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中級會(huì)員 | 第6年

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慢病毒包裝分子實(shí)驗(yàn)
  • 慢病毒包裝分子實(shí)驗(yàn)
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更新時(shí)間:2025-07-07 21:00:08

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慢病毒包裝分子實(shí)驗(yàn)
過表達(dá)慢病毒是逆轉(zhuǎn)錄病毒的一種。構(gòu)建的siRNA/miRNA慢病毒載體,與化學(xué)合成的siRNA和基于瞬時(shí)表達(dá)載體構(gòu)建的普通siRNA載體相比

慢病毒包裝分子實(shí)驗(yàn)特點(diǎn):

1. 直接包裝成為假病毒顆粒,對分裂和非分裂細(xì)胞均有感染作用,適合RNAi研究和體內(nèi)實(shí)驗(yàn)中難于轉(zhuǎn)染的細(xì)胞 (比如神經(jīng)元細(xì)胞、干細(xì)胞或其它原代細(xì)胞)。

2. 可以通過簡單方式,在短時(shí)間內(nèi)獲得穩(wěn)定表達(dá)特定基因的多種細(xì)胞株。

3. 可用于基因敲除、基因治療和轉(zhuǎn)基因動(dòng)物研究。

4. 無需轉(zhuǎn)染試劑,操作簡便。

5.可以根據(jù)客戶需要制備多種標(biāo)記。

 原理:

慢病毒(Lentivirus)是逆轉(zhuǎn)錄病毒的一種。構(gòu)建的siRNA / miRNA慢病毒載體,與化學(xué)合成的siRNA和基于瞬時(shí)表達(dá)載體構(gòu)建的普通siRNA載體相比,一方面可以擴(kuò)增替代瞬時(shí)表達(dá)載體使用,另一方面,Lentivirus-siRNA克隆經(jīng)過慢病毒包裝系統(tǒng)包裝后,可用于感染依靠傳統(tǒng)轉(zhuǎn)染試劑難于轉(zhuǎn)染的細(xì)胞系如原代細(xì)胞、懸浮細(xì)胞和處于非分裂狀態(tài)的細(xì)胞,并且在感染后可以整合到受感染細(xì)胞的基因組,進(jìn)行長時(shí)間的穩(wěn)定表達(dá)。

慢病毒包裝分子實(shí)驗(yàn)流程:

1. 含有目的基因的慢病毒表達(dá)載體的構(gòu)建和質(zhì)粒純化提取。

   注:客戶也可以提供構(gòu)建好的重組慢病毒表達(dá)載體。

2. 慢病毒表達(dá)載體與包裝系統(tǒng)共轉(zhuǎn)染病毒包裝細(xì)胞。

3. 收集病毒液。

4. 純化和濃縮病毒。

5. 分裝、- 80 oC保存。

6. 滴度測定及無菌檢測。

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