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Calcein-AM是一種可對活細胞進行熒光標記的細胞染色試劑，Calcein-AM由于在Calcein的基礎上加強了疏水性，因此能夠輕易穿透活細胞膜。當其進入到細胞質后，酯酶會將其水解為Calcein 留在細胞內，發(fā)出強綠色熒光。與其它同類試劑(如BCBCF-AM和Carboxy-fluorescein diacetate)相比，Calcein-AM作為熒光探針去染活細胞的，因為它的細胞毒性很低。Calcein 的激發(fā)和發(fā)射波長分別為490 nm和515 nm. Calcein -AM僅對活細胞染色。作為核染色染料的PI不能穿過活細胞的細胞膜，它穿過死細胞膜的無序區(qū)域而到達細胞核，并嵌入細胞的DNA雙螺旋從而產生紅色熒光(激發(fā): 488， 545nm， 發(fā)射: 617 nm), 因此PI僅對死細胞染色。由于Calcein-DNA和PI-DNA都可被490nm激發(fā)，因此可用熒光顯微鏡同時觀察活細胞和死細胞。用545 nm激發(fā)，僅可觀察到死細胞。根據(jù)以上特點，Calcein, AM和PI經常被結合用來作為活細胞和死細胞的雙重染色。