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深圳市安培生物科技有限公司
中級(jí)會(huì)員 | 第5年
細(xì)胞培養(yǎng)常見問題及解答（二）2021/12/09
接上一期，本期我們繼續(xù)分享細(xì)胞培養(yǎng)常見的問題吧~12.附著性細(xì)胞繼代時(shí)所使用的trypsin-EDTA濃度？應(yīng)如何處理？一般使用的trypsin-EDTA濃度為0.05%trypsin-0.53mMEDTANa4。第一次開瓶后應(yīng)立即少量分裝于無菌試管中，保存于-20℃，避免反復(fù)冷凍解凍造成trypsin的活性降低，并可減少污染的機(jī)會(huì)。13.欲將一般動(dòng)物細(xì)胞離心下來，其離心速率應(yīng)為多少轉(zhuǎn)速？回收動(dòng)物細(xì)胞，其離心速率一般為300xg(約1000rpm)，5-10分鐘，過高的轉(zhuǎn)速，將造成細(xì)胞死亡。14
細(xì)胞培養(yǎng)常見問題及解答（一）2021/12/09
1.如何選用特殊細(xì)胞系培養(yǎng)基？培養(yǎng)某一類型細(xì)胞沒有固定的培養(yǎng)條件。在MEM中培養(yǎng)的細(xì)胞，很可能在DMEM或M199中同樣很容易生長(zhǎng)?？傊紫冗xMEM做粘附細(xì)胞培養(yǎng)、RPMI-1640做懸浮細(xì)胞培養(yǎng)是一個(gè)好的開始。2.何時(shí)須更換培養(yǎng)基？視細(xì)胞生長(zhǎng)密度而定，或遵照細(xì)胞株基本數(shù)據(jù)上的更換時(shí)間，按時(shí)更換培養(yǎng)基即可。3.可否使用與原先培養(yǎng)條件不同的培養(yǎng)基？不能。每一細(xì)胞株均有其特定使用且已適應(yīng)的細(xì)胞培養(yǎng)基，若驟然使用和原先提供的培養(yǎng)條件不同的培養(yǎng)基，細(xì)胞大都無法立即適應(yīng)，造成細(xì)胞無法存活。4.可否使用與
為什么細(xì)胞會(huì)抱團(tuán)？因?yàn)樘鞖饫淞耍?/a>2021/12/09
是否總是遇到細(xì)胞抱團(tuán)的現(xiàn)象？是否總是因?yàn)楦悴磺宄?xì)胞抱團(tuán)原因而困惑？是否總是因?yàn)殡y以將抱團(tuán)細(xì)胞拯救回來而抓狂？童鞋們，我來拯救你們的細(xì)胞了，今天給大家從四個(gè)層面剖析細(xì)胞抱團(tuán)的真實(shí)原因，快來圍觀吧！一、細(xì)胞本身生長(zhǎng)特性有抱團(tuán)傾向有些細(xì)胞本身有抱團(tuán)生長(zhǎng)的特性，給大家看五種喜歡抱團(tuán)的細(xì)胞類型：細(xì)胞類型①：NCI-H716人結(jié)直腸腺癌細(xì)胞形態(tài)：淋巴母細(xì)胞樣生長(zhǎng)特性：懸浮生長(zhǎng)細(xì)胞喜歡在懸浮液中呈葡萄狀聚集，抱團(tuán)細(xì)胞粒粒飽滿細(xì)胞類型②：Caco-2人結(jié)直腸腺癌細(xì)胞形態(tài)：上皮樣生長(zhǎng)特性：貼壁生長(zhǎng)此細(xì)胞喜歡貼壁
為什么細(xì)胞會(huì)不貼壁、生長(zhǎng)緩慢？2021/12/08
在細(xì)胞培養(yǎng)過程中會(huì)出現(xiàn)這樣或那樣的問題，這些問題從細(xì)胞生長(zhǎng)角度來說，針對(duì)細(xì)胞不貼壁、生長(zhǎng)緩慢、生長(zhǎng)不好，甚至死亡的原因，我們做以下分析并提出相對(duì)應(yīng)的解決方法。一、培養(yǎng)細(xì)胞不貼壁可能原因：●胰蛋白酶消化過度；●支原體污染；●培養(yǎng)基pH值過堿（NaHCO3分解）；●細(xì)胞老化；●接種細(xì)胞起始濃度太低或太高。解決方法：●縮短胰蛋白酶消化時(shí)間或降低胰蛋白酶濃度；●分離培養(yǎng)物，檢測(cè)支原體。清潔支架或培養(yǎng)箱。如發(fā)現(xiàn)支原體污染，丟棄培養(yǎng)物；●使用無菌醋酸溶液調(diào)整pH值或充入無菌CO2；●啟用新的保種細(xì)胞；●調(diào)節(jié)
實(shí)驗(yàn)病理學(xué)技術(shù)—冰凍切片詳解剖析2021/12/08
童鞋們，今天來和大家聊聊實(shí)驗(yàn)病理學(xué)方面的技術(shù)——冰凍切片。冰凍切片因?yàn)椴簧婕耙掖济撍?、二甲苯透明等有機(jī)溶劑處理步驟，能較好保存組織內(nèi)酶、糖及表面抗原的抗原性，是免疫組織化學(xué)和免疫熒光的常用切片方法。但是因?yàn)槠淝衅穸龋?-10µm）較石蠟切片（3-5µm）厚，所以最后呈現(xiàn)的組織形態(tài)往往不如石蠟切片。一般的操作步驟是將新鮮組織取出后，盡快埋入已有OCT（冰凍切片專用膠）的冷凍包埋盒內(nèi)。然后放入液氮中速凍，之后移入-80攝氏度保存。如果需要馬上切片，需要在冰凍切片機(jī)中平衡溫度大概20-30分鐘，再在
細(xì)胞凍存的方法和注意事項(xiàng)2021/12/08
實(shí)驗(yàn)室里有細(xì)胞未用到時(shí)，需要將細(xì)胞凍存，那細(xì)胞凍存應(yīng)怎么做呢？和細(xì)胞凍存時(shí)需要注意哪些問題，本期和大家分享細(xì)胞凍存的方法和需注意的事項(xiàng)。1、冷凍培養(yǎng)基為什么要加DMSO？因?yàn)榧?xì)胞在不加任何保護(hù)劑的情況下直接凍存時(shí)，細(xì)胞內(nèi)外的水分都會(huì)很快形成冰晶，冰晶的形成將造成細(xì)胞損傷，還可引起細(xì)胞的的死亡。目前多采用甘油和DMSO做保護(hù)劑。這兩種細(xì)胞無明顯毒性，分子量小，溶解度大，易穿透細(xì)胞，可以使冰點(diǎn)下降，提高包膜對(duì)水的通透性。2、DMSO的等級(jí)和無菌過濾的方式為何？冷凍保存使用的DMSO等級(jí)，必須為Tis
細(xì)胞傳代的方法和注意事項(xiàng)都有哪些？2021/12/08
在細(xì)胞傳代時(shí)，都應(yīng)該用哪種方法較為合適？或者在做細(xì)胞傳代時(shí)都應(yīng)注意哪些事項(xiàng)呢？怎樣才能做好細(xì)胞傳代讓接下的實(shí)驗(yàn)更順呢？帶著這些疑問，本期小編匯總些細(xì)胞傳代的經(jīng)驗(yàn)分享給大家，希望對(duì)大家做細(xì)胞傳代時(shí)有所幫助。1、細(xì)胞傳代的方法都有哪些？根據(jù)不同的細(xì)胞采取不同的方法。貼壁生長(zhǎng)的細(xì)胞用消化法傳代；部分貼壁生長(zhǎng)的細(xì)胞用直接吹打即可傳代；懸浮生長(zhǎng)的細(xì)胞可以采用直接吹打或離心分離后傳代，或用自然沉降法吸除上清后，再吹打。2、原代培養(yǎng)的第一次傳代應(yīng)注意的問題？細(xì)胞沒有生長(zhǎng)到足以覆蓋瓶底壁的大部分表面以前，不要急
如何選擇細(xì)胞培養(yǎng)用液和使用注意事項(xiàng)2021/12/08
細(xì)胞培養(yǎng)當(dāng)中，選擇好合適的培養(yǎng)用液和正確使用培養(yǎng)用液都是細(xì)胞培養(yǎng)得好的關(guān)鍵，本期小編結(jié)合過往經(jīng)驗(yàn)分享給大家，希望能給大家的細(xì)胞培養(yǎng)帶來幫助。1、如何正確選擇培養(yǎng)基種類？引用幾款比較經(jīng)典的培養(yǎng)基舉例：2、如何選用特殊細(xì)胞系培養(yǎng)基？培養(yǎng)某一類型細(xì)胞沒有固定的培養(yǎng)條件。在MEM中培養(yǎng)的細(xì)胞，很可能在DMEM或M199中同樣很容易生長(zhǎng)。總之，首先選MEM做粘附細(xì)胞培養(yǎng)，RPMI-1640做懸浮細(xì)胞培養(yǎng)是一個(gè)好的開始。3、什么培養(yǎng)基中可以省去加酚紅？酚紅在培養(yǎng)基中被用來作為PH值的指示劑：中性時(shí)為紅色，酸
復(fù)蘇凍存的細(xì)胞常見問題處理方法2021/12/07
本期跟大家分享復(fù)蘇凍存細(xì)胞時(shí)，常見的問題處理方法，希望幫助大家平時(shí)在復(fù)蘇凍存細(xì)胞時(shí)減少出錯(cuò)。1、收到的冷凍管瓶身破裂，瓶蓋有裂紋，或瓶蓋脫落的原因？冷凍管瓶蓋裂紋，或瓶身破裂，可能是因?yàn)椴僮髡邐A取冷凍管時(shí)用力不當(dāng)，造成冷凍管裂損，建議使用止血鉗小心夾取。另冷凍管瓶蓋松動(dòng)或松脫，是因熱脹冷縮的物理現(xiàn)象，冷凍管有可能因此而造成細(xì)胞污染，故冷凍管于放入和取出液氮桶時(shí)，均應(yīng)立刻將冷凍管再一次扭緊。2、冷凍管應(yīng)如何解凍？將冷凍管由液氮桶中取出解凍時(shí)，必須注意安全，可佩戴防護(hù)眼鏡和手套預(yù)防冷凍管的爆裂。取出
新買的細(xì)胞常見問題的處理方法2021/12/07
細(xì)胞是生物學(xué)實(shí)驗(yàn)的重要材料，也是生物細(xì)胞學(xué)實(shí)驗(yàn)的基礎(chǔ)，藥物、基因功能、疾病機(jī)理等的相關(guān)研究多數(shù)需要在細(xì)胞水平進(jìn)行闡釋。本期小編匯總了新買回來或惠贈(zèng)的細(xì)胞遇到常見問題的處理方法，希望能給大家的細(xì)胞培養(yǎng)帶來幫助。1、新買的或惠贈(zèng)的細(xì)胞如何處理？不管買的細(xì)胞、惠贈(zèng)的細(xì)胞，剛拿到手應(yīng)趕緊做這幾件事：檢測(cè)瓶子是否破裂；培養(yǎng)基是否漏出，是否渾濁；是否有支原體污染；迅速擴(kuò)增凍存。2、能否使用與原先培養(yǎng)條件不同的培養(yǎng)基？不能。每一細(xì)胞株均有其特定使用且已適應(yīng)的細(xì)胞培養(yǎng)基，若驟然使用和原先提供培養(yǎng)條件不同的培養(yǎng)基
如何做好細(xì)胞的污染防治？2021/12/07
細(xì)胞培養(yǎng)，受人員操作和環(huán)境條件的影響比較大，在細(xì)胞培養(yǎng)中常常會(huì)遇到很多的細(xì)節(jié)問題，而每個(gè)問題都有可能導(dǎo)致細(xì)胞培養(yǎng)的失敗。所以做好細(xì)胞的污染防治是能否順利開展細(xì)胞實(shí)驗(yàn)的必要措施。1.細(xì)菌污染細(xì)菌污染是細(xì)胞培養(yǎng)中最常見的污染，主要由操作不慎或使用了滅菌不*的耗材與試劑引入。最常見的有枯草桿菌、大腸桿菌、假單胞菌及白色葡萄球菌。鏡下形態(tài)則為長(zhǎng)桿狀、短桿狀和顆粒狀等。左邊的就是比較典型的桿菌污染，一般桿菌會(huì)延軸向快速游動(dòng)，量少時(shí)培養(yǎng)基澄清。右圖是顆粒狀污染，一般培養(yǎng)基會(huì)渾濁或有白色沙狀沉淀。好氧菌增殖分
如何做好細(xì)胞的培養(yǎng)、傳代、凍存和復(fù)蘇？2021/12/07
1.準(zhǔn)備工作：根據(jù)培養(yǎng)細(xì)胞的特性，提前準(zhǔn)備好適合的培養(yǎng)基和血清等。最好沿用細(xì)胞原來的培養(yǎng)條件，以免細(xì)胞在新環(huán)境下還需要過渡適應(yīng)。同時(shí)，充分了解到細(xì)胞的生長(zhǎng)特性和形態(tài)特征，便于后續(xù)的培養(yǎng)觀察。2.貼壁細(xì)胞傳代：1）移棄使用過的細(xì)胞培養(yǎng)液。（不要直接倒掉，避免瓶口殘留導(dǎo)致易污染）2）使用不含鈣鎂離子的平衡鹽溶液（PBS）沖洗細(xì)胞。從與貼壁細(xì)胞層相對(duì)的容器一側(cè)輕輕加入沖洗液，以避免攪動(dòng)細(xì)胞層，前后搖晃容器數(shù)次，最后移棄沖洗液。（洗去殘留的血清，避免影響胰酶的活性。）3）以25cm2的培養(yǎng)瓶為例，向瓶?jī)?nèi)
細(xì)胞培養(yǎng)之細(xì)胞系身份要明確2021/12/07
細(xì)胞是生物學(xué)實(shí)驗(yàn)的重要材料，也是生物細(xì)胞學(xué)實(shí)驗(yàn)的基礎(chǔ)，藥物、基因功能、疾病機(jī)理等的相關(guān)研究多數(shù)需要在細(xì)胞水平進(jìn)行闡釋。而細(xì)胞培養(yǎng)，首先就是要給細(xì)胞系明確身份，才能避免踩到用錯(cuò)細(xì)胞株培養(yǎng)的雷區(qū)。細(xì)胞系身份需明確我們之所以選定某種細(xì)胞系開展實(shí)驗(yàn)，是因?yàn)樗x細(xì)胞系的一些特性符合研究方向的設(shè)定。比如組織特性，疾病特性，功能特性，基因表達(dá)特性等。一旦用錯(cuò)了細(xì)胞株，對(duì)我們研究結(jié)果的判斷就會(huì)帶來很大的誤差和不確定性。而近年來，多個(gè)（木又）威機(jī)構(gòu)發(fā)現(xiàn)細(xì)胞系在培養(yǎng)和流通過程中，出現(xiàn)了很嚴(yán)重的交叉污染。據(jù)不*統(tǒng)計(jì)，
淺談溶解度2021/12/06
一、溶解度的概念溶解度是定溫、定壓時(shí)，每單位飽和溶液中所含溶質(zhì)的量，也就是一種物質(zhì)能夠被溶解的最大限度或飽和溶液的濃度。溶解度分為固體溶解度和氣體溶解度，本文主要介紹固體溶解度的內(nèi)容。二、固體物質(zhì)溶解度的概念固體物質(zhì)的溶解度是指在一定的溫度下，某物質(zhì)在100克溶劑里達(dá)到飽和狀態(tài)時(shí)所溶解的質(zhì)量，用字母s表示，其單位是“g/100g的水”。在未注明的情況下，通常溶解度指的是物質(zhì)在水里的溶解度。例如：在20℃時(shí)，100g的水里最多能溶36g氯化鈉（這時(shí)溶液達(dá)到飽和狀態(tài)），即在20℃時(shí)，氯化鈉在水里的溶
大鼠肝星狀細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)2021/12/06
材料與儀器雄性SD大鼠戊巴（匕匕）妥鈉小牛血清DMEM酶消化液I、ⅡNycodenzD-Hanks’液HBSS臺(tái)盼蘭手術(shù)器械尼龍網(wǎng)相差顯微鏡熒光顯微鏡步驟一、實(shí)驗(yàn)步驟1.大鼠腹腔麻醉后在超凈臺(tái)上剖腹，進(jìn)行門靜脈插管。2.以D-Hanks‘液灌注，同時(shí)剪開下腔靜脈，沖掉血液后，改灌以100ml酶消化液I(0.05%IV型膠原酶)。3.待肝臟變軟后，離體肝臟并剪碎，繼續(xù)以酶消化液II(含20U/mlDNaseI的0.05%IV型膠原酶)消化15min，尼龍網(wǎng)過濾后以450g離心5min(4℃，下同)
大鼠胰島細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)2021/12/06
材料與儀器一周齡Wistar大鼠D-Hanks’液胰蛋白酶Ⅴ型膠原酶葡萄糖碘乙酸手術(shù)剪手術(shù)鉗眼科剪刀眼科鑷子大頭針手術(shù)刀片培養(yǎng)皿步驟1.一周齡Wistar大鼠，斷頸處死，于75%乙醇浸泡15分鐘，無菌取出胰腺，于冰冷無菌D-Hanks’液中漂洗，用眼科剪仔細(xì)清除脂肪、包膜、血管等胰外組織，轉(zhuǎn)入青霉素小瓶中。2.加入少量無菌D-Hanks’液，用眼科剪剪成0.1-1.0mm3大小的碎片，用滴管輕輕吸出上層細(xì)小脂肪碎塊和油滴，再用無菌D-Hanks’液反復(fù)清洗8——10次，加入10倍體積無菌消化酶液
大鼠視神經(jīng)少突膠質(zhì)細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)——牛血清培養(yǎng)法2021/12/06
材料與儀器Wistar大鼠亞（石西）酸鈉腐胺轉(zhuǎn)鐵蛋白胰島素甲狀腺素黃體酮谷氨酰胺小牛血清兔抗鼠GC抗體眼科剪滴管離心機(jī)培養(yǎng)皿CO2培養(yǎng)箱步驟一、實(shí)驗(yàn)步驟1.取新生2d的Wistar大鼠10只，無菌條件下取出雙側(cè)視神經(jīng)。2.接種至24孔培養(yǎng)板內(nèi)經(jīng)多聚賴氨酸處理的蓋玻片上。3.加入含30g·L-1小牛血清的DMEM/F12培養(yǎng)基，37℃，50mL/LCO2，100%濕度連續(xù)培養(yǎng)3d。4.3d后棄廢液，改為含5g·L-1小牛血清DMEM/F12條件培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng)。5.每周換液2次。在獲得足夠的細(xì)胞數(shù)量
細(xì)胞培養(yǎng)常遇問題集錦（十二）2021/12/06
今天帶來新一期細(xì)胞培養(yǎng)常遇問題匯總，本期除了圖文案例說明之外，還帶了一些視頻案例，供童鞋們參考學(xué)習(xí)~56、▲問：這個(gè)亮晶晶的小點(diǎn)，是霉菌污染嗎？答：這個(gè)小亮點(diǎn)，說實(shí)話不太好分辨，看周圍還有毛茸茸，極大概率是真菌污染了。57、▲問：培養(yǎng)基沒變色，那個(gè)白色的東西特別多，鏡下看倆胞體連著，一個(gè)背著另一個(gè)的部分身體，這種是什么呢？答：這是真菌污染，真菌污染培基不變色，真菌一般泛白。58、▲問：請(qǐng)問上邊三個(gè)圖里的細(xì)胞是些什么問題？答：圖里的細(xì)胞問題是霉菌污染。問：背景的小點(diǎn)和用橙色勾住的部分都是霉菌污染嗎
大鼠星型膠質(zhì)細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)——胰酶消化法2021/12/05
材料與儀器SD大鼠苯巴（匕匕）妥解剖液胰蛋白酶DnaseDM培養(yǎng)液離心管培養(yǎng)箱手術(shù)器材步驟一、取14.5dSD大鼠一只。二、苯巴（匕匕）妥0.5ml腹腔注射，待麻醉后置于手術(shù)臺(tái)上，酒精棉球消毒皮膚，開腹取出子宮（約12-14個(gè)），放入解剖液中，剖開子宮，取出胚胎，放入解剖液中，在耳眼之間離斷，取頭側(cè)部組織，去除腦膜組織，取原始中腦區(qū)組織，放入離心管裝的解剖液中，待全部取出后，1500轉(zhuǎn)2分鐘。三、用吸管吸出上清液，在組織細(xì)胞沉淀中加入胰蛋白酶一管（1ml/vial），室溫30分鐘，1500轉(zhuǎn)，離
大鼠星型膠質(zhì)細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)——酶消化法2021/12/05
材料與儀器Wistar大鼠乳鼠FBSDMEM胰蛋白酶EDTA酒精眼科剪滴管離心機(jī)培養(yǎng)皿CO2培養(yǎng)箱步驟一、實(shí)驗(yàn)步驟1.新生1-2天Wistar大鼠乳鼠，經(jīng)75%酒精消毒，斷頭處死。2.取腦放入冷的D-Hanks'平衡鹽溶液，去除腦膜及大血管。3.分離兩側(cè)大腦皮質(zhì)并剪成1mm3大小，加入0.25%胰蛋白酶37℃空氣浴震蕩消化10min。4.用含10%FBS的DMEM培養(yǎng)基終止消化，離心(1000rpm，10min)，去上清。5.用含10%FBS的DMEM培養(yǎng)基重懸沉淀，經(jīng)75μm篩網(wǎng)過濾，收集濾液
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