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CCK-8，細胞增殖檢測較為合適的選擇2021/10/08

什么是細胞增殖檢測？細胞增殖是細胞在周期調(diào)控的因子下，通過DNA復制等反應，完成細胞分裂的過程。在細胞增殖中，新細胞的產(chǎn)生過程影響著體內(nèi)所有組織的發(fā)育、生長和維持，同時，它也被嚴格調(diào)控著，以防失控的細胞分裂（可出現(xiàn)在各種癌癥）導致腫瘤的形成和器官功能的破壞。正因為細胞增殖對生物活動的這種廣泛影響，其在各種環(huán)境中的準確評估變得十分重要。腫瘤細胞增殖和轉(zhuǎn)化過程細胞增殖是通過細胞分裂引起的細胞數(shù)量增加，在整個生命周期中對正常組織發(fā)育和維持是必須的。一些類型的細胞會處于持續(xù)增殖狀態(tài)，如皮膚和骨髓細胞，但

實驗操作分享：干細胞誘導成骨實驗2021/10/08

間充質(zhì)干細胞屬于成體干細胞，可在體外通過不同的方法干預下下誘導分化為骨、軟骨及其他結締組織，因其來源廣泛，分離無創(chuàng)傷，較低的免疫原性、生長周期短等特點，是組織工程種子細胞的重要來源。干細胞的誘導分化一方面是干細胞鑒定的主要方法，另一方面也是干細胞功能學研究的主要途徑。采用體外條件培養(yǎng)基誘導培養(yǎng)下，人間充質(zhì)干細胞應能夠分化為成脂肪、骨、軟骨細胞。成骨分化經(jīng)茜素紅染色法鑒定。實驗前準備試劑：PBS，成骨誘導分化培養(yǎng)基，茜素紅耗材：NEST細胞培養(yǎng)皿，NEST普通吸頭，NEST微量離心管設備：CO2培

細胞為何總是抱團生長？2021/10/08

細胞為啥總是一言不合就抱團生長？！是細胞污染了還是正?，F(xiàn)象？是消化不好了還是鋪板有問題？抱團細胞越來越多，怎么樣才能讓細胞分開生長？請認真閱讀以下干貨，看看能否幫您答疑解惑！細胞抱團一定代表細胞狀態(tài)不好嗎？細胞生長的時候肯定是要相互聯(lián)系，大部分的細胞都是要成片生長的，應該仔細觀察每種細胞的狀態(tài)，抱團并不一定代表不好：1、若細胞輪廓清晰，可看清楚一個個的細胞，像葡萄一樣，一串串的，就是狀態(tài)好的，說明細胞在分裂。2、但大部分細胞抱團絕對不是一件好事！如果輪廓消失，出現(xiàn)細胞融解或細胞變灰暗、透光性變差

細胞消化知多少？2021/10/08

每個做細胞實驗的人，不管去哪“浪”，心里都會有個牽掛：我的細胞，過兩天要傳代！大部分組織細胞離體培養(yǎng)時，會以貼壁的形式生長（除了取自血、脾或骨髓的細胞）;*培養(yǎng)基中的血清，含有許多帶陽性電荷的促細胞附著因子（層黏連蛋白Laminine、纖維鏈接蛋白Fibronectin等胞外基質(zhì)），能幫助細胞附著于帶陰性電荷的底物上（玻璃或塑料培養(yǎng)容器），并形成鍵結、貼壁伸展?！栃噪姾傻拇偌毎街蜃樱軒椭毎街趲ш幮噪姾傻牡孜锷纤援敿毎L滿需要分盤的時后，就要想辦法讓細胞和培養(yǎng)底物說再見！也就是所謂

【外泌體應用】天然納米藥物載體2021/10/08

外泌體是來源于細胞內(nèi)膜的30-180nm的脂質(zhì)雙層包裹的囊泡，包含有核酸、蛋白質(zhì)和脂質(zhì)等生命物質(zhì)，在細胞外環(huán)境中循環(huán)，是細胞間通訊工具。外泌體在形成的過程中，會把一些蛋白質(zhì)、活性酶囊括在內(nèi)以及攜帶一系列的寡核苷酸，特別是線粒體DNA，mRNA，miRNA和許多其它非編碼RNA等。因而外泌體是天然的多功能載體，可以包裹并遞送各種生命物質(zhì)，例如小RNA、mRNA和蛋白質(zhì)等。相對于脂質(zhì)體和病毒載體，外泌體穩(wěn)定性高，生物相容性好，免疫原性低，而且可以滲透生物屏障（例如血腦屏障、胎盤屏障），故外泌體作為天

吃“激素”的原代細胞2021/09/30

培養(yǎng)原代細胞的時候，我們會考慮該細胞生長所需要的組分，去選擇培養(yǎng)基，為此，很多商家都提供配套的*培養(yǎng)基，比如cellSystems的cultureBoost經(jīng)典細胞培養(yǎng)基，lonza的EGM系列等等，配套的培養(yǎng)基都會有一部分為細胞生長因子，一提到生長這個詞，馬上想到的就是激素，好像真的感覺也是這么回事哦，生長因子和激素歷來都是扯不開的兩個話題。廣義的生長因子除了維生素外，還包括堿基、嘌呤、嘧啶、生物素和煙酸等，有時還包括氨基酸營養(yǎng)缺陷突變株所需要的氨基酸在內(nèi)，細胞生長因子是調(diào)節(jié)細胞生長與其他細胞

復蘇細胞的注意事項2021/09/30

到了復蘇細胞開始實驗的環(huán)節(jié)了，以下是整理的一些復蘇細胞的注意事項：1.細胞儲存在液氮中，溫度達-196℃，理論上儲存時間是無限的。只要一直在液氮，凍存沒有問題，那么復蘇也不會出現(xiàn)很大的問題，不存在有效期限，細胞凍存及復蘇的基本原則是慢凍快融，復蘇一定越快越好，實驗證明這樣可以最大限度的保存細胞活力。2.取細胞時應做好防護措施，帶好防凍手套，護目鏡。細胞凍存管可能漏入液氮，解凍時凍存管中的氣溫急劇上升，可導致爆炸。3.必須在1-2min內(nèi)使凍存液*融化，復蘇溫度太慢，會造成細胞的損傷。如果凍存管的

實驗分享：血腦屏障實驗的操作步驟2021/09/30

從19世紀末，保羅·埃爾利希在一個實驗中發(fā)現(xiàn)了這個屏障，后期科學家跟進研究后發(fā)現(xiàn)血腦屏障（BBB）對機體發(fā)揮著重要作用。BBB結構和功能的完整對于維持神經(jīng)元功能，使中樞神經(jīng)系統(tǒng)免受病原體、炎性因子、損傷的影響有重要意義。缺血性腦血管病的發(fā)生、發(fā)展與BBB結構和功能的破壞密切相關。一．實驗試劑準備：1.準備好無鈣鎂離子PBS磷酸鹽緩沖液，cellsystems人腦微血管內(nèi)皮細胞（貨號：ACBRI376)建議使用無鈣鎂離子的緩沖液實驗.2.通過稀釋0.5mg/mL纖維素溶液和0.3mg/mL膠原蛋白

細胞實驗需要準備些什么？2021/09/29

1.常用的吸量管有：奧氏吸量管、移液管、刻度吸量管2.如何正確使用吸量管？答：(1)選用原則：就近原則(2)吸量管的使用：吸-擦-調(diào)-放3.如何正確使用微量加樣器？答：轉(zhuǎn)-按-吸-擦-按4.如何正確使用離心機？放置-裝管-平衡-啟動-取出5.細胞培養(yǎng)必需設備有哪些？答：細胞培養(yǎng)必需設備有超凈工作臺、CO2培養(yǎng)箱、倒置顯微鏡、液氮生物容器、壓力蒸汽消毒器、無菌過濾器、電熱干燥箱、離心機、細胞計數(shù)板和冰箱等。6.無菌操作技術包括哪些內(nèi)容?答：1.保持安靜、整潔的無菌工作區(qū)域;2.保持干凈整潔的工作面

細胞培養(yǎng)無小事——細胞培養(yǎng)的主要步驟2021/09/29

一個小細胞可能會把人弄得吃不下，睡不著，焦頭爛額？？？信不信還真的有這樣的事情，可能整個實驗下來計劃是三個月左右，但實際有時候出手的第一步就遇到了攔路虎，why？細胞總是養(yǎng)不好；天啊，馬上就到了三個月了，SOsad，下面我們就來看看細胞主要的培養(yǎng)步驟吧。選對培養(yǎng)基很重要：培養(yǎng)某一類型細胞沒有固定的培養(yǎng)條件。在MEM中培養(yǎng)的細胞，很可能在DMEM或M199中同樣很容易生長?？傊话闶紫冗xMEM做粘附細胞培養(yǎng)、RPMI-1640做懸浮細胞培養(yǎng)是一個好的開始，各種目的無血清培養(yǎng)最好首先選的培養(yǎng)基。G

科研實驗無小事——細胞的STR鑒定2021/09/29

做實驗的時候才發(fā)現(xiàn)細胞的種類太多，于是我們需要查詢各種文獻看每個細胞的特征，從而設計實驗規(guī)劃與步驟，我們在緊湊的實驗種完成了實驗，提交文章的時候，才發(fā)現(xiàn)，需要細胞鑒定。據(jù)統(tǒng)計約30%細胞系被交叉污染或錯誤辨識,因使用了交叉污染或錯誤辨識的細胞而導致研究結論錯誤、結果不可重復、臨床細胞治療災難性后果……這浪費大量時間、精力和金錢。因此NIH、ATCC等機構多次發(fā)出呼吁，要求研究者對細胞進行鑒定，最近美媒報道1/6科學家在研究使用“假”細胞，2014年12月、2015年2月Science雜志分別發(fā)表

細胞培養(yǎng)無小事——如何選擇血清？2021/09/29

體外培養(yǎng)的細胞直接生活在培養(yǎng)基中，因此培養(yǎng)基需要滿足細胞對營養(yǎng)成分、促生長因子、激素、滲透壓、pH等諸多方面的要求；原代提取的時候選擇如何選擇培養(yǎng)基成了關鍵的問題，此外在細胞提取的時候因血清可以模擬個體的生存環(huán)境，在提取細胞的時候血清一定不可少。維持細胞生長的營養(yǎng)條件一般包括以下幾個方面：氨基酸，單糖，維生素，無機離子與微量元素，此外還有促生長激素，滲透壓，pH值，并保證在配制試劑的時候無毒無污染。正常的培養(yǎng)細胞的培養(yǎng)基無非是基礎培養(yǎng)基加血清。血清是一個神秘的試劑，至今為止，它在細胞的生長繁殖發(fā)

細胞培養(yǎng)無小事——貼壁細胞的消化方法2021/09/29

如何消化讓細胞生長的更好，養(yǎng)細胞關鍵還是在消化，以下介紹幾種細胞的消化方法一、酶消化法1、胰酶，這是用得最多的。一般濃度在0.25-0.5%。消化的時間根據(jù)細胞種類、操作手法，溫度等因素而變化，從幾分鐘到幾十分鐘不等。0.25%的胰酶，37℃一般在消化單層貼壁的細胞一般1-5分鐘就足夠了，用血清或者含血清的*培養(yǎng)基終止。2、膠原酶，一般用于原代細胞消化，這種方法作用溫和，對細胞損傷較小，消化的時間也略長，不推薦的原因是膠原酶有點小貴而且培養(yǎng)細胞株感覺沒有多大的必要。二、離子螯合劑不破壞細胞表面分

簡單實用的原代細胞培養(yǎng)方法2021/09/28

很多老師在設計科研實驗的時候都會很迷茫，到底用什么細胞好？越來越多的老師開始傾向于原代細胞的科研實驗，在設計實驗中，原代細胞和細胞株到底該怎么選擇呢？原代細胞的定義：原代細胞的培養(yǎng)是指直接從機體取下細胞、組織和器官后立即進行培養(yǎng)。因此，較為嚴格地說是指成功傳代之前的培養(yǎng)，此時的細胞保持原有細胞的基本性質(zhì)，如果是正常細胞，仍然保留二倍體數(shù)。但實際上，我們通常把第一代至第十代以內(nèi)的培養(yǎng)細胞統(tǒng)稱為原代細胞培養(yǎng)。原代細胞因為可以模擬機體的功能，主要用于：生物醫(yī)藥產(chǎn)業(yè)如藥物篩選、藥物代謝和毒理研究、癌癥藥

內(nèi)皮細胞的培養(yǎng)方法及內(nèi)皮微粒的表達2021/09/28

內(nèi)皮細胞是每個組織中不可少的傳導工具，包括萬惡的腫瘤，也是在初發(fā)階段，血管先擴增一波，從而大面積進攻組織，內(nèi)皮細胞怎么提取培養(yǎng)呢？原代內(nèi)皮細胞分離一般采用的是組織酶消化法，不要天真的以為您只要酶消化下來的細胞都是內(nèi)皮細胞了，有可能也有成纖維細胞哦，這就牽扯到怎么抑制成纖維細胞的生長，讓內(nèi)皮細胞趕快成長起來的方法了。內(nèi)皮細胞一般采用內(nèi)皮細胞*培養(yǎng)基來維持細胞生長，需要注意的是才分離出來的細胞一般都不會采用無血清的培養(yǎng)基培養(yǎng)，因為無血清的培養(yǎng)基可能會導致細胞會有不貼壁的現(xiàn)象發(fā)生，需要更換無血清培養(yǎng)方

6個小細節(jié)，輕松搞定細胞“劃痕實驗”2021/09/28

傷口愈合試驗，也通常稱為“劃痕試驗”，是一種廣泛建立的研究體外集體細胞遷移的技術。細胞劃痕（WoundHealing)是一種操作簡單，經(jīng)濟實惠的研究細胞遷移/腫瘤侵襲的體外試驗方法。其實驗原理是，當細胞長到融合成單層狀態(tài)時，在融合的單層細胞上人為制造一個空白區(qū)域，稱為“劃痕”。劃痕邊緣的細胞會逐漸進入空白區(qū)域使“劃痕”愈合。條件好的實驗室可使用活細胞成像來分析創(chuàng)傷愈合實驗中角質(zhì)形成細胞或者成纖維細胞的遷移活動。結合包含的軟件分析算法，有可能延遲量化間隙表面關閉和關閉推移時間的速度，但是使用延時顯

DNA提取的8個問題解答2021/09/28

質(zhì)粒DNA的提取是DNA技術中的必需實驗技能。分離質(zhì)粒DNA一般分為三個步驟：1、培養(yǎng)細菌使質(zhì)粒擴增2、收集和裂解細菌3、分離和純化質(zhì)粒DNA堿裂解法是較常用的提取的方法，在質(zhì)粒提取過程中，由于機械力、酸堿度、試劑等的原因，可能使質(zhì)粒DNA鏈發(fā)生斷裂。所以，多數(shù)質(zhì)粒粗提取物中含有三種構型的質(zhì)粒：共價閉合環(huán)狀DNA(cccDNA)：質(zhì)粒的兩條鏈沒有斷裂;超螺旋開環(huán)DNA(ocDNA)而在DNA提取中總會遇到各種一些問題，導致實驗無從下手，下面我們來分析一些常見的問題：一、為什么用無水乙醇沉淀DNA

細胞培養(yǎng)之“麻煩精”支原體的防治方法2021/09/28

支原體是細胞培養(yǎng)中常見的污染，。因支原體屬于直徑介于0.2-2µm的最小原核生物，形態(tài)易變，所以即使用濾網(wǎng)給培養(yǎng)基過濾20次，它還會在已經(jīng)感染的培養(yǎng)基中“陰魂不散”，而又因為它缺少細胞壁，沒有這層外衣包裹之后的它，可以成功逃過大部分抗生素的“追殺”。在細胞培養(yǎng)液中，支原體可達到107-108CFU/mL（CFU=ColonyFormingUnit，是一種支原體的濃度測量單位）而不使培養(yǎng)液混濁及影響細胞生長，而因為在初感染時它不會給細胞帶來任何影響，這一點，估計黑膠蟲都要被它隱蔽得方式折服。那么支

懸浮細胞傳代怎么傳代，看這里！2021/09/26

小伙伴們都知道，實驗室里培養(yǎng)的動物細胞一般可以簡單地分為兩大類，貼壁細胞和懸浮細胞。貼壁細胞（adherentcells）指的是這類生長必須有可以貼附的支持物表面,只有依靠自身分泌的或培養(yǎng)基中提供的貼附因子才能在該表面上生長，繁殖的細胞。當細胞在該表面生長后，一般會形成兩種形態(tài)，即成纖維樣細胞或者上皮樣細胞。而另一類則是細胞生長不依賴支持物表面，在培養(yǎng)液中呈懸浮狀態(tài)生長，這類細胞我們稱之為懸浮細胞。懸浮細胞在顯微鏡下觀察，一般是單個生長的大小均一的圓圓的，亮亮的形態(tài)規(guī)則的細胞形態(tài)，也有部分細胞聚

細胞培養(yǎng)之“黑膠蟲”的防治2021/09/26

“黑膠蟲”/“Nanobacteria”究竟是何方神圣？《生物化學與生物物理進展》雜志（PIBB）2020年第1期發(fā)表了題為細胞培養(yǎng)中“黑膠蟲”污染的檢測及防治一文。根據(jù)作者描述，“黑膠蟲”污染具有以下特征：1.培養(yǎng)基和正常培養(yǎng)基沒有區(qū)別；2.低倍鏡下它是黑色的點點和細胞碎片沒有區(qū)別3.高倍鏡下它會做運動給你看，也能模仿細胞碎片和細胞分泌物的布朗運動。還有黑膠蟲“路癡”到處跑的。4.與細胞的數(shù)量成反比，細胞越多，它越少，細胞越少它越多5.細胞狀態(tài)越養(yǎng)越差。該科研成果除了得出這些結論外，還成功的鑒