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NeuroCortex series 皮質(zhì)腦成熟試劑盒

1、 產(chǎn)品描述

NeuroCortex series皮質(zhì)腦類(lèi)器官誘導(dǎo)試劑盒是?；镒灾餮邪l(fā)的前腦腹側(cè)化信號(hào)通路調(diào)控技術(shù)，專(zhuān)為模擬人腦皮質(zhì)發(fā)育及功能研究設(shè)計(jì)的標(biāo)準(zhǔn)化培養(yǎng)體系。該體系通過(guò)時(shí)序激活Wnt/β-catenin及梯度抑制BMP/Smad信號(hào)，驅(qū)動(dòng)人源多能干細(xì)胞（PSC）定向分化為高純度能神經(jīng)元（VGLUT1/2陽(yáng)性率>85%），并同步誘導(dǎo)放射狀膠質(zhì)細(xì)胞（Pax6+/BLBP+）形成仿生腦室區(qū)結(jié)構(gòu)?？稍?span>60天內(nèi)穩(wěn)定生成直徑1.5-2.0 mm的層狀皮質(zhì)類(lèi)器官，其特征性表達(dá)深層皮質(zhì)標(biāo)志物TBR1（第Ⅴ-Ⅵ層）及表層SATB2+神經(jīng)元（第Ⅱ-Ⅳ層），并伴隨MBP+/MOG+少突膠質(zhì)細(xì)胞介導(dǎo)的致密髓鞘化（LFB染色陽(yáng)性率>70%）。該體系通過(guò)三維旋轉(zhuǎn)生物反應(yīng)器或超低粘附孔板中（3D-RBC，氧梯度維持在8-12%）實(shí)現(xiàn)高通量培養(yǎng)（單批次≥96個(gè)類(lèi)器官）。本模型適用于神經(jīng)退行性疾?。ㄈ绨柎暮ＤYtau蛋白病理建模）、精神分裂癥NMDA受體功能解析及自閉癥譜系障礙突觸可塑性研究，同時(shí)兼容單細(xì)胞測(cè)序和鈣成像動(dòng)態(tài)追蹤技術(shù)。

2、 產(chǎn)品信息

3、 其他自備材料和試劑

4、 模基生物推薦用細(xì)胞系

H1、H9、HN4、iPSCs帕金森患者來(lái)源DY043、iPSC-EGFP等

5、 新手須知

NeuroCortex series 腦類(lèi)器官誘導(dǎo)試劑盒理論上可以形成至少100個(gè)腦類(lèi)器官，但是建議次誘導(dǎo)以1個(gè)六孔板啟動(dòng)分化形成至少60-100個(gè)均一大小神經(jīng)上皮球（理想形成率60%）。

注意事項(xiàng)：在使用時(shí)應(yīng)始終穿戴，在處理諸如人體細(xì)胞或其他生物及有害物質(zhì)時(shí)應(yīng)遵循安全的實(shí)驗(yàn)室規(guī)程。

僅用于科學(xué)研究。

6、 使用說(shuō)明：皮質(zhì)腦類(lèi)器官誘導(dǎo)培養(yǎng)

a)      實(shí)驗(yàn)用品

基質(zhì)膠、干細(xì)胞培養(yǎng)基、皮質(zhì)腦類(lèi)器官誘導(dǎo)培養(yǎng)基、超低黏附u底板/6孔培養(yǎng)皿其他類(lèi)器官培養(yǎng)所需試劑、耗材。

b)     復(fù)蘇hESC/iPSC（以6孔板為例）

當(dāng)神經(jīng)球中心及外周區(qū)域出現(xiàn)特征性黑色斑點(diǎn)狀神經(jīng)上皮蓮座結(jié)構(gòu)（Rosette structure，PAX6+/Nestin+雙陽(yáng)性神經(jīng)前體細(xì)胞簇）時(shí)，提示神經(jīng)外胚層擴(kuò)張至成熟階段，需終止神經(jīng)蓮座擴(kuò)張培養(yǎng)基（Neural Rosette Expansion Medium）的使用。棄去原培養(yǎng)基，每孔加入2 mL皮質(zhì)腦成熟培養(yǎng)基，轉(zhuǎn)移至水平十字/旋轉(zhuǎn)搖床（80 rpm/s）持續(xù)培養(yǎng)18-26天，每48-72小時(shí)全量換液。成熟類(lèi)器官經(jīng)免疫熒光染色驗(yàn)證可觀(guān)察到TUJ1+神經(jīng)元與SOX2+放射狀膠質(zhì)細(xì)胞形成腦室區(qū)（VZ）及亞腦室區(qū)（SVZ）層狀結(jié)構(gòu)，qPCR檢測(cè)顯示SLC17A6/VGLUT2等能標(biāo)志基因表達(dá)量提升3-5倍。

當(dāng)皮質(zhì)類(lèi)器官直徑≥1.0 mm時(shí)，需執(zhí)行機(jī)械分割以緩解內(nèi)部營(yíng)養(yǎng)擴(kuò)散限制。使用無(wú)菌2號(hào)尖刃片沿冠狀面將類(lèi)器官切割為2-4塊（組織塊體積均一性CV<15%），經(jīng)DPBS洗滌后采用寬口徑移液槍頭（內(nèi)徑1.5 mm）轉(zhuǎn)移至15 mL錐形管靜置沉降（5-8 min）。棄上清后加入含1×StemGrowth抗脅迫補(bǔ)充劑的神經(jīng)蓮座擴(kuò)增培養(yǎng)基，接種于超低吸附六孔板（80 rpm/s），每日換液以清除切割應(yīng)激產(chǎn)生的凋亡碎片（Annexin V+比例<5%）。4天后切換至皮質(zhì)成熟培養(yǎng)基并提升搖床轉(zhuǎn)速至120 rpm/s，通過(guò)增強(qiáng)培養(yǎng)基滲透效率（擴(kuò)散系數(shù)提升40%）可將類(lèi)器官活性維持至180天，期間TUNEL檢測(cè)顯示中心壞死區(qū)域占比穩(wěn)定于<8%，同時(shí)突觸素表達(dá)（Synaptophysin+ puncta密度>800/μm2）保持功能穩(wěn)態(tài)。

V1.1版

更新時(shí)間：2025/06/23