NobleRyder C9988 DH5α感受態(tài)細胞E.coli DH5α Competent Cells

產(chǎn)品貨號：C9988

產(chǎn)品名稱：DH5α感受態(tài)細胞E.coli DH5α Competent Cells

英文名稱：E.coli DH5α Competent Cells

產(chǎn)品規(guī)格：20*100ul/10*100ul

DH5α感受態(tài)細胞 載體構(gòu)建

產(chǎn)品簡介：

外觀(性狀)：干冰運輸，單加10kg干冰費

儲存條件：液氮保存至少一年，-70℃保存至少6個月

具體產(chǎn)品的參數(shù)以收到產(chǎn)品說明書的參數(shù)為準

NobleRyder C9988 DH5α感受態(tài)細胞E.coli DH5α Competent Cells

DH5α感受態(tài)細胞是采用大腸桿菌DH5α菌株經(jīng)特殊工藝制備得到，可用于DNA的化學(xué)轉(zhuǎn)化。使用pUC19質(zhì)粒檢測，轉(zhuǎn)化效率可達108，-70℃保存3-5個月轉(zhuǎn)化效率不發(fā)生改變。

基因型: supE44△lacU169（φ80lacZ△M15）hsdR17recA1 endA1 gyrA96 thi-1 relA1。

特點: 一種用于鋪制與培養(yǎng)質(zhì)粒平板和粘粒平板的重組缺陷的抑制型菌株。其φ80lacZ△M15 基因的產(chǎn)物可與pUC載體編碼的 β-半乳糖苷酶氨基端實現(xiàn)β互補，可用于藍白斑篩選。

操作方法：（以下操作均按無菌條件的標準進行）

1、將感受態(tài)細胞置于冰上融化，以下實驗以100ul感受態(tài)細胞為例。

2、向感受態(tài)細胞懸液中加入需轉(zhuǎn)化的目的DNA，注意目的DNA的體積不要超過感受態(tài)細胞懸液體積的十分之一，輕輕旋轉(zhuǎn)離心管以混勻內(nèi)容物，冰浴放置30分鐘。

3、將離心管置于42℃水浴中60-90秒，然后快速轉(zhuǎn)移到冰浴中放置2-3分鐘，注意不要搖動離心管。

4、向離心管中加入500ul無菌無抗的SOC或LB培養(yǎng)基，37℃180rpm振蕩培養(yǎng)1小時。目的是使質(zhì)粒上相關(guān)的抗性標記基因表達，使菌體復(fù)蘇。

5、取適量已轉(zhuǎn)化的感受態(tài)細胞涂布含相應(yīng)抗生素的SOC或LB平板，37℃倒置培養(yǎng)12-16小時。涂布用量可根據(jù)具體實驗來調(diào)整，如轉(zhuǎn)化的DNA總量較多，可取100ul左右的轉(zhuǎn)化產(chǎn)物涂板；反之，如轉(zhuǎn)化的DNA總量較少，可取200-300ul的轉(zhuǎn)化產(chǎn)物涂板。過多菌液可以抑制細菌生長。如果預(yù)計的克隆較少，可通過離心后吸除部分培養(yǎng)液，懸浮菌體后將其涂布于一個平板中。涂布剩余的菌液可4℃保存，如果次日的轉(zhuǎn)化菌落數(shù)過少，可以將剩下的菌液再涂布新的平板。

注意事項：

1、感受態(tài)細胞應(yīng)保存在-70℃，不可反復(fù)凍融，否則其轉(zhuǎn)化效率將會降低。

2、實驗過程中應(yīng)嚴格無菌操作，防止其它DNA或雜菌的污染，避免為以后的篩選、鑒定帶來影響。

3、轉(zhuǎn)化時，轉(zhuǎn)化效率與外源DNA的濃度在一定范圍內(nèi)成正比，但當(dāng)加入的外源DNA量過多或體積過大反而會降低轉(zhuǎn)化效率。轉(zhuǎn)化時DNA體積要小于感受態(tài)細胞體積的十分之一。

4、轉(zhuǎn)化率的計算：轉(zhuǎn)化率＝產(chǎn)生菌落的總數(shù)/鋪板DNA總量。

5、為防止轉(zhuǎn)化實驗不成功，可以保留部分連接產(chǎn)物，以重新轉(zhuǎn)化，將損失降到最di。

DH5α感受態(tài)細胞 載體構(gòu)建 

產(chǎn)品訂購信息：

C9988 DH5α感受態(tài)細胞E.coli DH5α Competent Cells  20*100ul/10*100ul