細(xì)胞增殖是指細(xì)胞在周期調(diào)控因子的作用下，通過DNA復(fù)制、RNA轉(zhuǎn)錄和蛋白質(zhì)合成等復(fù)雜反應(yīng)而進(jìn)行的分裂系列過程。其中核DNA的復(fù)制倍增是整個(gè)過程的重要特征。細(xì)胞增殖檢測技術(shù)廣泛應(yīng)用于分子生物學(xué)遺傳學(xué)腫瘤生物學(xué)免疫學(xué)藥理和藥代動(dòng)力學(xué)等研究領(lǐng)域。
檢測細(xì)胞存活與增殖的方法主要包括觀察DNA合成含量和檢測細(xì)胞代謝活性兩種，前者主要有Brdu、EDU檢測等，后者主要有MTT、CCK8等檢測，客戶可根據(jù)處理藥物數(shù)量等因素選擇合適的檢測方法。

Cell Counting Kit-8 (CCK-8試劑盒)
實(shí)驗(yàn)步驟：
 1.通常細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)96孔板每孔加入100微升2000個(gè)細(xì)胞，細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升5000個(gè)細(xì)胞(具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目，需根據(jù)細(xì)胞的大小、細(xì)胞增殖速度的快慢等因素決定)。按照實(shí)驗(yàn)需要，進(jìn)行培養(yǎng)并給予siRNA干擾。
2. 干擾24h-48h后，每孔加入10微升CCK-8溶液。如果起始的培養(yǎng)體積為200微升，則需加入20微升CCK-8溶液，其它情況以此類推。可以用加了相應(yīng)量細(xì)胞培養(yǎng)液和CCK-8溶液但沒有加入細(xì)胞的孔作為空白對照。如果擔(dān)心所使用的藥物會(huì)干擾檢測，需設(shè)置加了相應(yīng)量細(xì)胞培養(yǎng)液、藥物和CCK-8溶液但沒有加入細(xì)胞的孔作為空白對照。
3. 在細(xì)胞培養(yǎng)箱內(nèi)繼續(xù)孵育0.5-4小時(shí)，對于大多數(shù)情況孵育1小時(shí)就可以了。時(shí)間的長短根據(jù)細(xì)胞的類型和細(xì)胞的密度等實(shí)驗(yàn)情況而定，初次實(shí)驗(yàn)時(shí)可以在0.5、1、2和4小時(shí)后分別用酶標(biāo)儀檢測，然后選取吸光度范圍比較適宜的一個(gè)時(shí)間點(diǎn)用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。
4. 在450nm測定吸光度。如無450nm濾光片，可以使用420-480nm的濾光片?？梢允褂么笥?span style="font-family:calibri">600nm的波長，例如650nm，作為參考波長進(jìn)行雙波長測定。