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葉綠體的分離與熒光觀察2023/01/29
原理組織勻漿后懸浮在等滲介質(zhì)中進(jìn)行差速離心，是分離細(xì)胞器的常用方法。一個(gè)顆粒在離心場中的沉降速率取決于顆粒的大小、形狀、密度、離心力及介質(zhì)黏度等。同一離心場中，同一時(shí)間內(nèi)，密度和大小不同的顆粒沉降速率不同。依次增加離心力和離心時(shí)間，就能使非均一的懸浮液中的顆粒按其大小、密度先后分批沉降在離心管底部，從而可分批收集各種亞細(xì)胞成分。材料與儀器新鮮菠菜氯化鈉離心機(jī)組織搗碎機(jī)顯微鏡天平離心管紗布燒杯量筒滴管載玻片、蓋玻片步驟一、實(shí)驗(yàn)步驟1.選取新鮮的嫩菠菜葉，洗凈擦干后去除葉梗及粗脈，稱30g于150m
砷鉬酸比色法2023/01/16
原理還原糖是具有羰基（C=O）的糖，能將其它物質(zhì)還原而其本身被氧化。（1）還原糖在堿性條件及有酒石酸鉀鈉存在下加熱，可以定量地還原二價(jià)銅離子為一價(jià)銅離子，產(chǎn)生磚紅色的氧化亞銅沉淀，其本身被氧化。具體反應(yīng)如下：（2）氧化亞銅在酸性條件下，可將鉬酸銨還原，還原型的鉬酸銨再與砷-酸氫二鈉起作用，生成一種藍(lán)色復(fù)合砷鉬藍(lán)，其顏色深淺在一定范圍內(nèi)與還原糖的含量（即被還原的Cu2O量）成正比，用標(biāo)準(zhǔn)葡萄糖與砷鉬酸作用，比色后做標(biāo)準(zhǔn)，就可測得樣品還原糖含量。材料與儀器植物材料銅試劑砷鉬酸試劑標(biāo)準(zhǔn)葡萄糖原液分光光
分光光度法測定葉綠素含量2023/01/16
原理葉綠素廣泛存在于果蔬等綠色植物組織中，并在植物細(xì)胞中與蛋白質(zhì)結(jié)合成葉綠體。當(dāng)植物細(xì)胞死亡后，葉綠素即游離出來，游離葉綠素很不穩(wěn)定，對光、熱較敏感；在酸性條件下葉綠素生成綠褐色的脫鎂葉綠素，在稀堿液中可水解成鮮綠色的葉綠酸鹽以及葉綠醇和甲醇。高等植物中葉綠素有兩種：葉綠素a和b，兩者均易溶于乙醇、乙-醚、丙酮和氯仿。葉綠素的含量測定方法有多種，其中主要有：1.原子吸收光譜法：通過測定鎂元素的含量，進(jìn)而間接計(jì)算葉綠素的含量。2.分光光度法：利用分光光度計(jì)測定葉綠素提取液在最大吸收波長下的吸光值，
植物細(xì)胞的活體染色與死活鑒定2023/01/16
原理活體染色是利用某種對植物無害的染料溶液對活細(xì)胞進(jìn)行染色的技術(shù)。中性紅是常用的活體染料之一，它是一種弱堿性pH指示劑，變色范圍在pH6.4-8.0之間（由紅變黃）。在中性或微堿性環(huán)境中，植物的活細(xì)胞能大量吸收中性紅并向液泡中排泌，由于液泡在一般情況下呈酸性反應(yīng)。因此，進(jìn)入液泡的中性紅便解離出大量陽離子而呈現(xiàn)櫻桃紅色，在這種情況下，原生質(zhì)和細(xì)胞壁一般不著色；死細(xì)胞由于原生質(zhì)變性凝固，胞液不能維持在液泡內(nèi)。因此，用中性紅染色后，不產(chǎn)生液泡著色現(xiàn)象。相反，中性紅的陽離子，卻與帶有一定負(fù)電荷的原生質(zhì)及
葉綠體被膜完整性的測定2023/01/16
原理由于玻璃氰-化-鉀不能透過被膜，故完整葉綠體在等滲介質(zhì)中不能進(jìn)行玻璃氰-化-鉀光還原的Hill反應(yīng)。而失去完整被膜的葉綠體，鐵氰-化-鉀可以進(jìn)入類囊體進(jìn)行Hill反應(yīng)。根據(jù)這一原理，比較脹破與未脹破的葉綠體Hill反應(yīng)速率，就可計(jì)算葉綠體被膜的完整度。材料與儀器植物材料鐵氰-化-鉀NH4Cl氧電極測氧全套裝置燒杯微量進(jìn)樣器洗耳球步驟1.取0.1ml葉綠體提取液加到0.9ml的蒸餾水中并攪拌1min，使葉綠體被膜脹破，加1ml測定介質(zhì)Ⅰ懸浮備用。2.取0.1ml未脹破葉綠體提取液加入反應(yīng)杯中，
細(xì)胞傷口愈合2023/01/16
原理在單層培養(yǎng)細(xì)胞間制作劃痕以產(chǎn)生愈傷區(qū)域，然后監(jiān)控該傷口周圍細(xì)胞的向劃痕遷移的現(xiàn)象，即傷口愈合。改變細(xì)胞遷移和/或生長的因素可以增加或降低傷口愈合率。該方法可以定量，適用于自動化系統(tǒng)高通量篩選。材料與儀器人MDA-MB-231細(xì)胞DMEM培養(yǎng)基胎牛血清PBS戊二醛乙醇結(jié)晶紫24孔培養(yǎng)板槍頭細(xì)胞培養(yǎng)儀步驟1.細(xì)胞在含有10%FBS的DMEM培養(yǎng)基中生長。2.細(xì)胞以一定密度接種到24孔細(xì)胞培養(yǎng)板中，生長24小時(shí)后，單層細(xì)胞融合度應(yīng)達(dá)到70-80%。3.不要更換培養(yǎng)基。用新的1ml槍頭輕輕的在單層培
一氧化氮合酶免疫組化顯示實(shí)驗(yàn)2023/01/13
簡介目前免疫組化多選用SABC法。一抗是特異性的針對檢測蛋白的單克隆或多克隆抗體（本實(shí)驗(yàn)為兔抗大鼠iNOS）。二抗是生物素標(biāo)記的針對一抗的抗體（本實(shí)驗(yàn)為羊抗兔IgG）。三抗是針對生物素的鏈霉親和素-過氧化物酶復(fù)合物（streptavidinbiotincomplex，SABC）。這樣就可以通過逐級放大的方式，以過氧化物酶標(biāo)記要檢測的蛋白（iNOS）。顯色液為二氨基聯(lián)苯胺（DAB）和雙氧水（H2O2）。顯色原理：過氧化物酶將H2O2分解，產(chǎn)生新態(tài)氧，使DAB氧化，生成棕黃色顆粒產(chǎn)物，可根據(jù)顏色反應(yīng)
一氧化氮合酶組化顯示法2023/01/13
簡介細(xì)胞中的左旋精氨酸和氧在一氧化氮合酶（nitxicoxidesynthase，NOS）的作用下生成一氧化氮和瓜氨酸。還原型輔酶II（煙酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸，NADPH）是一氧化氮合酶的輔酶，可以將孵育液中的底物脫氫，然后將氫傳遞給硝基四氮唑藍(lán)（NBT），使后者還原成藍(lán)黑色沉淀。原理一氧化氮合酶組化顯示實(shí)驗(yàn)的基本原理是細(xì)胞中的左旋精氨酸和氧在一氧化氮合酶（nitxicoxidesynthase，NOS）的作用下生成一氧化氮和瓜氨酸。還原型輔酶II（煙酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸，NADPH）是一氧
Brachet反應(yīng)顯示細(xì)胞中DNA和RNA2023/01/13
簡介Brachet反應(yīng)顯示細(xì)胞中DNA和RNA是利用了DNA和RNA這種結(jié)構(gòu)上的差異，采用不同的染料同時(shí)顯示兩者在細(xì)胞中的分布情況。原理Brachet反應(yīng)顯示細(xì)胞中DNA和RNA的基本原理是利用了DNA和RNA這種結(jié)構(gòu)上的差異，采用不同的染料同時(shí)顯示兩者在細(xì)胞中的分布情況。甲基綠、派洛寧（methylgreen，pyronin）為帶有正電荷的堿性染料（結(jié)構(gòu)式見圖3-2），可與帶有負(fù)電荷的核酸分子結(jié)合，兩種染料的作用具有選擇性，甲基綠帶有2個(gè)正電荷，易與雙鏈的DNA分子結(jié)合，使其顯示藍(lán)綠色；派洛寧
Feulgen反應(yīng)顯示細(xì)胞中DNA2023/01/13
簡介Feulgen反應(yīng)由Feulgen在1924年發(fā)明，是一種傳統(tǒng)的、也是最為經(jīng)典的通過化學(xué)染色來特異性顯示細(xì)胞中DNA的方法。原理Feulgen反應(yīng)顯示細(xì)胞中DNA的基本原理是首先采用稀酸作用于DNA，使其脫去嘌呤堿，暴露出游離醛基，該醛基與Schiff試劑反應(yīng)生成紫紅色產(chǎn)物，細(xì)胞中存在有DNA的部位即呈現(xiàn)紫紅色陽性反應(yīng)。如圖3-1中所示，堿性品紅是紅色物質(zhì)，能與產(chǎn)生SO2的試劑作用形成無色產(chǎn)物，即Schiff試劑，它可以與DNA水解釋放出的醛基結(jié)合而氧化為紫紅色化合物。用途Feulgen反應(yīng)
細(xì)胞吞噬活動觀察實(shí)驗(yàn)2023/01/13
簡介高等動物體內(nèi)存在著具有防御功能的吞噬細(xì)胞系，它是由單核細(xì)胞和粒細(xì)胞等白細(xì)胞構(gòu)成，是機(jī)體內(nèi)免疫系統(tǒng)的重要組成部分。在白細(xì)胞中，以粒細(xì)胞和單核細(xì)胞的吞噬活動較強(qiáng)，故被稱為吞噬細(xì)胞。原理細(xì)胞吞噬活動觀察實(shí)驗(yàn)的基本原理是單核細(xì)胞由血液進(jìn)入組織后逐漸演變成巨噬細(xì)胞。巨噬細(xì)胞主要靠吞噬作用處理異物；當(dāng)機(jī)體受到細(xì)菌等病原體或其他異物入侵時(shí)，巨噬細(xì)胞首先在趨化因子的作用下向異物移動，然后伸出偽足包裹異物，將異物吞入胞漿內(nèi)形成吞噬泡，隨后溶酶體與吞噬泡融合并消化異物。材料與儀器器材：載玻片、蓋玻片、解剖剪、鑷
人胚胎干細(xì)胞傳代培養(yǎng)2023/01/12
簡介胚胎干細(xì)胞是具有一種具有自我更新和全能分化能力的細(xì)胞，能發(fā)育分化出成體所有的組織和器官，是體外研究發(fā)育調(diào)控機(jī)制理想的模型，也是用于人類疾病的干細(xì)胞治療和器官組織移植理-想的種子細(xì)胞。建立新的人類胚胎干細(xì)胞系仍然有很大的倫理學(xué)爭議，目前對人胚胎干細(xì)胞的研究主要就是基于已經(jīng)建立的人胚胎干細(xì)胞系的研究。原理人胚胎干細(xì)胞傳代培養(yǎng)的原理是人胚胎干細(xì)胞快速生長和擴(kuò)增，而細(xì)胞培養(yǎng)箱恰恰能提供培養(yǎng)所需的環(huán)境。用途胚胎干細(xì)胞常用于發(fā)育分化出成體所有的組織和器官，是體外研究發(fā)育調(diào)控機(jī)制理想的模型，也是用于人類疾
細(xì)胞運(yùn)動觀察2023/01/12
簡介纖毛與鞭毛是單細(xì)胞或多細(xì)胞生物細(xì)胞表面伸出的特化結(jié)構(gòu)，其內(nèi)部是由微管組成的軸（軸中央由2條微管組成，外圍由9組二聯(lián)微管環(huán)繞），軸的基部與基體相連，周圍被細(xì)胞膜所包繞。直徑為0.15～0.3μm，屬于細(xì)胞的運(yùn)動器官。其運(yùn)動一般認(rèn)為是由二聯(lián)微管間的滑動所引起，鞭毛運(yùn)動方式為波浪式、纖毛運(yùn)動為波動式。原理細(xì)胞運(yùn)動觀察實(shí)驗(yàn)的基本原理是纖毛與鞭毛是單細(xì)胞或多細(xì)胞生物細(xì)胞表面伸出的特化結(jié)構(gòu)，其內(nèi)部是由微管組成的軸（軸中央由2條微管組成，外圍由9組二聯(lián)微管環(huán)繞），軸的基部與基體相連，周圍被細(xì)胞膜所包繞。直
PEG 介導(dǎo)的脾細(xì)胞與骨髓瘤細(xì)胞的融合2023/01/12
簡介細(xì)胞融合的方法有生物法、化學(xué)法和物理法?；瘜W(xué)法常用的是化學(xué)誘導(dǎo)劑聚乙二醇（polyethyleneglycol，PEG）結(jié)合高pH、高鈣離子法。該法操作方便，目前已成為人工誘導(dǎo)細(xì)胞融合的主要手段。原理PEG介導(dǎo)的細(xì)胞融合的基本原理是利用PEG使細(xì)胞相互接觸部位的膜結(jié)構(gòu)發(fā)生重排，加之膜脂雙層的相互親和以及彼此間表面張力的作用，引起相鄰質(zhì)膜在修復(fù)時(shí)相互合并在一起，導(dǎo)致細(xì)胞之間發(fā)生融合。PEG介導(dǎo)的細(xì)胞融合率受下述因素影響。①PEG的分子量與濃度：分子量及其濃度與融合率成正比；但分子量越大、濃度越
PEG 介導(dǎo)的雞血細(xì)胞融合2023/01/12
簡介細(xì)胞融合的方法有生物法、化學(xué)法和物理法。化學(xué)法常用的是化學(xué)誘導(dǎo)劑聚乙二醇（polyethyleneglycol，PEG）結(jié)合高pH、高鈣離子法。該法操作方便，目前已成為人工誘導(dǎo)細(xì)胞融合的主要手段。原理PEG介導(dǎo)的細(xì)胞融合的基本原理是利用PEG使細(xì)胞相互接觸部位的膜結(jié)構(gòu)發(fā)生重排，加之膜脂雙層的相互親和以及彼此間表面張力的作用，引起相鄰質(zhì)膜在修復(fù)時(shí)相互合并在一起，導(dǎo)致細(xì)胞之間發(fā)生融合。PEG介導(dǎo)的細(xì)胞融合率受下述因素影響。①PEG的分子量與濃度：分子量及其濃度與融合率成正比；但分子量越大、濃度越
細(xì)胞中液泡系活體染色2023/01/12
簡介細(xì)胞中液泡系活體染色實(shí)驗(yàn)是利用中性紅（neutrolred）是液泡系的專一性活體染色劑的特性，在細(xì)胞處于生活狀態(tài)時(shí)，只將液泡系染成紅色，細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞核不被染色。原理細(xì)胞中液泡系活體染色實(shí)驗(yàn)的基本原理是動物細(xì)胞內(nèi)由單層膜包裹的小泡都屬于液泡系，包括高爾基復(fù)合體、溶酶體、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)、轉(zhuǎn)運(yùn)泡、吞噬泡等。軟骨細(xì)胞內(nèi)含有較多的粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)和發(fā)達(dá)的高爾基復(fù)合體，能合成與分泌軟骨黏蛋白及膠原纖維等，因而液泡系發(fā)達(dá)。中性紅（neutrolred）是液泡系的專一性活體染色劑，在細(xì)胞處于生活狀態(tài)時(shí)，只將液泡系染成紅色
細(xì)胞復(fù)蘇2023/01/11
簡介細(xì)胞復(fù)蘇是將凍存在液氮中的細(xì)胞解凍之后重新培養(yǎng)，細(xì)胞恢復(fù)生長的過程。材料與儀器器材：37℃水浴箱、離心機(jī)、無菌試管以及培養(yǎng)瓶。試劑：①含20％血清RPMI1640培養(yǎng)液；步驟細(xì)胞復(fù)蘇的基本過程可分為如下幾步：A從液氮中取出細(xì)胞安瓿或凍存管，置37℃水浴中迅速融化，一旦冰塊消失即將凍存管從水浴中取出。B用70％乙醇擦洗凍存管外部以減少污染機(jī)會。C吸取凍存管內(nèi)容物緩慢加入含4-5ml培養(yǎng)液的T-25細(xì)胞培養(yǎng)瓶中，置5％CO2、37℃細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)，次日換液。也可通過離心去除細(xì)胞保護(hù)劑，再進(jìn)行細(xì)胞
混合淋巴細(xì)胞增殖2023/01/11
簡介混合淋巴細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)也稱混合淋巴細(xì)胞培養(yǎng)（MLC）或稱混合淋巴細(xì)胞反應(yīng)（MLR），常用于器-官-移-植前的組織配型，以測定受體和供體主要組織相容性抗原（HLA抗原）相容的程度。材料與儀器器材：細(xì)胞培養(yǎng)瓶、培養(yǎng)板、吸管等、CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱、超凈臺。試劑：①10％FCS-RPMI1640培養(yǎng)基;②細(xì)胞DCs細(xì)胞、反應(yīng)細(xì)胞、外周血單個(gè)核細(xì)胞。③3H-TdR工作液步驟混合淋巴細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)的基本過程可分為如下幾步：（一）刺激細(xì)胞（DCs）的制備A.取健康志愿者肝素抗凝的外周血，淋巴細(xì)胞分離液分離單個(gè)核
小鼠胚胎成纖維細(xì)胞（MEF）原代培養(yǎng)2023/01/11
原理將小鼠的胚胎成纖維細(xì)胞（MEF）從機(jī)體中取出，經(jīng)胰酶、螯合劑（常用EDTA）處理，分散成單細(xì)胞，置MEF生長培養(yǎng)基中培養(yǎng)，使細(xì)胞得以生存、生長和繁殖。材料與儀器孕鼠PBSEDTA胰酶MEF生長培養(yǎng)基FBS高糖DMEM眼科直剪眼科直鑷眼科彎鑷玻璃平皿3尼龍濾網(wǎng)離心管手術(shù)刀片步驟一、實(shí)驗(yàn)材料準(zhǔn)備1.動物孕期14至16天的孕鼠(小鼠)。2.試劑無Ca2+和Mg2+的PBS(D-PBS)、0.05%胰酶、0.53mmol/LEDTA溶液、MEF生長培養(yǎng)基(高糖DMEM加10%FBS)。3.器械眼科直
Nunc細(xì)胞工廠2023/01/11
原理用培養(yǎng)液制備細(xì)胞懸液，將懸液注入單元的各小室內(nèi)。使長邊朝下，放置。將單元旋轉(zhuǎn)90度，放平后用CO2充氣。然后封閉，進(jìn)行培養(yǎng)。材料與儀器單層細(xì)胞0.25%天然胰蛋白酶D-PBSA生長培養(yǎng)液Nunc細(xì)胞工廠硅酮管和連接器血細(xì)胞計(jì)數(shù)板或電子細(xì)胞計(jì)數(shù)器和計(jì)數(shù)用液體步驟1.用胰蛋白酶消化后，將細(xì)胞懸浮，計(jì)數(shù)細(xì)胞，用2L培養(yǎng)液將懸液稀釋至細(xì)胞密度為2x104個(gè)/ml。2.使小室長邊朝下，放置，將培養(yǎng)液供應(yīng)管與Luer連接管相接，再通過供應(yīng)管與底孔連通。3.經(jīng)供應(yīng)管加入細(xì)胞和培養(yǎng)液。所有培養(yǎng)小室內(nèi)的液體將
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