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細(xì)胞實(shí)驗(yàn)注意事項(xiàng)2023/07/06
1、細(xì)胞復(fù)蘇將細(xì)胞凍存管從干冰中取出，立即放置37°水浴速融1min，見無(wú)冰晶即可不再水?。ㄓ描囎幽萌。⒓?xì)胞凍存液加入10~15ml完培中，吹打混勻，減少DMSO對(duì)細(xì)胞毒性，800rpm離心5min棄上清，細(xì)胞沉淀進(jìn)行下一步傳代。2、細(xì)胞傳代試劑與材料（貼壁細(xì)胞）：細(xì)胞：4T1乳腺癌細(xì)胞；基礎(chǔ)培養(yǎng)基：1640培養(yǎng)基（含有生物素、維生素B12、對(duì)氨基苯甲酸PABA、高濃度的維生素肌醇和膽堿；不含有蛋白質(zhì)、脂質(zhì)或生長(zhǎng)因子）；血清：胎牛血清FBS（細(xì)胞營(yíng)養(yǎng)液：提供基本營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)、提供激素和各種生長(zhǎng)因子
CCK8細(xì)胞實(shí)驗(yàn)2023/07/04
實(shí)驗(yàn)一：細(xì)胞增殖分析1）制備細(xì)胞懸液，計(jì)數(shù)。2）在96孔板中接種細(xì)胞懸液，每孔約100μl，同樣的樣本可做3個(gè)重復(fù)。3）將培養(yǎng)板放入培養(yǎng)箱中預(yù)培養(yǎng)一段時(shí)間（37℃,5%CO2），細(xì)胞貼壁需要大約2-4h，如果是懸浮細(xì)胞，該步驟可以省去。4）每孔各加入10μlCCK-8溶液，由于加入的CCK-8量比較少，可能會(huì)因試劑沾在孔壁上而帶來(lái)誤差，建議在加完試劑后輕輕晃動(dòng)培養(yǎng)板以幫助混勻，或者直接配置含10%CCK-8的培養(yǎng)基，以換液的形式加入。另外注意，加樣的過(guò)程中盡量不要產(chǎn)生氣泡。5）將培養(yǎng)板放入培養(yǎng)箱
elisa試劑盒的產(chǎn)品特點(diǎn)及操作方法2023/07/03
產(chǎn)品特點(diǎn)：一、高效、靈敏、特異的抗體；二、穩(wěn)定的重復(fù)性和可靠性；三、吸附性能好，空白值低，孔底透明度高的固相載體；四、適用血清、血漿、組織勻漿液、細(xì)胞培養(yǎng)上清液、尿液等等多種標(biāo)本類型；五、節(jié)省實(shí)驗(yàn)經(jīng)費(fèi)。elisa試劑盒回收率是反應(yīng)待測(cè)物在樣品分析過(guò)程中的損失的程度，損失越少，回收率越高，如果作標(biāo)液1PPM，就是1毫克/升，而作出標(biāo)準(zhǔn)數(shù)據(jù)為0.99毫克/升，就是說(shuō)你的回收率是99%，這個(gè)與真實(shí)成分有密切的關(guān)系，說(shuō)明方法的準(zhǔn)確度。比如水中總無(wú)機(jī)氯含量測(cè)定，樣品水中含有無(wú)機(jī)氯20mg/L，取100mL
如何配置PBS？2023/06/30
PBS作為生物實(shí)驗(yàn)中試劑，PBS是磷酸緩沖鹽溶液，一般作為溶劑，起溶解保護(hù)試劑的作用。一般的有活性的生物制劑都要用它來(lái)稀釋。它具有鹽平衡、可調(diào)整適宜pH、可以緩沖pH等特點(diǎn)。PBS、蒸餾水和生理鹽水三種溶劑該怎么選擇呢？蒸餾水不具有鹽平衡作用，可以破壞生物蛋白的結(jié)構(gòu)及生物特性；而生理鹽水不具有調(diào)整pH的作用，對(duì)完整的、具有活性的物質(zhì)不能保證其在最適條件下參與生物反應(yīng)。在實(shí)驗(yàn)室也常見PB、PBST溶液。PB溶液的成分通常有磷酸鈉和磷酸鉀。若只是化學(xué)反應(yīng),用PB溶液就行。在PB的基礎(chǔ)上按照一定比例加
如何養(yǎng)細(xì)胞？2023/06/29
一、細(xì)胞的營(yíng)養(yǎng)來(lái)源針對(duì)大多數(shù)腫瘤細(xì)胞，營(yíng)養(yǎng)配方一般為：90%合成培養(yǎng)基(DMEM、RPMI1640、MEM等)和10%胎牛血清(FBS);為了防止污染，可以加1%雙抗常見問(wèn)題解答：Q：針對(duì)不同細(xì)胞，細(xì)胞培養(yǎng)基配方一樣嗎?如何獲知呢?A：不同細(xì)胞的培養(yǎng)基是不同的。一般ATCC購(gòu)買的細(xì)胞，針對(duì)不同細(xì)胞株，會(huì)有詳細(xì)介紹，包括生長(zhǎng)的狀態(tài)圖、培養(yǎng)基的類型等。如人源乳腺癌細(xì)胞MCF-7細(xì)胞一般為1640，人源肺癌細(xì)胞A549可用DMEM培養(yǎng)基。Q：培養(yǎng)基為什么一般都是偏紅色?A：因?yàn)榕囵B(yǎng)基加了酚紅來(lái)顯示顏色
空氣位移移液管如何工作？2023/06/28
設(shè)置容積時(shí)，活塞將移動(dòng)到適當(dāng)?shù)奈恢?。?dāng)操作按鈕按下第一檔時(shí)，活塞會(huì)排出音量設(shè)置上指示的相同空氣量。將頂端浸入液體后，操作按鈕被釋放。這會(huì)產(chǎn)生部分真空，并吸入體積的液體進(jìn)入頂端。當(dāng)操作按鈕再次按下第一檔時(shí)，進(jìn)入槍頭頂端的液體不會(huì)吹出。要清空頂端，需要將按鈕將按下到第二檔。影響空氣置換移液器精度的因素：溫度：移液精度最重要的因素是液體溫度。下圖顯示了液體溫度與移液器和空氣不同的時(shí)體積的變化。如果液體、移液器和空氣的溫度相同，則精度不會(huì)受到顯著影響。密度：密度是液體的質(zhì)量/體積比。密度根據(jù)溫度和氣壓而
如何選擇包埋劑2023/06/26
包埋劑的分類一般用光學(xué)顯微鏡觀察的切片，用石蠟、火棉膠、碳蠟、明膠等作包埋劑；電子顯微鏡則使用環(huán)氧杯脂、聚苯乙/烯樹脂、異丁/烯樹脂及水溶性樹脂；硬組織包埋(骨、牙齒)則采用塑料包埋，甲酯甲基內(nèi)/烯。*實(shí)際上包埋劑就是浸誘劑，浸透和包埋時(shí)用的是同一種物質(zhì)，只是用在不同的步驟上叫法不同而已。如用石蠟作浸透，那么同樣要用同樣的石蠟包埋。如何選擇合適的包埋劑包埋劑的作用組織對(duì)象有特定需求，選擇合適包埋劑可以提高包埋質(zhì)量，從而提高切片質(zhì)量。接下來(lái)，為大家簡(jiǎn)單做了分類：石蠟：常用常見的包埋劑，是病理制片經(jīng)
細(xì)胞分裂的原理、作用2023/06/25
細(xì)胞分裂（celldivision）是指活細(xì)胞增殖及其數(shù)量由一個(gè)細(xì)胞分裂為兩個(gè)細(xì)胞的過(guò)程。分裂前的細(xì)胞稱母細(xì)胞（mothercell），分裂后形成的新細(xì)胞稱子細(xì)胞（daughtercell）。通常包括細(xì)胞核分裂和細(xì)胞質(zhì)分裂兩步。在核分裂過(guò)程中母細(xì)胞把遺傳物質(zhì)傳給子細(xì)胞。真核細(xì)胞分裂包括有絲分裂、減數(shù)分裂、無(wú)絲分裂。細(xì)胞分裂（celldivision）是活細(xì)胞增殖其數(shù)目由一個(gè)細(xì)胞分裂為兩個(gè)細(xì)胞的過(guò)程。分裂前的細(xì)胞稱母細(xì)胞，分裂后形成的新細(xì)胞稱子細(xì)胞。一般包括細(xì)胞核分裂和細(xì)胞質(zhì)分裂兩步。在核分裂過(guò)程
如何選擇合適的細(xì)胞培養(yǎng)板？2023/06/21
細(xì)胞培養(yǎng)板依底部形狀的不同可分為平底和圓底（U型和V型）；培養(yǎng)孔的孔數(shù)有6、12、24、48、96、384、1536孔等；根據(jù)材質(zhì)的不同有Terasaki板和普通細(xì)胞培養(yǎng)板。具體選擇時(shí)根據(jù)培養(yǎng)細(xì)胞的類型、所需培養(yǎng)體積及不同的實(shí)驗(yàn)?zāi)康亩ā＃?）平底和圓底（U型和V型）培養(yǎng)板的區(qū)別和選擇不同形狀的培養(yǎng)板有不同用途。培養(yǎng)細(xì)胞，通常是選用平底的，這樣便于鏡下觀測(cè)、有明確的底面積、細(xì)胞培養(yǎng)液面高度相對(duì)一致。因此做MTT等實(shí)驗(yàn)時(shí)，無(wú)論是貼壁和懸浮細(xì)胞，一般選用平底板。測(cè)吸光值一定要使用平底的培養(yǎng)板。要特別
PDA培養(yǎng)基的配制，特點(diǎn)及用途2023/06/20
PDA培養(yǎng)基是人們對(duì)馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基的簡(jiǎn)稱，即PotatoDextroseAgar（Medium），依次對(duì)應(yīng)馬鈴薯、葡萄糖、瓊脂的英文。特點(diǎn)及用途：一種常用的培養(yǎng)基，宜培養(yǎng)酵母菌、霉菌、蘑菇等真菌按物理性狀劃分：固體培養(yǎng)基按培養(yǎng)基成分劃分：半合成培養(yǎng)基PDA培養(yǎng)基的配制(1)稱量和熬煮按培養(yǎng)基配方逐一稱取去皮土豆。土豆切成小塊放入鍋中，加水1000ml，在加熱器上加熱至沸騰，維持20-30min，用可用2層紗布趁熱在量杯上過(guò)濾，濾渣棄取。濾液補(bǔ)充水分到1000ml。(2)加熱溶解把濾液放入
超濾蛋白純化實(shí)驗(yàn)如何進(jìn)行？2023/06/19
1.制備培養(yǎng)濾液搖好的培養(yǎng)液，細(xì)胞篩過(guò)濾去菌絲球，離心去細(xì)小菌絲，0.22uM過(guò)濾去細(xì)小顆粒。2.超濾濃縮、更換buffer1）新買的超濾管使用Milli-Q水進(jìn)行預(yù)清洗。定角轉(zhuǎn)子，使超濾內(nèi)管的膜面朝上，膜與軸垂直。加入蛋白液前，超濾管需要插在冰上預(yù)冷。2）脫鹽或更換緩沖液是從含有生物分子的溶液中去除鹽分或溶劑的重要方法。鹽分去除或緩沖液的更換可通過(guò)超濾管來(lái)完成。上超濾柱之后4度離心，離心時(shí)間很長(zhǎng)，協(xié)調(diào)好離心機(jī)。4度，5000g，每半小時(shí)查看離心狀況。濃縮至1ml輕輕加入新的Buffer（經(jīng)0.
DAPI配置方法2023/06/15
DAPI是一種可與DNA的小溝結(jié)合的細(xì)胞滲透性熒光探針，它可與雙鏈DNA結(jié)合，發(fā)出藍(lán)色熒光，熒光強(qiáng)度是自身的20倍。瓊脂糖凝膠電泳DNA的染色中DAPI的染色效果是溴化乙淀的數(shù)倍。DAPI也能對(duì)RNA染色，染色機(jī)理是其可以選擇性嵌入“AU序列”并發(fā)出熒光。DAPI常用于細(xì)胞凋亡檢測(cè)，染色后用熒光顯微鏡觀察或流式細(xì)胞儀檢測(cè)。盡管DAPI不能通過(guò)活細(xì)胞膜，但卻能穿透擾亂的細(xì)胞膜而對(duì)核染色。DAPI具有很高的光漂白承受水平，能用來(lái)檢測(cè)酵母線粒體DNA，葉綠體DNA，病毒DNA，支原體DNA以及染色體D
使用細(xì)胞分離液的注意事項(xiàng)2023/06/12
一、分離方法會(huì)影響胰島的產(chǎn)率和存活率：因此，取材時(shí)需要注意1.胰臟應(yīng)快速取材，保持包膜完整。2.建議采用UW溶液運(yùn)輸。3.對(duì)胰臟進(jìn)行評(píng)估，在消化酶灌注前去除多余的脂肪和殘留的十二指腸和脾臟。4.消化過(guò)程不宜進(jìn)行震蕩，以保證胰腺組織被灌注的消化酶液消化，而不是被胰腺所釋放的胰蛋白酶消化。5.要保證胰島的包膜完整，消化不能太充分。寧可不足，也不可過(guò)頭，否則會(huì)影響胰島純化的產(chǎn)率。二、分離胰島細(xì)胞時(shí)的注意事項(xiàng)：1.biocoll分離液使用時(shí)，是采用連續(xù)密度梯度，需要分別配制密度為1.065g/mL（UW
常用培養(yǎng)基的特征2023/06/07
1、BME細(xì)胞培養(yǎng)基基礎(chǔ)Eagle培養(yǎng)基（BasalMediumEagle），1955年Eagle設(shè)計(jì)，BSS＋12種氨基酸＋谷氨酰胺＋8種維生素。簡(jiǎn)單、便于添加，適于各種傳代細(xì)胞系和特殊研究用，在此基礎(chǔ)上改良的細(xì)胞培養(yǎng)基品種有MEM、DMEM、IMDM等。2、MEM細(xì)胞培養(yǎng)基Eagle培養(yǎng)基（MinimalEssentialMedium），1959年在Eagle's基礎(chǔ)培養(yǎng)基（BME）上修改而來(lái)，刪去賴氨酸、生物素，氨基酸濃度增加，適合多種細(xì)胞單層生長(zhǎng)，有可高壓滅菌品種，是一種最基本、試用范圍
五種常見生化試劑盒2023/06/06
1.多酚氧化酶（PPO）活性檢測(cè)試劑盒（比色法）：多酚氧化酶（PPO）能夠催化Catechol產(chǎn)生醌，后者在525nm有特征光吸收，測(cè)定525nm光吸收增加的速率進(jìn)而計(jì)算多酚氧化酶（PPO）活性。該試劑盒適用的樣本范圍廣泛包括血清、血漿、組織、細(xì)胞、細(xì)菌；而且細(xì)致優(yōu)化了樣本處理方法、實(shí)驗(yàn)操作流程以及結(jié)果計(jì)算過(guò)程。2.血鉀（K?）檢測(cè)試劑盒（比色法）：血清中鉀離子（K+）與四苯硼鈉作用，形成不溶于水的四苯硼鉀，產(chǎn)生的濁度在一定范圍內(nèi)與鉀離子濃度成正比；通過(guò)測(cè)定其濁度來(lái)測(cè)定血清鉀含量。該試劑盒提供了
CCK-8細(xì)胞實(shí)驗(yàn)原理及步驟2023/06/02
一、原理：CCK-8試劑盒用于快速靈敏地檢測(cè)細(xì)胞增殖和細(xì)胞毒性。工作原理為：在電子耦合試劑存在的情況下，WST-8（化學(xué)名：2-(2-甲氧基-4-硝苯基)-3-(4-硝苯基)-5-(2,4-二磺基苯)-2H-四唑單鈉鹽），可以被線粒體內(nèi)的脫氫酶還原生成高度水溶性的橙黃色的甲臜產(chǎn)物（formazan），其顏色的深淺與細(xì)胞增殖成正比，與細(xì)胞毒性成反比，對(duì)同樣的細(xì)胞，顏色的深淺和細(xì)胞數(shù)目呈線性關(guān)系。使用酶標(biāo)儀在450nm波長(zhǎng)處測(cè)定OD值，可以間接反映活細(xì)胞的數(shù)量。二、用途：可用于細(xì)胞增殖測(cè)定、細(xì)胞毒性
四種常見的ELISA方法2023/06/01
1.直接ELISA將抗原固定于ELISA板上，然后用酶標(biāo)抗體直檢測(cè)抗原。相較于其它類型的ELISA實(shí)驗(yàn)，直接ELISA實(shí)驗(yàn)步驟少，檢測(cè)速度快，不需要用到二抗，避免了交叉反應(yīng)，測(cè)定結(jié)果不容易出錯(cuò)。但是由于直接ELISA的抗原不是特異性固定的，樣本中的靶蛋白及其他雜質(zhì)蛋白都會(huì)與ELISA板結(jié)合，實(shí)驗(yàn)背景會(huì)比較高。而且直接ELISA每種靶蛋白都需要準(zhǔn)備能夠與其特異性結(jié)合的一抗，實(shí)驗(yàn)不太靈活。另外由于沒(méi)有使用二抗，信號(hào)沒(méi)有被放大，降低了測(cè)定的靈敏度。2.間接ELISA先將抗原結(jié)合到ELISA板上，隨后分
EdU法細(xì)胞增殖檢測(cè)介紹2023/05/30
一、什么是細(xì)胞增殖呢？細(xì)胞增殖是生物體的重要生命特征，細(xì)胞以分裂的方式進(jìn)行增殖。單細(xì)胞生物，以細(xì)胞分裂的方式產(chǎn)生新的個(gè)體。多細(xì)胞生物，以細(xì)胞分裂的方式產(chǎn)生新的細(xì)胞，用來(lái)補(bǔ)充體內(nèi)衰老或死亡的細(xì)胞。二、細(xì)胞增殖的意義和方式意義：細(xì)胞增殖是生活細(xì)胞的重要生理功能之一，是生物體的重要生命特征。細(xì)胞的增殖是生物體生長(zhǎng)、發(fā)育、繁殖以及遺傳的基礎(chǔ)。方式：真核生物的分裂依據(jù)過(guò)程不同有三種方式，有有絲分裂，無(wú)絲分裂，減數(shù)分裂。其中有絲分裂是人、動(dòng)物、植物、真菌等一切真核生物中的一種zui為普遍的分裂方式，是真核細(xì)
如何辨別細(xì)胞培養(yǎng)血清？2023/05/25
一、外觀1、顏色根據(jù)血紅蛋白含量的不同，胎牛血清可表現(xiàn)出黃色或紅色，我國(guó)的細(xì)胞培養(yǎng)用血清標(biāo)準(zhǔn)是不高于20mg/dl，實(shí)際上，血紅蛋白含量的高低對(duì)血清并無(wú)直接影響，這個(gè)指標(biāo)的意義在于能體現(xiàn)出采血過(guò)程的嚴(yán)謹(jǐn)規(guī)范程度，良好的操作能降低血清的溶血。國(guó)產(chǎn)血清的采血點(diǎn)很分散，大多是由屠戶采血后馬上離心收集，所以很少會(huì)有溶血，表現(xiàn)出明亮的蠟黃色，當(dāng)然，國(guó)產(chǎn)血清也很少有標(biāo)準(zhǔn)意義上的胎牛血清。進(jìn)口胎牛血清或多或少總有點(diǎn)溶血，因?yàn)檎嬲奶ヅＱ迥δ懿?，紅細(xì)胞容易破裂?？偟膩?lái)說(shuō)，國(guó)產(chǎn)的血清呈現(xiàn)出蠟黃。進(jìn)口的血清，
牛血清白蛋白的組要成分有哪些？2023/05/22
牛血清白蛋白（BSA），是牛血清中的一種球蛋白，包含607個(gè)氨基酸殘基，分子量為66.446KDa，等電點(diǎn)為4.7。牛血清白蛋白在生化實(shí)驗(yàn)中有廣泛的應(yīng)用。成分：蛋白質(zhì)是牛血清中主要成份。除包括可攜帶金屬離子、脂肪酸和自身是激素類蛋白外主要還有白蛋白，球蛋白。纖維粘連素細(xì)胞促進(jìn)細(xì)胞附著；α2巨球蛋白抑制胰蛋白酶的作用；胎牛血清中含胎球蛋白促細(xì)胞附著；轉(zhuǎn)鐵蛋白能結(jié)合鐵離子，減少其毒性和被細(xì)胞利用。多肽血小板促生長(zhǎng)因子能促細(xì)胞分裂，是多肽家庭的主要成員之一，是主要的促細(xì)胞增殖因子；成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子、
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