盤點探針與qPCR儀之間的“默契密碼"

    在PCR實驗中，探針是一種關(guān)鍵的工具，用于增強實驗的特異性和靈敏度，因此探針在檢測中被廣泛地使用。

探針是一段與目標DNA或RNA序列互補的寡核苷酸，通常包含一個熒光基團和一個淬滅基團。在PCR反應(yīng)中起到特異性識別和信號放大的作用。在PCR擴增過程中，探針與目標DNA或RNA結(jié)合，當PCR酶(如Taq酶)在延伸階段切割探針時，釋放出熒光基團，從而允許熒光檢測器檢測到熒光信號。

       探針種類眾多，有TaqMan探針、分子信標、雙雜交探針、小凹槽結(jié)合劑(MGB)探針、蝎形探針、LUX探針等，均依賴于某種形式的共價連接的熒光淬滅基團分子，該分子在特定目標序列存在時被釋放。

     探針如何適配PCR儀：

     一、明確熒光基團

  首先，您需要明確所使用的探針對應(yīng)的熒光基團。不同類型的探針會使用不同的熒光報告基團和淬滅基團這些信息通?？梢栽谔结樄?yīng)商提供的產(chǎn)品說明書中找到，確認其激發(fā)波長和發(fā)射波長的大致范圍。以下是一些常用的熒光基團及其對應(yīng)的激發(fā)波長(Ex)和發(fā)射波長(Em)

     二、對比qPCR儀濾光片

若不在表1的范圍內(nèi)，理論上，只要探針所使用的熒光基團的激發(fā)波長和發(fā)射波長跟儀器的濾光片的設(shè)置相配即可，就是只要最終熒光信號在儀器的檢測范圍內(nèi)，結(jié)果都可以被檢出。