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細(xì)胞爬片的制備是免疫細(xì)胞化學(xué)、免疫熒光、TUNEL凋亡檢測(cè)的重要一步。

細(xì)胞爬片的制備
(1)如果使用載玻片或蓋玻片,必須在使用之前滅菌?？梢砸?次滅菌并貯存在無(wú)菌狀態(tài)下。如果使用少量的蓋玻片,用金屬鑷子夾住蓋玻片,在70%乙醇中浸泡,然后在火焰上烤干。要輕輕地鑷取,以防破裂為了方便起見(jiàn)，可以將蓋玻片浸泡于70%的乙醇中,使用時(shí)放在火焰上處理。如果使用的蓋玻片或載玻片數(shù)量較多,可以將它們放于的金屬支架上,然后高壓消毒。如果需要的數(shù)量更大,則可將其放在耐熱的容器中,干烤2小時(shí)。

(2)在無(wú)菌狀態(tài)下,把干燥的玻片放于適當(dāng)?shù)呐囵B(yǎng)皿中。蓋玻片可以用金屬鑷子鑷取,圓形蓋玻片可以放在24孔培養(yǎng)板的孔中,直徑90mm的培養(yǎng)皿能夠放入10-15張蓋玻片,或者放入-張標(biāo)準(zhǔn)的載玻片。

(3)將懸浮的細(xì)胞放入組織培養(yǎng)皿中,培養(yǎng)至少24小時(shí),讓細(xì)胞貼附在玻片上。要想得到一-個(gè)較好的結(jié)果,在加細(xì)胞時(shí),密度應(yīng)低,以防細(xì)胞密度過(guò)高。

(4)如果細(xì)胞數(shù)目有限,可把細(xì)胞懸液直接滴在玻片上,靜置4小時(shí)后再輕輕加入培養(yǎng)液。通過(guò)這種方式,大部分細(xì)胞將粘附于玻片上,然后再培養(yǎng)約24小時(shí)，使細(xì)胞適當(dāng)擴(kuò)增。此時(shí),取出載玻片或蓋玻片可進(jìn)行固定。