hESC細(xì)胞培養(yǎng)教程
一.傳代條件
細(xì)胞滿足以下條件之一,即需要進(jìn)行細(xì)胞傳代:
1. 細(xì)胞匯合度達(dá)85%左右,移動(dòng)視野觀察細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài),整個(gè)皿密度均勻,沒(méi)有過(guò)大的克隆或者克隆過(guò)于致密的部分,一般皿中心部分比邊緣密度略大;一般情況下每4天傳代一次,即使克隆團(tuán)較小,匯合度不足,也建議不要連續(xù)培養(yǎng)超過(guò)5天;
2. 細(xì)胞匯合度較低,但干細(xì)胞集落過(guò)大,中央細(xì)胞生長(zhǎng)不良;
二.傳代間隔和比例
1. 可根據(jù)細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)和實(shí)驗(yàn)需求按1:5~1:20的比列進(jìn)行傳代;
2. 如果細(xì)胞正常,克隆匯合度85%, 大小均勻,建議按照1:10進(jìn)行傳代;
3. 如果密度偏低,則可降低傳代比例,密度偏高,則增加傳代比例。
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