HFF-1人皮膚成纖維細(xì)胞

細(xì)胞詳情

細(xì)胞名稱人皮膚成纖維細(xì)胞HFF-1

貨    號

SAc0154

組織來源

新生男孩，皮膚，包皮

細(xì)胞形態(tài)

成纖維細(xì)胞

生長方式

貼壁生長

描    述

飼養(yǎng)層細(xì)胞， 供H1、H9、HN4、HN1等hES使用。

培養(yǎng)條件

DMEM，15%FBS，丙酮酸鈉；空氣95%，二氧化碳5%；37℃培養(yǎng)

換液頻率

2-3天

傳代周期

3-4天

傳代比例

1:3-1:6

凍存液配方

基礎(chǔ)培養(yǎng)液，40%FBS，DMSO 10%

安全性BSL-1

供應(yīng)限制僅供研究之用。

HFF-1人皮膚成纖維細(xì)胞

細(xì)胞操作詳細(xì)步驟----貼壁細(xì)胞

1.細(xì)胞復(fù)蘇

1.1離心法

1.1.1準(zhǔn)備一個T25的細(xì)胞培養(yǎng)瓶并做好標(biāo)記，預(yù)熱好的細(xì)胞培養(yǎng)基，一支15ml離心管，離心管中加入4-5ml細(xì)胞培養(yǎng)基。

1.1.2取出細(xì)胞凍存管，在37度水浴中快速解凍，將管子擦干并消毒后迅速拿回生物安全柜。

1.1.3將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移到加有培養(yǎng)基的離心管中，1000轉(zhuǎn)離心5分鐘。

1.1.4倒掉上清，加入培養(yǎng)基輕輕重懸細(xì)胞亦可先將細(xì)胞團(tuán)彈散后加入培養(yǎng)基混勻。

1.1.5將重懸好的細(xì)胞轉(zhuǎn)移到T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶，補(bǔ)充培養(yǎng)基到8ml左右，十字搖晃，將細(xì)胞鋪勻后放入培養(yǎng)箱培養(yǎng)。

1.2不離心法

1.2.1準(zhǔn)備一個T25的細(xì)胞培養(yǎng)瓶并做好標(biāo)記，預(yù)熱好的細(xì)胞培養(yǎng)基，培養(yǎng)瓶中加入8ml左右培養(yǎng)基。

1.2.2取出細(xì)胞凍存管，在37度水浴中快速解凍，將管子擦干并消毒后迅速拿回生物安全柜。

1.2.3將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移到加有培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中，十字搖晃，將細(xì)胞鋪勻后放入培養(yǎng)箱培養(yǎng)，接種16小時后更換培養(yǎng)基。

2.細(xì)胞傳代

2.1準(zhǔn)備細(xì)胞培養(yǎng)基，細(xì)胞培養(yǎng)瓶，（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA），DPBS。

2.2棄上清，并加2-3mlDPBS輕柔沖洗培養(yǎng)瓶內(nèi)細(xì)胞1-2次。

2.3加入1ml，室溫或者37度消化，直到細(xì)胞成片脫落，加入3-4ml培養(yǎng)基終止消化，如果有成團(tuán)塊脫落的細(xì)胞可輕輕吹打分散細(xì)胞后再終止消化。（注意：消化時間與所用效價，消化時候細(xì)胞密度以及溫度等因素有關(guān)，建議第一次消化時候，多在顯微鏡下觀察，以找到最佳消化時間）

2.4收集細(xì)胞懸液，1000轉(zhuǎn)離心5分鐘，棄上清，加入培養(yǎng)基輕輕重懸細(xì)胞亦可先將細(xì)胞團(tuán)彈散后加入培養(yǎng)基混勻。

2.5將重懸好的細(xì)胞按比例分裝至T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶，補(bǔ)充培養(yǎng)基到8ml左右，十字搖晃，將細(xì)胞鋪勻后放入培養(yǎng)箱培養(yǎng)。

3.細(xì)胞凍存

3.1準(zhǔn)備細(xì)胞凍存液，細(xì)胞凍存管，（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA），DPBS。

3.2棄上清，并加2-3mlDPBS輕柔沖洗培養(yǎng)瓶內(nèi)細(xì)胞1-2次。

3.3加入1ml，室溫或者37度消化，直到細(xì)胞成片脫落，加入培養(yǎng)基終止消化，如果有成團(tuán)塊脫落的細(xì)胞可輕輕吹打分散細(xì)胞后再終止消化。

3.4收集細(xì)胞懸液，1000轉(zhuǎn)離心5分鐘，棄上清。

3.5加入凍存液，重懸細(xì)胞，并分裝到凍存管，凍存密度0.8-1.5×10⁶細(xì)胞/ml。

3.6將凍存管放入程序降溫盒，并放到-80℃冰箱，過夜后將凍存管轉(zhuǎn)移到液氮保存。

4.注意事項

4.1建議收到細(xì)胞后先用我們配套的培養(yǎng)基和血清。收到活細(xì)胞的客戶培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基可回收使用，保存在4度可使用一周。

4.2不同實驗室操作上會有些許差異，為了避免細(xì)胞不適應(yīng)，請先按照說明書推薦的方法和操作步驟培養(yǎng)，待細(xì)胞凍存后可根據(jù)自己的習(xí)慣操作看細(xì)胞是否能夠適應(yīng)。

4.3建議收到細(xì)胞后，前幾代及時凍存一些細(xì)胞，并最好是可以多凍存幾個批次。