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詳細(xì)介紹
本網(wǎng)站銷售的化學(xué)產(chǎn)品僅供科學(xué)研究或工業(yè)應(yīng)用，不直接用于食品、藥品、臨床或動物的診斷或治療！
細(xì)胞屬性：
方法簡介
公司實驗室分離的豬脂肪采用消化法制備而來，細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶。
質(zhì)量檢測
公司實驗室分離的豬脂肪經(jīng)油紅O染色檢測，純度可達(dá)90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。
產(chǎn)品名稱 | 豬脂肪原代細(xì)胞 | 組織來源 | 脂肪組織 |
英文名稱 | Porcine Adipocyte Cells | 貨號 | YS-01X7007 |
產(chǎn)品規(guī)格 | 5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶 | 用途 | 僅供科研實驗 |
細(xì)胞簡介：
豬脂肪細(xì)胞分離自脂肪組織；脂肪組織主要由大量群集的脂肪細(xì)胞構(gòu)成，聚集成團(tuán)的脂肪細(xì)胞由薄層疏松結(jié)締組織分隔成小葉；貯存的脂肪，在需要時可迅速分解成甘油和脂肪酸，經(jīng)血液輸送到各組織以供利用。它們影響胰島素敏感性、血壓水平、內(nèi)皮功能、纖溶活動及炎癥反應(yīng)，參與多種重要病理生理過程；脂肪組織已由過去單純作為能量儲存的器官而成為一個極其重要的內(nèi)分泌系統(tǒng)。脂肪細(xì)胞分為白色脂肪細(xì)胞和褐色（棕色）脂肪細(xì)胞，常呈白色，在嬰幼兒期大量增殖，到青春期數(shù)量達(dá)到巔，此后數(shù)量一般不再增加。細(xì)胞內(nèi)含有大量富含脂肪的小泡，稱為脂質(zhì)泡，富含光面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)。此外，還有一種褐色脂肪細(xì)胞，在動物體內(nèi)主要存在于肩胛骨間、頸背部、腋窩、縱隔及腎臟周圍，含有高度團(tuán)縮的褐色脂肪，作用是將脂質(zhì)分解產(chǎn)熱，調(diào)節(jié)體內(nèi)脂質(zhì)比例。
培養(yǎng)信息：
培養(yǎng)基 含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等
換液頻率 每2-3天換液一次
生長特性 貼壁
細(xì)胞形態(tài) 梭形、多角形
傳代特性 屬于終末分化細(xì)胞；屬于不增殖細(xì)胞群
消化液 0.25%
培養(yǎng)條件 氣相：空氣，95%；CO2，5%
細(xì)胞培養(yǎng)方法：
1、細(xì)胞傳代：細(xì)胞密度達(dá)到80-90%時即可傳代
①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次；
②加入2ml0.25%（T25瓶），使覆蓋整個瓶或皿，蓋好放入培養(yǎng)箱消化；
③1-2min后，顯微鏡下觀察細(xì)胞，若大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化；若細(xì)胞還是貼壁，放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止；
④將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清；
⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中，T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基；
⑥懸浮細(xì)胞直接離心收集，細(xì)胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中。
2、細(xì)胞復(fù)蘇：
①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化，時間1min左右，加入4-5ml培養(yǎng)基混勻。
②在1000RPM左右條件下離心4min，棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻，將細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中，補加適量培養(yǎng)基。
3、細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時進(jìn)行細(xì)胞凍存保種
①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次，加入1mL 0.25%（T25瓶）
②1-2min后，顯微鏡下觀察細(xì)胞，大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化；
③將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清，加1ml凍存液重懸細(xì)胞；
④將凍存管放入程序降溫盒，放入-80℃冰箱，4小時后將凍存管轉(zhuǎn)入液氮罐儲存。
公司產(chǎn)品：
人羊膜細(xì)胞;HA | 鋅指蛋白IKAROS抗體 |
小鼠增殖細(xì)胞核抗原單克隆抗體 | 細(xì)胞分裂周期蛋白25B抗體 |
上皮特異性抗原抗體 | 成熟T淋巴細(xì)胞增殖蛋白1抗體 |
1號染色體開放閱讀框226抗體 | 脫酸Ａ結(jié)構(gòu)域蛋白抗體 |
9號染色體開放閱讀框41抗體 | 酸化組蛋白H1抗體 |
NA Others H7N9 甲型流感 H7N9 (A/Anhui/1/2013) 氨酸酶 (Neuraminidase / NA) 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) | 白介素-2轉(zhuǎn)染耐VP16絨癌細(xì)胞;JEG-3/VP16-IL-2 大鼠腸靜脈內(nèi)皮細(xì)胞培養(yǎng)基 100mL |
卵巢癌組織源性原代細(xì)胞Many types of cells包裝：5 × 105次方(1ml)/1ml | PILRA Others Human 人 PILR-alpha / PILRA 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) |
HA Others H2N2 甲型流感 H2N2 (A/Canada/720/2005) 血凝素 (Hemagglutinin / HA) 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) | S100A8 Others Human 人 S100A8 / CAGA / p8 桿狀病毒-昆蟲細(xì)胞裂解液 (陽性對照) |
SP2/0(小鼠骨髓瘤細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2 小鼠 AXR2 / CMG2 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) | SPINK4 Others Mouse 小鼠 SPINK4 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) |
CL-0412PC-12(大鼠腎上腺嗜鉻細(xì)胞瘤細(xì)胞)5×106cells/瓶×2 | 豬脂肪原代細(xì)胞成熟T淋巴細(xì)胞增殖蛋白1抗體 |
PRAP1 Others Human 人 PRAP1 / Proline-rich acidic 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) | FRhK-4(恒河猴胚腎細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2 |
人惡性多發(fā)性畸胎瘤細(xì)胞;ERA-2 | GRN Others Mouse 小鼠 GRN / Granulin 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) |
恒河猴腎細(xì)胞;RM-2 人骨髓樣甲狀腺癌細(xì)胞，TT細(xì)胞 TE-10(食管癌細(xì)胞) | 4號染色體開放閱讀框44抗體 |
Kelch樣蛋白14抗體 | CRP Others Rat 大鼠 CRP / C-reactive 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) |
α-連環(huán)蛋白抗體（鈣粘蛋白相關(guān)蛋白）Catenin α | 核結(jié)構(gòu)蛋白5抗體 |
生長激素抗體 | NA Others H7N9 甲型流感 H7N9 (A/Anhui/1/2013) 氨酸酶 (Neuraminidase / NA) 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) |
操作步驟：
1.將無菌的蓋玻片置于細(xì)胞培養(yǎng)皿中，將細(xì)胞懸液接種于培養(yǎng)皿中進(jìn)行細(xì)胞爬片，待細(xì)胞長至80%時取出爬片。
2. 用PBS浸洗爬片3次，4%的多聚甲醛固定爬片15min，再次用PBS浸洗玻片3次，每次3min。
3. 0.5% Triton X-100（PBS配制）室溫孵育爬片20min，使細(xì)胞通透。
4. 3% H2O2滴加爬片上以阻斷內(nèi)源性過氧化物酶，室溫孵育15min（一般用甲醇或蒸餾水稀釋30%過氧化氫），PBS沖洗3次，每次3min。
5. 封閉血清室溫孵育20min，PBS沖洗3次，每次3min。
6. 細(xì)胞特異性一抗孵育：按照抗體說明書稀釋比例稀釋好一抗，滴加在爬片上，于4°C濕盒中孵育一夜，PBS沖洗3次，每次3min。
7. 二抗孵育：選與一抗對應(yīng)的二抗，按比例稀釋后滴加在爬片上，37°C濕盒中孵育30min，PBS沖洗3次，每次3min。
8. 將爬片周圍水漬吸干，爬片上滴加新鮮配制的DAB顯色液，顯微鏡下觀察，當(dāng)出現(xiàn)棕黃色或棕褐色的陽性信號時用蒸餾水沖洗終止顯色。
9. 復(fù)染：用Harris蘇木素復(fù)染30s~1min，水洗后用1%的鹽酸酒精分化，再用蒸餾水（或PBS）水洗返藍(lán)。
10. 封片：將中性樹膠滴在爬片一側(cè)，再用蓋玻片蓋上，先放平蓋玻片一側(cè)再輕輕放下另一側(cè)，以免產(chǎn)生氣泡，封好的爬片平放置于通風(fēng)廚中晾干。
11. 鏡檢觀察。
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