登革熱病毒是一種直徑約50nm的單鏈RNA病毒，屬于黃病毒屬。登革熱和登革熱出血熱由四種密切相關(guān)但抗原不同的病毒血清型（DEN-1、DEN-2、DEN-3和DEN-4）之一引起。感染其中一種血清型不會(huì)提供交叉保護(hù)性免疫，因此生活在登革熱流行區(qū)的人一生中可能會(huì)感染四次登革熱。這些病毒是由埃及伊蚊傳播的，埃及伊蚊是一種喜歡以人類(lèi)為食的間活動(dòng)的居家叮咬蚊子。代理商：廣州華南生物工程有限公司感染登革熱病毒會(huì)產(chǎn)生一系列臨床疾病。從非特異性病毒綜合征到嚴(yán)重和致命的出血性疾病。它主要是熱帶地區(qū)的一種疾??；其分布與瘧疾相當(dāng)，估計(jì)有25億人生活在有傳染病風(fēng)險(xiǎn)的地區(qū)全估計(jì)有5000萬(wàn)至1億例登革熱病例和幾十萬(wàn)例登革出血熱病例。
（1）在大多數(shù)國(guó)家，DHF的病死率約為5%；大多數(shù)致命病例發(fā)生在兒童和年輕人中。
（2）DHF的重要危險(xiǎn)因素包括感染病毒的毒株和血清型，以及患者的年齡、免疫狀態(tài)和遺傳傾向。
（3）風(fēng)險(xiǎn)群體：熱帶城市地區(qū)的居民或游客。
【檢測(cè)原理】
特異性抗體的定性免疫酶學(xué)測(cè)定是基于ELISA（酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)）技術(shù)。微孔板上包被特定的抗原，以結(jié)合樣品的相應(yīng)抗體。洗滌微孔以去除所有未結(jié)合的樣品材料后，添加酶聯(lián)物，與捕獲的抗體結(jié)合。在第二個(gè)洗滌步驟中，未結(jié)合的共軛物被去除。通過(guò)加入四甲基聯(lián)苯胺(TMB)底物，得到藍(lán)色反應(yīng)產(chǎn)物，可以觀察到結(jié)合結(jié)合物形成的免疫復(fù)合物。該產(chǎn)品的強(qiáng)度與樣品中特異性抗體的數(shù)量成正比。加入終止液以終止反應(yīng)，藍(lán)色變成了黃色。使用酶標(biāo)儀器讀取450/620nm處的吸光度。
【試劑盒組成】
1）微孔板 12x8
2）樣品稀釋液 1×100ml，pH 7.2 ± 0.2，即用型
3）終止液 1×15ml，即用型
4）洗滌濃縮液 20倍濃縮，1×50ml，pH 7.2 ± 0.2
5）酶聯(lián)物 1×20ml，即用型
6）底物液 1×15ml，即用型
7）陽(yáng)性質(zhì)控 1×2ml，即用型
8）臨界質(zhì)控 1×3ml，即用型
9）陰性質(zhì)控 1×2ml，即用型
10）封板紙 1x
11）使用說(shuō)明書(shū) 1x
12）布局表 1x
【所需的材料和設(shè)備】（未提供）
1）酶標(biāo)儀
2）37℃培養(yǎng)箱
3）手動(dòng)或自動(dòng)洗板裝置
4）移液器：10和1000µL
5）渦旋混合器
6）蒸餾水
7）一次性試管

【儲(chǔ)存條件】

試劑盒必須儲(chǔ)存于2-8℃的環(huán)境中，打開(kāi)的試劑在標(biāo)簽上規(guī)定的有效期內(nèi)是穩(wěn)定的。

實(shí)驗(yàn)所需器材但試劑盒不提供

1）可在450nm處讀數(shù)的酶標(biāo)儀

2）生物學(xué)或高純度水

3）真空泵

4）洗板機(jī)

5）37℃無(wú)CO2的孵箱

6）1-10ul的單道移液器，50-200ul的單道和多道移液器。

7）聚丙烯試管

8）Parafilm封口膜

9）計(jì)時(shí)器

10） 旋渦混合器

樣品的采集與準(zhǔn)備

1）此實(shí)驗(yàn)必須用血清來(lái)做。全血和血漿樣本不能直接檢測(cè)。

2）不要將不同批次的試劑混亂

3）不要加熱熱滅活的試驗(yàn)血清

4）實(shí)驗(yàn)前將所有試劑平衡至室溫，溫度的改變會(huì)對(duì)試驗(yàn)有影響

5）避免反復(fù)凍融樣品血清

6）直接用干凈的槍頭從試劑瓶中移去試劑，不能轉(zhuǎn)移，避免污染

7）不用的板條應(yīng)立即放回至密封袋中保存

8）不要使用任何過(guò)期的試劑

9）避免試劑暴露受熱或陽(yáng)光直射

10） 有些試劑可能會(huì)產(chǎn)生沉淀，使用前一定要混勻

11） 洗滌過(guò)程不完整會(huì)對(duì)試驗(yàn)結(jié)果產(chǎn)生影響

12） 為了減少由于孵育時(shí)間的差異而引起的漂移，建議底物液和終止液加入的時(shí)間和速度要*

13） 避免試劑中有微生物污染，尤其是酶聯(lián)物

14） 每一次吸取試劑，標(biāo)準(zhǔn)品，質(zhì)控品時(shí)都應(yīng)用干凈的槍頭