帶你了解一下高效液相色譜儀的特點(diǎn)吧。
高效液相色譜儀(HPLC)是一種基于液體流動(dòng)相的色譜分析技術(shù),廣泛應(yīng)用于化學(xué)、醫(yī)藥、食品、環(huán)境等領(lǐng)域。它在經(jīng)典液相色譜基礎(chǔ)上結(jié)合了高壓輸液泵、高效固定相和高靈敏度檢測(cè)器,具備一系列特點(diǎn),具體如下:
核心體現(xiàn):采用顆粒極細(xì)的固定相(通常為 3~10μm 的硅膠或化學(xué)鍵合相),柱效可達(dá)數(shù)千至數(shù)萬理論塔板數(shù),遠(yuǎn)高于經(jīng)典液相色譜(僅幾十到幾百)。
實(shí)際效果:能快速分離結(jié)構(gòu)相似的復(fù)雜混合物,例如在藥物分析中,可同時(shí)分離樣品中主成分、異構(gòu)體及微量雜質(zhì)(如抗生素中的降解產(chǎn)物),解決了傳統(tǒng)方法難以區(qū)分的 “近鄰峰" 問題。
原理支撐:通過高壓輸液泵(壓力可達(dá) 10~40MPa)驅(qū)動(dòng)流動(dòng)相,大幅縮短流動(dòng)相在色譜柱中的停留時(shí)間,同時(shí)高效固定相的傳質(zhì)阻力小,加快了組分分離速度。
典型案例:傳統(tǒng)液相色譜分析一個(gè)樣品可能需要數(shù)小時(shí),而 HPLC 通常在幾分鐘到幾十分鐘內(nèi)完成,例如食品中防腐劑(苯甲酸、山梨酸)的檢測(cè)可在 10 分鐘內(nèi)完成分離和定量。
檢測(cè)器優(yōu)勢(shì):配備多種高靈敏度檢測(cè)器,如紫外 - 可見檢測(cè)器(UV-Vis)、熒光檢測(cè)器(FLD)、質(zhì)譜檢測(cè)器(MS)等,檢測(cè)限可達(dá) ng(納克)甚至 pg(皮克)級(jí)別。
應(yīng)用場(chǎng)景:在環(huán)境監(jiān)測(cè)中,可檢測(cè)水中痕量污染物(如農(nóng)藥殘留、多環(huán)芳烴),濃度低至 0.1μg/L 仍能準(zhǔn)確定量;在臨床診斷中,可測(cè)定血液中微量激素(如腎上腺素),助力疾病早期篩查。
分析對(duì)象:不受樣品揮發(fā)性和熱穩(wěn)定性限制,適用于 80% 以上的有機(jī)化合物分析,包括高沸點(diǎn)、大分子、強(qiáng)極性、離子型及熱不穩(wěn)定物質(zhì)(如蛋白質(zhì)、多肽、糖類、藥物代謝物等)。
對(duì)比優(yōu)勢(shì):氣相色譜(GC)僅適用于揮發(fā)性、熱穩(wěn)定物質(zhì)(約 20% 有機(jī)化合物),而 HPLC 可彌補(bǔ)其不足,例如中藥中的皂苷、生物堿等成分均需通過 HPLC 分析。
定性能力:結(jié)合保留時(shí)間、光譜信息(如二極管陣列檢測(cè)器 DAD 的紫外光譜圖)及聯(lián)用技術(shù)(如 HPLC-MS),可對(duì)未知組分進(jìn)行結(jié)構(gòu)鑒定,減少誤判。
定量精度:通過外標(biāo)法、內(nèi)標(biāo)法等校準(zhǔn)方式,在一定濃度范圍內(nèi)線性關(guān)系良好(相關(guān)系數(shù)通常 > 0.999),相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差(RSD)可控制在 1% 以內(nèi),滿足藥品純度檢測(cè)、食品添加劑等嚴(yán)格要求。
操作流程:現(xiàn)代 HPLC 配備自動(dòng)進(jìn)樣器、智能工作站,可實(shí)現(xiàn)樣品自動(dòng)進(jìn)樣、梯度洗脫程序控制、數(shù)據(jù)自動(dòng)采集與處理(如峰面積計(jì)算、報(bào)告生成),減少人為操作誤差。
高效批量分析:適用于高通量檢測(cè),例如實(shí)驗(yàn)室一天可完成數(shù)百個(gè)樣品的分析(如藥物研發(fā)中的化合物庫(kù)篩選),大幅提升工作效率。
高效液相色譜儀憑借高效、快速、靈敏、廣譜、準(zhǔn)確、自動(dòng)化等特點(diǎn),成為現(xiàn)代分離分析領(lǐng)域的核心工具。其性能持續(xù)提升(如超高效液相色譜 UPLC 的出現(xiàn),進(jìn)一步縮短分析時(shí)間、提高分辨率),在科研探索、質(zhì)量控制、安全檢測(cè)等領(lǐng)域發(fā)揮著不可替代的作用。
高效液相色譜儀使用注意事項(xiàng)




