DNA 中的 5 - 甲基胞嘧啶（5 - mC）是由 DNA 甲基轉(zhuǎn)移酶在胞嘧啶環(huán)的 5 - 碳上共價(jià)添加甲基基團(tuán)形成的。這一過程已得到充分研究，通常與基因表達(dá)的抑制相關(guān)。研究表明，在人類中，5 - mC 還存在于多種 RNA 分子中，包括 tRNA、rRNA、mRNA 和非編碼 RNA（ncRNA）。5 - mC 在某些類別的 ncRNA 中似乎較為富集，但在 mRNA 中相對(duì)較少。動(dòng)物基因組中 5 - mC 的含量變化較大，從一些昆蟲中檢測不到的量到人類細(xì)胞中約占總 RNA 的 0.1 - 0.45%。研究發(fā)現(xiàn)，大多數(shù)（83%）的 5 - mC 位點(diǎn)存在于 mRNA 中。在這些轉(zhuǎn)錄本中，5 - mC 在蛋白編碼序列中相對(duì)較少，但在 5' 和 3' 非翻譯區(qū)（UTR）中較為富集。已知兩種不同的甲基轉(zhuǎn)移酶，NSUN2 和 Dnmt2，在真核生物 RNA 中催化 5 - mC 的修飾。有大量證據(jù)表明，RNA 胞嘧啶甲基化會(huì)影響多種生物學(xué)過程的調(diào)控，例如 RNA 穩(wěn)定性和 mRNA 翻譯。此外，vault RNA 中 5 - mC 的缺失會(huì)導(dǎo)致異常加工成與 Argonaute 相關(guān)的小 RNA 片段，這些片段可作為 microRNA 功能化。因此，vault ncRNA 的受損加工可能有助于與 NSUN2 缺乏相關(guān)的某些人類疾病的發(fā)病機(jī)制。

MethylFlash™ 5 - mC RNA 甲基化 ELISA 簡易試劑盒（熒光法）是一套經(jīng)過優(yōu)化的緩沖液和試劑，用于定量檢測從任何物種（包括哺乳動(dòng)物、植物、真菌、細(xì)菌和病毒）中分離的總 RNA 的全球 5 - 甲基胞嘧啶（5 - mC）RNA 甲基化水平，這些物種包括但不限于培養(yǎng)細(xì)胞、新鮮和冷凍組織、血漿 / 血清樣本和體液樣本等。該試劑盒基于我們流行的 MethylFlash™ 定量技術(shù)。

艾美捷MethylFlash 5-mC RNA甲基化ELISA Easy試劑盒（熒光法）（#P-9009-48）優(yōu)勢與特點(diǎn)：

快速 —— 整個(gè)操作流程只需 2 小時(shí) 40 分鐘。

穩(wěn)健 —— 試劑盒成分使檢測具有較大的“信號(hào)窗口"，且重復(fù)性差異較小。

方便 —— 本身背景噪音低，從而無需進(jìn)行板阻斷步驟。

靈敏 —— 檢測限可低至從 200 ng 輸入 RNA 中的 0.02% 的 5 - mC RNA。

特異 —— 對(duì) 5 - mC 具有高特異性，在指定樣本 RNA 濃度范圍內(nèi)，對(duì)未甲基化的胞嘧啶或羥甲基化的胞嘧啶無交叉反應(yīng)。

通用 —— 正負(fù)對(duì)照允許檢測任何物種的 5 - mC RNA 甲基化。

準(zhǔn)確 —— 優(yōu)化的正對(duì)照可按百分比進(jìn)行分級(jí)，使檢測結(jié)果更準(zhǔn)確，與 HPLC - MS 分析高度可比。

靈活 —— 條帶式微孔板格式使檢測既適用于手動(dòng)操作，也適用于高通量分析。

原理與操作流程：

該試劑盒包含用于定量檢測全球 5 - mC RNA 甲基化的所有試劑。在檢測過程中，RNA 會(huì)結(jié)合到經(jīng)過特殊處理具有高核酸親和力的條帶孔中。使用捕獲和檢測抗體檢測 RNA 中的 5 - mC，然后通過在微孔板分光光度計(jì)中讀取熒光強(qiáng)度來定量檢測。5 - mC RNA 的百分比與測量到的熒光強(qiáng)度成正比。

數(shù)據(jù)分析：

左圖：是使用 5 - mC 標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照生成的典型標(biāo)準(zhǔn)曲線示例。

右圖：使用 MethylFlash™ 5 - mC RNA 甲基化 ELISA 簡易試劑盒（熒光法）對(duì)不同物種的各種 RNA 樣本中的 5 - mC 含量進(jìn)行準(zhǔn)確定量。結(jié)果與 MS - LC 獲得的結(jié)果密切相關(guān)。