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我的siRNA怎么了？2021/12/01
這一期，我們來說一下siRNA轉(zhuǎn)染和干擾效果不佳的問題。要保證RNA干擾的效果就必須保證siRNA能夠成功的轉(zhuǎn)染到細(xì)胞中去，那有時候會轉(zhuǎn)染不進(jìn)去，原因可能有如下幾點(diǎn)：1、轉(zhuǎn)染方法：轉(zhuǎn)染siRNA濃度太低。FAM驗(yàn)證轉(zhuǎn)染效率時siRNA(FAM)的量的終濃度是50-150nM都可以，需要根據(jù)細(xì)胞進(jìn)行摸索。lipo-2000的量和使用的siRNA量成比例的，一般用1:1的效果好一些。建議用24孔板摸索條件。siRNA所加的量及其濃度可以根據(jù)實(shí)驗(yàn)自己調(diào)整，按照要求配成20uM的濃度，那1ul就是20p
細(xì)胞培養(yǎng)常遇問題集錦（六）2021/12/01
26、▲問：有時候細(xì)胞和細(xì)胞之間就會出現(xiàn)這種小黑點(diǎn)，高倍鏡下看少數(shù)在原地打轉(zhuǎn)，但是培養(yǎng)液不渾濁。那其中不會動的是細(xì)菌嗎？答：原地打轉(zhuǎn)的可能為黑膠蟲，會動的是細(xì)菌，細(xì)菌有鞭毛。黑膠蟲是一種現(xiàn)象，身份可能是細(xì)菌，有鞭毛會游動。27、問：想問一下，已經(jīng)使用三抗以及抗支原體的藥物培養(yǎng)細(xì)胞一周，但還是有少量黑膠蟲，但細(xì)胞生長狀態(tài)還好，這樣的話接下來還需要處理嘛？好像有一種有少量黑膠蟲但不影響細(xì)胞狀態(tài)可以不做處理的說法？答：一周，黑膠蟲數(shù)量減少，已經(jīng)見效了，但還是要繼續(xù)處理，因?yàn)楹谀z蟲和細(xì)胞有此消彼長的特點(diǎn)
細(xì)胞培養(yǎng)常遇問題集錦（五）2021/12/01
細(xì)胞培養(yǎng)常遇見問題集錦第五期，小編繼續(xù)與大家探討細(xì)胞培養(yǎng)時遇到哪些讓人煩惱的問題~21、問：請教一下大家，準(zhǔn)備從別的實(shí)驗(yàn)室借一瓶細(xì)胞，20分鐘之內(nèi)可以拿到自己的實(shí)驗(yàn)室，運(yùn)輸?shù)臅r候可以培養(yǎng)瓶里充滿培養(yǎng)基，封口膜包緊，常溫放在泡沫盒里嗎？那拿到自己的實(shí)驗(yàn)室后，在充滿培養(yǎng)基的情況下，倒掉一部分后，留10ml（25cm2皿）培養(yǎng)基繼續(xù)放培養(yǎng)箱培養(yǎng)就可以了對嗎？答：可以，細(xì)胞沒那么脆弱。拿回來直接噴酒精扔進(jìn)去就可以了。22、▲問：這個769p腎癌細(xì)胞最近幾天細(xì)胞間隙有很多小黑點(diǎn)，是貼壁的，傳代也沒有用，是
細(xì)胞培養(yǎng)問題集錦問與答（二）2021/11/30
接上期，接下來我們還會繼續(xù)分享真實(shí)在實(shí)驗(yàn)室遇到細(xì)胞培養(yǎng)的問題進(jìn)行解答，更好地與大家進(jìn)行交流~6、好的細(xì)胞狀態(tài)圖▲養(yǎng)得好的人皮膚成纖維細(xì)胞7、問：請問一下養(yǎng)細(xì)胞的時候碰到一種亮的會動的蟲子。有時候是圓球型，在培養(yǎng)基里面動來動去，有時候是像線蟲一樣！這個是什么蟲子？答：這個叫黑膠蟲污染，也可能有潛在的支原體污染。8、問：像這種有會游動的小點(diǎn)一定是黑膠蟲嗎？我發(fā)現(xiàn)我的是細(xì)胞傳代不及時的時候發(fā)生的。答：是的，剛復(fù)蘇或剛傳代容易爆發(fā)。9、問：黑膠蟲污染有什么好的解決方法嗎？答：黑膠蟲和支原體一樣頑固，周期
細(xì)胞培養(yǎng)問題集錦問與答（四）2021/11/30
細(xì)胞培養(yǎng)系列第四期，繼續(xù)為大家分享細(xì)胞培養(yǎng)中遇到的問題集錦。16、問：買的無血清凍存液說明書上寫的直接放入-80度答：那是直接凍存的，大多數(shù)凍存液都是梯度凍存17、問：初學(xué)細(xì)胞培養(yǎng)，養(yǎng)的是hepG2，每次到3天的時候培養(yǎng)基就會發(fā)黃，鏡下看到像是死細(xì)胞聚集成團(tuán)的大片東西，請問這種情況是染菌了嗎？請問如何處理?那種像死細(xì)胞聚集成團(tuán)的感覺是綠色，請問這是染菌嗎？（不是每次這樣，之前都很好，現(xiàn)在三瓶里有一瓶出現(xiàn)這種情況）答：綠色的感覺像真菌，也有可能是細(xì)胞密度高了，細(xì)胞代謝物多。18、問：有用清除劑處理
細(xì)胞培養(yǎng)問題集錦問與答（三）2021/11/30
大家好，這里是安培生物分享細(xì)胞培養(yǎng)系列第三期，更多真實(shí)案例，盡在安培分享~11、▲肝癌HepG2細(xì)胞疑似霉菌污染12、問：大家復(fù)蘇細(xì)胞，都是用程序降溫盒轉(zhuǎn)移液氮的細(xì)胞嗎？答：有三種方法：1、一兩支的話直接用37度溫水快速轉(zhuǎn)移沒問題，重要細(xì)胞或是數(shù)量較多，用干冰保險；2、降溫盒放異丙醇然后直接放-80度；3、凍存——緩慢降溫。復(fù)蘇——快速升溫。13、▲問：做梯度離心每次都飄在上面，離不下來的原因？答：應(yīng)該是溶劑密度大了以后細(xì)胞離不下來了14、▲問：以上三圖養(yǎng)的caco2細(xì)胞，這些黑色的點(diǎn)是什么呀？
細(xì)胞培養(yǎng)問題集錦問與答（一）2021/11/30
前言：在細(xì)胞培養(yǎng)過程中，細(xì)胞污染是繞不開的一個話題，接下來，小編為大家?guī)硪幌盗屑?xì)胞培養(yǎng)與細(xì)胞污染的問題集錦與解答，方便大家在細(xì)胞培養(yǎng)過程中遇到的一些問題得以解決，助大家更順利做好實(shí)驗(yàn)。1、問：感覺細(xì)胞總是有污染？答：細(xì)胞污染，一般是細(xì)菌或真菌或支原體這三大類，可對細(xì)胞進(jìn)行抗生素查殺。2、問：細(xì)胞培養(yǎng)液是混的，但鏡下看細(xì)胞卻很干凈，這種情況是污染了嗎？（貼壁細(xì)胞）答：培養(yǎng)液混濁，但細(xì)胞形態(tài)正常，背景干凈的話，可能是細(xì)胞增殖快，代謝物多的原因3、問：為何用pma一誘導(dǎo)，就有黑膠蟲？答：黑膠蟲和細(xì)胞
如何選擇合適的細(xì)胞培養(yǎng)板？2021/11/29
細(xì)胞培養(yǎng)的規(guī)?？纱罂尚?，你既可以使用生物反應(yīng)器，也可以使用培養(yǎng)瓶或多孔板。如今，利用多孔板的細(xì)胞培養(yǎng)模式正倍受青睞，因?yàn)檫@有助于研究多個動態(tài)變量，減少實(shí)驗(yàn)時間，并節(jié)約昂貴的試劑。除了標(biāo)準(zhǔn)的高通量微孔板，還有一些特殊的微孔板被開發(fā)出來，助力3D和器官型細(xì)胞培養(yǎng)。市場上的細(xì)胞培養(yǎng)板可不少，如何選擇合適的呢？在這篇文章中，BrandTechScientific的產(chǎn)品專家介紹了細(xì)胞培養(yǎng)中塑料制品的選購要點(diǎn)。在他們看來，我們需要重點(diǎn)考慮孔的數(shù)量、孔的形狀、微孔板顏色以及表面處理。1.孔的數(shù)量大多數(shù)用戶在組
您的細(xì)胞養(yǎng)得好嗎？怎樣才能養(yǎng)好呢？2021/11/29
細(xì)胞培養(yǎng)是實(shí)驗(yàn)室里最常見和最基本的實(shí)驗(yàn)了。您的細(xì)胞養(yǎng)的好嗎？您對細(xì)胞培養(yǎng)體系了解嗎？培養(yǎng)基對細(xì)胞培養(yǎng)影響大嗎？……細(xì)胞培養(yǎng)，蘊(yùn)含著大學(xué)問。有時候細(xì)胞狀態(tài)不好，轉(zhuǎn)染、藥篩這些實(shí)驗(yàn)根本就沒辦法做。影響細(xì)胞培養(yǎng)的因素很多，讓我們先從培養(yǎng)基和血清說起。培養(yǎng)基細(xì)胞培養(yǎng)基是人工模擬細(xì)胞在體內(nèi)生長的營養(yǎng)環(huán)境，是提供細(xì)胞營養(yǎng)和促進(jìn)細(xì)胞生長增殖的物質(zhì)基礎(chǔ)。培養(yǎng)液或培養(yǎng)基的含義幾乎相同，英文都是medium。當(dāng)它是粉劑時，傾向性地稱為培養(yǎng)基，而將粉劑配成液體后，多稱為培養(yǎng)液。培養(yǎng)液中常常補(bǔ)加血清、抗生素等成分。培養(yǎng)
真核細(xì)胞轉(zhuǎn)染操作步驟2021/11/29
一些真核蛋白在原核宿主細(xì)胞中的表達(dá)不但行之有效而且成本低廉，然而許多在細(xì)菌中合成的真核蛋白或因折疊方式不正確，或因折疊效率低下，結(jié)果使得蛋白活性低或無活性。不僅如此，真核生物蛋白的活性往往需要翻譯后加工，例如二硫鍵的精確形成、糖基化、磷酸化、寡聚體的形成或者由特異性蛋白酶進(jìn)行的裂解等等，而這些加工原核細(xì)胞則無能為力。需要表達(dá)具有生物學(xué)功能的膜蛋白或分泌性蛋白，例如位于細(xì)胞膜表面的受體或細(xì)胞外的激素和酶，則更需要使用真核轉(zhuǎn)染技術(shù)。由于DNA導(dǎo)入哺乳動物細(xì)胞有關(guān)技術(shù)方法的發(fā)展，使真核表達(dá)成為可能。利
胎牛血清使用前的保存方法2021/11/29
今天小編為大家?guī)淼奶ヅＱ迨褂们暗谋４妫貉鍛?yīng)保存在-5℃至-20℃，若存放在4℃不可超過一個月。解凍血清時，應(yīng)先將血清至于2-8℃冰箱，并經(jīng)常搖勻使之溶解，然后至室溫放置使之升溫，絕對不可將冷凍的血清直接放入37℃水浴或者溫箱中，如放在37℃解凍，顏色加深，粘稠度也會增加，血清在解凍和熱滅活后，應(yīng)按用量分裝并于-20℃保存，避免反復(fù)凍融。胎牛血清與新生牛（小牛）血清組份與比例不同：兩者所含的促細(xì)胞生長因子、促貼附因子、激素及其他活性物質(zhì)等組份與比例不同，用途與用法不同：某些細(xì)胞必需胎牛血清才
教您如何簡易辨別胎牛血清2021/11/29
影響胎牛血清質(zhì)量的因素主要有：血源、內(nèi)毒素、總蛋白含量、血紅蛋白、pH、微生物、免疫球蛋白等等，那么如何簡易快速的辨別血清質(zhì)量的好壞呢？拿到血清，最先接觸的是血清外觀，外觀的判斷尤為重要，可以讓我們粗略的快速辨別血清質(zhì)量的好壞。主要從以下幾個方面：1、顏色根據(jù)血紅蛋白含量的不同，胎牛血清可表現(xiàn)出黃色或紅色，實(shí)際上，血紅蛋白含量的高低對血清并無直接影響，這個指標(biāo)的意義在于能體現(xiàn)出采血過程的嚴(yán)謹(jǐn)規(guī)范程度，良好的操作能降低血清的溶血。國產(chǎn)血清的采血點(diǎn)很分散，大多是由屠戶采血后馬上離心收集，所以很少會有
細(xì)胞轉(zhuǎn)染的方法2021/11/25
細(xì)胞的轉(zhuǎn)染方法細(xì)胞轉(zhuǎn)染是指將外源分子如DNA，RNA等導(dǎo)入真核細(xì)胞的技術(shù)。隨著分子生物學(xué)和細(xì)胞生物學(xué)研究的不斷發(fā)展，轉(zhuǎn)染已經(jīng)成為研究和控制真核細(xì)胞基因功能的常規(guī)工具。在研究基因功能、調(diào)控基因表達(dá)、突變分析和蛋白質(zhì)生產(chǎn)等生物學(xué)試驗(yàn)中，其應(yīng)用越來越廣泛。細(xì)胞轉(zhuǎn)染的種類主要是瞬時轉(zhuǎn)染和穩(wěn)定轉(zhuǎn)染，目的和區(qū)別如下所示：隨著基因與蛋白功能研究的深入，轉(zhuǎn)染目前已成為實(shí)驗(yàn)室工作中經(jīng)常涉及的基本方法。轉(zhuǎn)染大致可分為物理介導(dǎo)、化學(xué)介導(dǎo)和生物介導(dǎo)三類途徑。電穿孔法、顯微注射和基因槍屬于通過物理方法將基因?qū)爰?xì)胞的范例
關(guān)于細(xì)胞轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)，這幾點(diǎn)必須要清楚2021/11/25
細(xì)胞轉(zhuǎn)染是指將外源分子如DNARNA等導(dǎo)入真核細(xì)胞的技術(shù)?？煞譃樗矔r轉(zhuǎn)染，穩(wěn)定轉(zhuǎn)染等瞬時轉(zhuǎn)染是指外源DNA/RNA不整合到宿主染色體中，因此一個宿主細(xì)胞可存在多個拷貝數(shù)，產(chǎn)生高水平的表達(dá)，但通常只持續(xù)幾天，多用于啟動子和其他調(diào)控元件的分析。一般來說，超螺旋質(zhì)粒DNA轉(zhuǎn)染效率較高，在轉(zhuǎn)染后24-72h內(nèi)分析結(jié)果，常常用到一些報告系統(tǒng)如熒光蛋白，β半乳糖苷酶等來幫助檢測。穩(wěn)定轉(zhuǎn)染是指外源DNA既可以整合到宿主染色體中，也可能作為一種游離體存在。盡管線性DNA比超螺旋DNA轉(zhuǎn)入量低但整合率高。外源DN
90%的人在進(jìn)行細(xì)胞轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)時，幾乎忽略了這6點(diǎn)注意事項(xiàng)！2021/11/25
轉(zhuǎn)染是將外源性基因?qū)爰?xì)胞內(nèi)的一種專門技術(shù)。分為物理介導(dǎo)方法：電穿孔法、顯微注射和基因槍；化學(xué)介導(dǎo)方法：如經(jīng)典的磷酸鈣共沉淀法、脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染方法、和多種陽離子物質(zhì)介導(dǎo)的技術(shù)；生物介導(dǎo)方法：有較為原始的原生質(zhì)體轉(zhuǎn)染，和現(xiàn)在比較多見的各種病毒介導(dǎo)的轉(zhuǎn)染技術(shù)。理想細(xì)胞轉(zhuǎn)染方法，應(yīng)該具有轉(zhuǎn)染效率高、細(xì)胞毒性小等優(yōu)點(diǎn)。病毒介導(dǎo)的轉(zhuǎn)染技術(shù)，是目前最高轉(zhuǎn)染效率的方法，同時具有細(xì)胞毒性很低的優(yōu)勢。但是病毒轉(zhuǎn)染方法的準(zhǔn)備程序復(fù)雜，常常對細(xì)胞類型有很強(qiáng)的選擇性，在一般實(shí)驗(yàn)室中很難普及。其它物理和化學(xué)介導(dǎo)的轉(zhuǎn)染方法，則
細(xì)胞轉(zhuǎn)染總是失敗？一文教你如何做好細(xì)胞轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)2021/11/25
細(xì)胞轉(zhuǎn)染技術(shù)是指將外源分子如DNA，RNA等導(dǎo)入真核細(xì)胞的技術(shù)。其在研究基因功能、調(diào)控基因表達(dá)、突變分析和蛋白質(zhì)生產(chǎn)等實(shí)驗(yàn)和應(yīng)用中使用越來越廣泛。然而，轉(zhuǎn)染效率低下卻一直是科研工作者們經(jīng)常遇到的一大難題。尤其是原代細(xì)胞轉(zhuǎn)染，更是因?yàn)殡y度大，效率低從而使得科研人員們頭痛不已，談“轉(zhuǎn)染”色變······這里，小編根據(jù)收集做細(xì)胞轉(zhuǎn)染多年的經(jīng)驗(yàn)和體會，總結(jié)出了以下導(dǎo)致細(xì)胞轉(zhuǎn)染效率低下，經(jīng)?！胺嚒钡拇罂樱约氨苊獾艨永锏囊恍┳龇?。影響細(xì)胞轉(zhuǎn)染效率的因素,轉(zhuǎn)染中經(jīng)常翻車的點(diǎn)影響轉(zhuǎn)染效率的因素有很多，細(xì)胞株
細(xì)胞轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)效率低如何破?2021/11/25
細(xì)胞轉(zhuǎn)染效率低如何破?細(xì)胞轉(zhuǎn)染是細(xì)胞生物學(xué)和分子生物學(xué)的一種常用的技術(shù)手段。而轉(zhuǎn)染效率低卻是實(shí)驗(yàn)科研者經(jīng)常遇到的問題，尤其是原代細(xì)胞轉(zhuǎn)染，更是因?yàn)殡y度大，號稱誰碰誰死，而令人談虎色變。不，應(yīng)該是談原代細(xì)胞色變。當(dāng)實(shí)驗(yàn)進(jìn)行到轉(zhuǎn)染這一步時有哪些坑要避免?需要注意的因素有哪些呢?1.細(xì)胞系的選擇：細(xì)胞系選擇有時是實(shí)驗(yàn)的需要，有時是實(shí)驗(yàn)室條件的限制。如果有選擇的余地當(dāng)然挑個容易做的。越是接近體內(nèi)的真實(shí)情況的原代細(xì)胞，通常越是難于伺候。反之亦然。此外細(xì)胞本身的特性也是需要考慮的因素。有時需要根據(jù)細(xì)胞系來選
如何做核提取物制備優(yōu)化？2021/11/24
材料與儀器轉(zhuǎn)瓶或單層培養(yǎng)的哺乳動物細(xì)胞（如HeLa細(xì)胞）高鹽緩沖液分別含0.8、1.0、1.2、1.4及1.6molLKCl貝克曼JS4.2轉(zhuǎn)子或相當(dāng)?shù)霓D(zhuǎn)子50mL圓錐形刻度聚丙烯離心管（對較小體積的提取物也可用15mL的離心管）Dounce氏玻璃勻漿器（B型研杵）BeckmanJA-20離心轉(zhuǎn)子或相當(dāng)?shù)霓D(zhuǎn)子磁性攪拌器或傾斜臺管型透析膜（14000MWCO）電導(dǎo)計(jì)步驟1)按基本方案中步驟1?8操作。2)在低鹽緩沖液中重懸細(xì)胞核后（1/2體積pnv，見基本方案步驟8)，將細(xì)胞核懸液分成5等份。3)
核提取物的制備方法2021/11/24
材料與儀器轉(zhuǎn)瓶或單層培養(yǎng)的哺乳動物細(xì)胞（如HeLa細(xì)胞）PBS低滲緩沖液高鹽緩沖液含1.2molLKCl透析緩沖液液氮貝克曼JS4.2轉(zhuǎn)子或相當(dāng)?shù)霓D(zhuǎn)子50mL圓錐形刻度聚丙烯離心管（對較小體積的提取物也可用15mL的離心管）Dounce氏玻璃勻漿器（B型研杵）BeckmanJA-20離心轉(zhuǎn)子或相當(dāng)?shù)霓D(zhuǎn)子磁性攪拌器或傾斜臺BeckmanJA-20離心轉(zhuǎn)子或相當(dāng)?shù)霓D(zhuǎn)子磁性攪拌器或傾斜臺、管型透析膜（14000MWCO）、電導(dǎo)計(jì)步驟1a)收集轉(zhuǎn)瓶培養(yǎng)的細(xì)胞：將5×108?10×108細(xì)胞置1L的塑料瓶
如何做非肌肉肌球蛋白的層析純化？2021/11/24
材料與儀器非肌肉肌球蛋白勻漿緩沖液肌動蛋白聚合緩沖液凝膠過濾羥基磷灰石緩沖液GFHT緩沖液大容量轉(zhuǎn)頭步驟高速離心和DEAE層析1.用不含除了PMSF以外的蛋白水解抑制劑的勻漿緩沖液平衡DEAE纖維素，取50ml裝到2.5cmx35cm有合適管路的柱子上。2.準(zhǔn)備總體積為0.8L，線性梯度為0~0.5mol/LKCl的勻漿緩沖液。3.用大容量轉(zhuǎn)頭（例如Ti647.5，它帶6個70ml容量的聚碳酸酯桶）以43000r/min，137600g超速離心2小時，從已勻漿的細(xì)胞中沉淀細(xì)胞碎片。4.盡可能多地
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