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產(chǎn)品簡介
詳細介紹
Cas核酸酶是CRISPR-Cas系統(tǒng)的核心組成部分，是一類RNA引導的核酸內(nèi)切酶。Cas核酸酶利用向?qū)NA精確識別目標核酸，隨后高效地切割目標核酸分子。在眾多Cas酶中，Cas9、Cas12a和Cas13a等，因其優(yōu)秀的性能，在基因編輯和體外診斷等多個領(lǐng)域已經(jīng)得到了廣泛的應(yīng)用。
艾迪基因積累了多年的Cas酶開發(fā)經(jīng)驗和搭建了成熟的蛋白表達純化平臺，可提供基因編輯用酶的定制服務(wù)。利用軟件輔助設(shè)計和優(yōu)化基因編輯用酶，并采用自主研發(fā)的Fish/Bait一步純化技術(shù)，簡化了蛋白純化流程，顯著提高了目標蛋白的回收率和純度，確保了編輯用酶的高活性。 
▍服務(wù)詳情
| 應(yīng)用領(lǐng)域 | 1、基因編輯 2、CRISPR檢測6/管) |
|---|---|
| 周期 | 快至1周 |
| 價格 | 3800元起 ； |
▍服務(wù)優(yōu)勢
▍技術(shù)路線
▍已開發(fā)產(chǎn)品種類/類型
| Spcas9 | Lbcas12a | Aapcas12b | Lbucas13a | Lwacas13a | |
|---|---|---|---|---|---|
| PAM/PFS | 5’-NGG-3’ | 5’-TTTV-3’ | 5’-TTN-3’ | None | None |
| None | dsDNA | dsDNA or ssDNA | dsDNA or ssDNA | ssRNA | ssRNA |
| Cis-cleavage | dsDNA | dsDNA or ssDNA | dsDNA or ssDNA | ssRNA | ssRNA |
| Trans-cleavage | None | ssDNA | ssDNA | ssRNA | ssRNA |
SpCas9是一種依賴于sgRNA引導的 DNA內(nèi)切核酸酶。在靶標DNA存在PAM（5’-NGG-3’）的情況下，SpCas9 Nuclease能在sgRNA引導下特異性結(jié)合并切割靶標dsDNA，使DNA雙鏈斷裂并生成平末端。其切割位點位于目標序列target sequence內(nèi)，距離PAM 3個堿基的位置。SpCas9不僅可用于基因編輯，還可應(yīng)用于體外靶標 DNA 的切割、目的片段的克隆等實驗。
LbCas12a是一種依賴crRNA介導的核酸內(nèi)切酶，在靶標雙鏈DNA存在PAM（（5’-TTTV-3’）序列的情況下，LbCas12a能在crRNA介導下特異性識別并切割雙鏈DNA，而LbCas12a 特異性切割靶標單鏈DNA不依賴PAM序列。LbCas12a-crRNA復合物與互補dsDNA或ssDNA結(jié)合后，其非特異性ssDNA反式切割活性被激活，通過設(shè)計兩端標記熒光基團或其它小分子標記的Reporter ssDNA，可實現(xiàn)Cas12a對DNA模板的檢測和信號放大，可通過熒光儀和試紙條觀察結(jié)果。
AapCas12b核酸酶是一種依賴 sgRNA介導的核酸內(nèi)切酶，在靶標雙鏈DNA存在PAM（5’-TTN-3’）序列的情況下，由sgRNA介導特異性識別并切割雙鏈DNA，而AapCas12b特異性切割靶標單鏈DNA則不依賴PAM序列。AapCas12b-crRNA復合物與互補的dsDNA或者ssDNA結(jié)合后，其非特異性ssDNA反式切割活性被激活。AapCas12b的好的反應(yīng)溫度為60℃，因此適合與環(huán)介導等溫擴增（LAMP）聯(lián)用。
LbuCas13a是一種由crRNA介導的核酸內(nèi)切酶，對PAM（PFS）位點無依賴性。在crRNA識別并切割靶標RNA時，Lbucas13a的反式切割活性被激活，可非特異切割體系中單鏈 RNA(ssRNA)。通過設(shè)計兩端標記熒光基團或者其他標記物的RNA探針，可實現(xiàn)對RNA模板的檢測和信號放大，可通過熒光儀或試紙條觀察結(jié)果。
LwaCas13a是一種由crRNA介導的核酸內(nèi)切酶，與LbuCas13a一樣，對PAM（PFS）位點無依賴性。在crRNA識別并切割靶標RNA時，Lwacas13a的反式切割活性被激活，可實現(xiàn)對體系中的ssRNA的非特異切割。通過設(shè)計兩端標記熒光基團或者其他標記物的RNA探針，可實現(xiàn)CRISPR/Cas13a對RNA模板的檢測和信號放大。可通過熒光儀或試紙觀察結(jié)果。
▍數(shù)據(jù)案例
通過活性測試，對比艾迪基因提供的基因編輯用酶與競品的性能。
反應(yīng)體系中添加待檢Target模板、Cas酶、crRNA和熒光探針，當crRNA與Cas酶組裝成功能復合物并識別Target模板后，會激活Cas酶的反式切割活性并切割熒光探針釋放出熒光信號，通過熒光值來反映酶的性能。左圖和右圖是分別針對Lbucas12a和Lwacas3a兩種酶進行測試，結(jié)果顯示，艾迪基因提供的酶的熒光強度更強，切割活性與靈敏性明顯更優(yōu)。
▍Cas酶現(xiàn)貨
▍FAQ
1、Cas9、Cas12和Cas13三者之間有什么區(qū)別？
Cas9、Cas12和Cas13三者的主要區(qū)別在于作用過程有差異：
Cas12與guide RNA、target DNA結(jié)合后會被激發(fā)針對ssDNA的反式剪切活性；Cas13與guide RNA、target RNA結(jié)合后會被激發(fā)針對ssRNA的反式剪切活性；而Cas9暫未被報道反式剪切活性。
Cas12與guide RNA、target DNA結(jié)合后會被激發(fā)針對ssDNA的反式剪切活性；Cas13與guide RNA、target RNA結(jié)合后會被激發(fā)針對ssRNA的反式剪切活性；而Cas9暫未被報道反式剪切活性。
2、dsDNA靶標和ssDNA靶標均能激活Cas12a的反式剪切活性嗎？哪種效率更高？
雙鏈DNA靶標和單鏈DNA靶標均能激活Cas12a的反式剪切活性(trans-cleavage，又名collateral cleavage)，這點與Cas12b相同。但不同的是，ssDNA靶標激發(fā)Cas12b反式活性的效率高于dsDNA靶標；而dsDNA靶標激發(fā)Cas12a反式活性的效率高于ssDNA靶標。
3、一般CRISPR相關(guān)試劑以及Cas蛋白可以存放多久？
CRISPR檢測相關(guān)試劑：
①RPA恒溫擴增試劑盒于-20℃保存，可長期存放。
②靶標質(zhì)?？砷L期存放-20℃ ③ Cas蛋白反復凍融容易影響活性，建議分裝多管，存放-80℃，根據(jù)實驗需要取出使用。另外，短期內(nèi)使用的，可放-20℃保存。
③crRNA容易降解，建議短時間內(nèi)用不到的于-80℃保存。
④探針是DNA雙鏈，相對來說沒有那么容易降解，可放-20℃保存。
①RPA恒溫擴增試劑盒于-20℃保存，可長期存放。
②靶標質(zhì)?？砷L期存放-20℃ ③ Cas蛋白反復凍融容易影響活性，建議分裝多管，存放-80℃，根據(jù)實驗需要取出使用。另外，短期內(nèi)使用的，可放-20℃保存。
③crRNA容易降解，建議短時間內(nèi)用不到的于-80℃保存。
④探針是DNA雙鏈，相對來說沒有那么容易降解，可放-20℃保存。
該產(chǎn)品被引用文獻
▍客戶文章
1、PAIT effect: Padlock activator inhibits the trans-cleavage activity of CRISPR/Cas12a
2、Optimization of CRISPR/Cas12a detection assay and its application in the detection of Echinococcus g
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