當前位置:北京百泰派克生物科技有限公司>>檢測技術服務>>蛋白分析>> 如何選擇適合你研究的蛋白質結構測定方法?
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dànbáizhì是生命活動的執(zhí)行者,從催化反應的酶、傳遞信號的受體、到構成細胞支架的結構蛋白,其功能無一不依賴于其三維結構。然而,僅靠氨基酸序列遠不足以理解其生物學角色。在生物學層面,dànbáizhì結構不僅揭示其生物學功能,還為藥物靶點發(fā)現、抗體設計、蛋白工程等應用提供原子級圖譜。在眾多結構測定技術中,X射線晶體學、冷凍電鏡(Cryo-EM)、核磁共振(NMR)和質譜(MS)相關技術各有優(yōu)劣。dànbáizhì結構測定并非“一招鮮",而是依據樣品性質、研究目標和實驗資源,選擇zuì匹配的技術。如何選擇適合你研究的dànbáizhì結構測定方法, 百泰派克生物科技將結合自身質譜平臺優(yōu)勢,系統梳理四大主流結構測定方法的適用場景與技術特點,幫助您做出科學決策。
一、X射線晶體學:高分辨率的“黃金標準"
1、適合場景
(1)分子量較大(>10 kDa)的穩(wěn)定蛋白
(2)蛋白能成功結晶,結構需要原子級精度
2、技術亮點
(1)分辨率高,可達1 ?級別
(2)適合解析酶活性中心、配體結合口袋等關鍵位點
3、技術挑戰(zhàn)
(1)蛋白結晶難度大
(2)無法研究高度柔性或動態(tài)構象
專家建議
如果您研究的是穩(wěn)定、表達量高的dànbáizhì(如激酶、轉運蛋白等),并希望獲得jīngquè結構用于結構導向藥物設計,X-ray是shǒuxuǎn。
二、冷凍電鏡(Cryo-EM):大分子復合物的利器
1、適合場景
(1)大型復合物(>200 kDa)、膜蛋白
(2)不易結晶的柔性結構
2、技術亮點
(1)不需結晶,樣品狀態(tài)更接近天然環(huán)境
(2)隨著冷凍單顆粒分析技術進步,分辨率持續(xù)提升
3、技術挑戰(zhàn)
(1)對設備依賴度高,圖像處理門檻大
(2)樣品需高純度且無聚集
專家建議
如果您的研究對象是多蛋白復合物、病毒顆?;蚰そY合蛋白,Cryo-EM可能是zuì具潛力的選擇。
三、核磁共振(NMR):動態(tài)研究與小蛋白shǒuxuǎn
1、適合場景
(1)分子量小于40 kDa的可溶性蛋白
(2)動態(tài)構象變化研究(如構象切換、配體誘導變化)
2、技術亮點
(1)可在溶液中測定,模擬生理環(huán)境
(2)能獲取dànbáizhì動力學信息,適用于功能調控機制研究
3、技術挑戰(zhàn)
(1)分子量限制明顯
(2)對樣品濃度要求較高(通常需>0.5 mM)
專家建議
適用于研究小分子蛋白、功能域結構及構象變化,尤其適合分子機制探索階段。
四、質譜(MS)輔助結構生物學:從構象到互作的新工具箱
雖然質譜不是傳統意義上的“結構測定"方法,但近年來,MS在解析蛋白構象、修飾位點及互作網絡方面顯示出強大潛力,已成為結構生物學的重要補充。
1、交聯質譜(Crosslinking-MS)
通過交聯劑捕獲蛋白之間/內部的空間鄰近位點,提供低分辨率結構約束,常用于復合物結構建模、蛋白相互作用界面解析
2、氫氘交換-MS(HDX-MS)
揭示dànbáizhì的柔性區(qū)域、構象變化和配體結合誘導的結構變化,對研究酶機制、抗體表位識別等極為關鍵
3、原位蛋白zhìzǔxué結合結構信息
通過分子伴侶組學、跨膜區(qū)域鑒定等手段間接反映結構狀態(tài)
在百泰派克生物科技,我們結合高分辨率質譜平臺(如Orbitrap Fusion Lumos、timsTOF Pro 2)與交聯-MS、HDX-MS等gāojí應用,為科研客戶提供結構解析的補充視角,此外,我們的一站式蛋白組學+結構功能整合服務,支持從樣品制備到數據解讀的全過程,加速蛋白功能研究和靶點驗證。每種蛋白結構測定方法都有其dútè的適用場景和研究價值。zuì優(yōu)方案往往不是“哪種方法zuì好",而是“哪種方法zuì適合你的科學問題"。如果您正在規(guī)劃蛋白結構研究或希望補充已有數據,歡迎聯系我們的科學顧問團隊。百泰派克生物科技將以質譜為核心技術支撐,為您提供結構生物學領域的創(chuàng)新解決方案。
百泰派克生物科技使用Thermo公司新推出的Obitrap Fusion Lumos質譜儀及島津公司埃德曼降解測序系統對dànbáizhì序列進行分析,提供基于質譜的蛋白測序分析服務,包括對dànbáizhì的氨基酸組成分析,Nduāncèxù,Cduāncèxù和全序列分析,以及基于埃德曼降解的dànbáizhìN端序列分析服務。對于未知理論序列的dànbáizhì,提供基于從頭測序法的dànbáizhì從頭測序服務,對蛋白序列進行分析。
※服務優(yōu)勢:
1.采用目前世界上先進的質譜儀器 Obitrap Fusion Lumos;
2.可實現對所測定靶蛋白序列 100% 的覆蓋;
3.可測定蛋白N端多達 70個氨基酸序列;
4.可測定多種形式的樣品: 蛋白溶液、PVDF 蛋白條帶;
5.樣品用量低: 蛋白樣品僅需 5-10ug,即可完成檢測;
6.測序不受N端封閉,PEC和和糖基化等N端修飾的影響。
百泰派克生物科技采用Thermo Fisher的Orbitrap Fusion Lumos質譜平臺結合Nano-LC,提供定量蛋白zhìzǔxué、bǎxiàngdàn白zhìzǔxué、多肽組學、翻譯后修飾蛋白組學等多種蛋白zhìzǔxué分析服務。此外,百泰派克生物科技新推出基于timsTOF Pro的4D蛋白zhìzǔxué服務,助力微量樣本蛋白組學、大樣本群醫(yī)學及高通量修飾組學等研究工作。
※服務優(yōu)勢:
1 .高通量定量蛋白分析:多對照組大規(guī)模實驗分析,發(fā)現新的生物標記物;
2.體內體外多種dànbáizhì標記方法,適用于分析組織、細胞、血液等多種樣品;
3.質譜分析靈敏度高,實驗結果重復度高;
4.可檢測較低豐度蛋白,線性范圍廣;
5.zhuānyè生物信息學分析,分析更系統準確。
百泰派克生物科技采用Fluidigm質譜流式系統進行單細胞質譜流式技術分析,采用金屬元素標記物(通常是金屬元素標記的特異抗體)標記細胞表面和內部的分子,然后用流式細胞原理分離單個細胞,再用電感耦合等離子體質譜(ICP-MS)分析單個細胞的原子質量譜,zuì后將原子質量譜數據轉換為細胞表面和內部的信號分子表達量。
※服務優(yōu)勢:
1.技術先進,填補技術空白
采用金屬標記抗體技術,避免了傳統流式熒光通道少且易相互影響的問題。可在單細胞層面上對多種指標同時進行表征,百泰派克生物科技可做到同時檢測51個目標蛋白。
2.分析數量大,成本較低
單細胞RNAseq受成本等因素限制,所有樣本細胞匯總的分析數目一般在2x10^4個左右,而流式質譜技術一次(單樣本)就可分析至少10^5的細胞,實現了數量級的提高,且成本不高于單細胞RNAseq。
3.應用前景大
①流式質譜結果可以給出細胞亞群的變化,在臨床診斷、疾病機制研究等方面具有極大的研究前景;
②將金屬標簽技術與其他技術結合會有新應用方向。除常規(guī)蛋白外,質譜流式細胞技術還可用于蛋白翻譯后修飾;
③可檢測細胞存活率、細胞大小、mRNA轉錄子表達量、DNA合成速率以及蛋白酶活性等。
百泰派克生物科技的基于高精度質譜的免疫多肽組學分析及新抗原發(fā)現一站式解決方案包括我們專有的、高度敏感的免疫肽富集和鑒定方案。我們能夠幫助您實現10,000個以上I型多肽和10,000個以上II型多肽的鑒定和識別。通過我們優(yōu)化的高通量免疫多肽組學分析平臺進行免疫肽組學分析,可從zuì小的樣品材料中進行可重復的識別和定量。該服務可以應用于大規(guī)模的研究,旨在助力科研工作者尋找癌癥、免疫疾病及傳染病的解決方案,深入挖掘未知的靶標。
百泰派克基于高分辨率質譜技術,MALDI TOF,高效色譜分離技術,提供一系列完善的生物藥物分析方案,從dànbáizhì、多肽、抗體、疫苗等生物制品的氨基酸組成和一級結構分析,到產品變異性和純度分析。旨在提供優(yōu)質生物藥物分析服務,幫助生物醫(yī)藥生產商提高生物藥物品質。
北京百泰派克生物科技有限公司致力于為生物/制藥和醫(yī)療器械行業(yè)提供質量控制檢測和項目驗證等zhuānyè服務。公司實驗室遵循NMPA、ICH、FDA和EMA等的法規(guī)和指導原則,通過CNAS/ISO9001雙重質量體系認證,建立了完備的質量體系,數據冷熱/異地備份,設備定期計量/期間核查,軟件審計追蹤,為客戶提供一體化解決方案和技術服務,支持新藥研發(fā)、藥物申報注冊和生產放行。
1.公司采用ISO9001質量控制體系,zhuānyè提供以質譜為基礎的CRO檢測分析服務;
2.獲國家CNAS實驗室認可,為客戶提供符合全球藥政法規(guī)的藥物質量研究服務;
3.業(yè)務范圍覆蓋蛋白zhìzǔxué、多肽組學、代謝組學、生物藥物表征、單細胞分析、單細胞質譜流式、生信云分析以及多組學生物質譜整合分析等;
4.七大質量控制檢測平臺,滿足您一站式服務需求;
5.服務3000+企業(yè),10000+客戶的選擇;
6.致力于為您提供優(yōu)質的生物質譜分析服務!
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