡萄糖濃度＞2g/L。
傳代：當(dāng)細(xì)胞融合度達(dá) 70%-80% 時(shí)，棄培養(yǎng)基，PBS 清洗 2 次，加入 2mL 0.25% yi酶 - EDTA，37℃孵育 3-5 分鐘，鏡檢觀察細(xì)胞脫落，加入 5mL 培養(yǎng)基終止消化，1000rpm 離心 5 分鐘，按 1:3-1:5 比例傳代至新培養(yǎng)瓶。
懸浮培養(yǎng)操作：
種子培養(yǎng)：從貼壁細(xì)胞過(guò)渡至懸浮培養(yǎng)時(shí)，以 2×10?個(gè) /mL 密度接種至 125mL 搖瓶（工作體積 30mL），搖床轉(zhuǎn)速 120rpm，37℃、5% CO?培養(yǎng)，每日取樣計(jì)數(shù)，維持細(xì)胞密度＜6×10?個(gè) /mL。
高密度培養(yǎng)：采用 500mL 搖瓶或生物反應(yīng)器，初始接種密度 3×10?個(gè) /mL，流加補(bǔ)料（含葡萄糖、氨基酸、維生素），控制溶氧 30%-50%、pH 7.0-7.2，培養(yǎng) 7-10 天至細(xì)胞密度峰值后收獲上清。
凍存流程：取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期細(xì)胞，1000rpm 離心 5 分鐘，用凍存液（90% 無(wú)血清培養(yǎng)基 + 10% DMSO）重懸至 1×10?個(gè) /mL，分裝至凍存管，程序降溫盒 - 80℃過(guò)夜，次日轉(zhuǎn)移至液氮長(zhǎng)期保存。
優(yōu)勢(shì)：糖基化修飾更接近人源，復(fù)雜蛋白活性提升顯著；懸浮培養(yǎng)適應(yīng)性強(qiáng)，可直接放大至 2000L 生物反應(yīng)器；對(duì)工藝參數(shù)調(diào)控響應(yīng)穩(wěn)定，便于實(shí)現(xiàn)糖型精準(zhǔn)控制；長(zhǎng)期傳代后蛋白表達(dá)與糖譜特性無(wú)明顯漂移，批間差異＜5%。
局限性：培養(yǎng)成本比普通 CHO 細(xì)胞高 15%-20%；對(duì)培養(yǎng)基中微量元素濃度敏感，需嚴(yán)格質(zhì)控；部分高粘度蛋白易形成聚集體（比例 1%-3%），需優(yōu)化純化工藝。
CHO-D3b 細(xì)胞系的開(kāi)發(fā)推動(dòng)了復(fù)雜生物藥生產(chǎn)的精準(zhǔn)化與高效化，其糖基化調(diào)控能力為解決重組蛋白活性不足、藥代動(dòng)力學(xué)差等問(wèn)題提供了方案。在基礎(chǔ)研究中，其助力解析糖基化修飾與蛋白功能的關(guān)聯(lián)；在產(chǎn)業(yè)應(yīng)用中，其支持了多個(gè)臨床級(jí)復(fù)雜蛋白藥物的工藝開(kāi)發(fā)，為提升生物藥質(zhì)量、降低治療成本提供了關(guān)鍵工具，推動(dòng)生物醫(yī)藥產(chǎn)業(yè)向 “精準(zhǔn)制造" 升級(jí)。
以上信息僅供參考，詳細(xì)信息請(qǐng)聯(lián)系我們。
(空格分隔,最多3個(gè),單個(gè)標(biāo)簽最多10個(gè)字符)
會(huì)員.png)
13
化工儀器網(wǎng)