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細胞生長曲線的測定背景與原理:
生長曲線是測定細胞生長數(shù)的常用方法,也是判定細胞活力的重要指標,是培養(yǎng)細胞生物學特性的基本參數(shù)之一。一般細胞傳代之后,經(jīng)過短暫的懸浮后貼壁, 隨后渡過長短不同的潛伏期,即進入快速生長的指數(shù)生*。在細胞達到飽和密度后,停止生長,進入平臺期,然后退化衰亡。為了準確描述整個過程中細胞數(shù)目的動態(tài)變化,需連續(xù)對細胞進行計數(shù)。通常計數(shù)6天。為準確起見,一般每次實驗設3個平行重復。
材料、試劑與儀器
1、實驗材料:
Hela細胞系。
2、實驗試劑:
DMEM培養(yǎng)基(青霉素,鏈霉素 , 10%血清, 0.25%胰蛋白酶溶液，臺酚藍染液。
3、實驗儀器:
超凈工作臺, co2培養(yǎng)箱,倒置顯微鏡,微量移液器,血細胞計數(shù)板,培養(yǎng)瓶,離心管，移液管,廢液缸,蓋玻片，24孔板。
方法與步驟
1、取生長良好的細胞,用培養(yǎng)基制成細胞懸液后計數(shù)。根據(jù)細胞計數(shù)結(jié)果按5x104/mL作傳代培養(yǎng)接種于24孔板中,共接種21孔細胞。1 m/孔。余下三孔可設傳代培養(yǎng)的對照。
2、24h后每天記錄細胞數(shù)目,每次取3孔細胞,分別進行計數(shù)。計算平均值。連續(xù)計數(shù)7d。細胞用胰酶消化后加入一定量的培養(yǎng)基混勻制成細胞懸液。取少量懸液與臺酚藍1:1混臺。取一干凈的血細胞計數(shù)板,蓋上蓋片,從蓋片兩邊滴入細胞懸液使之充滿計數(shù)板和蓋片之間。注意滴液勿有氣泡,也不能太多，否則會使蓋片浮起而使細胞計數(shù)不準。
3、低倍鏡下觀察,活細胞不著色,臺盼藍著色的細胞呈深藍色,是不健康或已死亡的細胞,不能計數(shù)。
找出計數(shù)板上的方格,計算四角大格內(nèi)總細胞數(shù),大格線者只計左側(cè)和上方,不計右側(cè)和下方細胞懸液中細胞

密度計算公式為:細胞數(shù)mL= (四角大格內(nèi)細胞數(shù)/4) x104x2
4、根據(jù)細胞計數(shù)結(jié)果,以單位細胞數(shù)(細胞數(shù)mL)為縱坐標,以時間為橫坐標繪制生長曲線。