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LC-MS氨基酸分析是一種結合液相色譜(LC)和質譜(MS)技術的高效分析方法,用于jīngquè檢測樣品中氨基酸的種類和含量。LC-MS氨基酸分析結合了液相色譜和質譜的優(yōu)點,液相色譜的主要作用是將樣品中的復雜成分進行分離而質譜則負責對分離后的成分進行檢測與定量。這兩種技術的結合使得LC-MS氨基酸分析具有jígāo的靈敏度、分辨率和多樣性,能夠分析復雜樣品中的氨基酸尤其是在樣品中氨基酸濃度較低的情況下表現(xiàn)出yōuyuè的性能。液相色譜(LC)首先將樣品中的氨基酸組分根據(jù)其物理化學性質(如極性、分子大?。┻M行分離。常見的色譜柱包括反相色譜柱和親水相互作用色譜柱,分離過程通常涉及樣品通過色譜柱并與固定相發(fā)生相互作用的過程,氨基酸分子根據(jù)其化學特性在柱中以不同的速度流動,從而實現(xiàn)分離。質譜(MS)技術則基于電離原理,通過施加高電壓將氨基酸分子轉化為帶電離子(通常是正離子)。這些帶電離子在質譜分析儀中根據(jù)其質荷比(m/z)進行分析。通過這種方式,質譜能夠jīngquè測定氨基酸的分子質量,從而為定性分析提供信息。同時,質譜的靈敏度和分辨率jígāo,使得它能夠檢測復雜生物樣品中的低濃度氨基酸。作為一種高度敏感和高分辨率的技術,LC-MS氨基酸分析被廣泛應用于生物學、醫(yī)學、藥物開發(fā)及食品科學等領域。研究人員能夠快速、準確地獲取氨基酸的定性和定量數(shù)據(jù),從而深入了解氨基酸在生物體內的作用機制、代謝途徑以及與疾病的關系。
一、LC-MS氨基酸分析的關鍵步驟
LC-MS氨基酸分析通常包括樣品前處理、色譜分離、質譜檢測以及數(shù)據(jù)分析四個關鍵步驟。
1、樣品前處理
樣品前處理是氨基酸分析中的一步,常見的前處理方法包括dànbáizhì水解、過濾、濃縮以及去除干擾物質等。在氨基酸分析中,通常需要使用酸性或酶水解方法將樣品中的dànbáizhì分解為氨基酸,這樣可以提高分析的靈敏度和準確性。前處理的質量直接影響到分析結果的可靠性,因此合理的前處理方法至關重要。
2、色譜分離
色譜分離是LC-MS氨基酸分析中的關鍵步驟,常見的液相色譜技術包括反相液相色譜(RP-LC)、離子交換色譜(IEC)以及親水相互作用色譜(HILIC)。在色譜柱中,氨基酸分子會與固定相發(fā)生相互作用并根據(jù)其極性、分子量和電荷等特性進行分離。通過選擇適當?shù)纳V條件,分析人員可以獲得不同氨基酸組分的分離效果進而提高分析的jīngquè性。
3、質譜檢測
在液相色譜將氨基酸分離后,進入質譜儀進行分析。質譜通過將氨基酸分子電離為帶電粒子并根據(jù)質荷比(m/z)進行分離,從而獲取每個氨基酸的jīngquè質量和結構信息。質譜分析能夠識別不同氨基酸的特征峰并通過比對標準數(shù)據(jù)來進行定性分析,同時通過定量峰的強度,研究人員能夠確定樣品中氨基酸的含量。
4、數(shù)據(jù)分析
LC-MS氨基酸分析的zuì后一步是數(shù)據(jù)分析,通過對質譜數(shù)據(jù)的處理和分析,研究人員可以得到氨基酸的定性和定量結果。常見的分析方法包括使用標準曲線法進行定量或者使用內部標準法來提高分析的準確性。在復雜樣品中,數(shù)據(jù)處理軟件能夠自動識別并定量不同氨基酸的含量,顯著提高分析效率。
二、LC-MS氨基酸分析的優(yōu)勢與挑戰(zhàn)
LC-MS氨基酸分析相比傳統(tǒng)的氨基酸分析方法(如氨基酸分析儀)具有多個明顯的優(yōu)勢。首先,LC-MS氨基酸分析具有jígāo的靈敏度,能夠檢測到極低濃度的氨基酸成分。其次,LC-MS技術能夠同時分析多種氨基酸,具有較高的通量,適用于復雜樣品的批量分析。此外,質譜具有jígāo的分辨率和選擇性,能夠有效避免氨基酸同分異構體之間的干擾,從而確保分析結果的準確性。
LC-MS氨基酸分析也存在一些挑戰(zhàn)。首先,LC-MS系統(tǒng)相對昂貴,需要一定的設備投資和技術維護。其次,氨基酸的分離和質譜分析需要高水平的操作技能和經驗,確保每個步驟都能jīngquè執(zhí)行。zuì后,由于氨基酸在生物體內的濃度變化較大,因此在實際應用中需要進行適當?shù)臉悠奉A處理和標準化,以提高數(shù)據(jù)的可比性。
百泰派克生物科技提供zhuānyè的氨基酸分析服務,我們采用zuì先進的質譜技術和液相色譜技術,能夠jīngquè分析不同類型的氨基酸,滿足從基礎科研到臨床診斷的各種需求。
百泰派克生物科技使用Thermo公司新推出的Obitrap Fusion Lumos質譜儀及島津公司埃德曼降解測序系統(tǒng)對dànbáizhì序列進行分析,提供基于質譜的蛋白測序分析服務,包括對dànbáizhì的氨基酸組成分析,Nduāncèxù,Cduāncèxù和全序列分析,以及基于埃德曼降解的dànbáizhìN端序列分析服務。對于未知理論序列的dànbáizhì,提供基于從頭測序法的dànbáizhì從頭測序服務,對蛋白序列進行分析。
※服務優(yōu)勢:
1.采用目前世界上先進的質譜儀器 Obitrap Fusion Lumos;
2.可實現(xiàn)對所測定靶蛋白序列 100% 的覆蓋;
3.可測定蛋白N端多達 70個氨基酸序列;
4.可測定多種形式的樣品: 蛋白溶液、PVDF 蛋白條帶;
5.樣品用量低: 蛋白樣品僅需 5-10ug,即可完成檢測;
6.測序不受N端封閉,PEC和和糖基化等N端修飾的影響。
百泰派克生物科技采用Thermo Fisher的Orbitrap Fusion Lumos質譜平臺結合Nano-LC,提供定量dànbáizhì組學、靶向dànbáizhì組學、多肽組學、翻譯后修飾蛋白組學等多種dànbáizhì組學分析服務。此外,百泰派克生物科技新推出基于timsTOF Pro的4Ddànbáizhì組學服務,助力微量樣本蛋白組學、大樣本群醫(yī)學及高通量修飾組學等研究工作。
※服務優(yōu)勢:
1 .高通量定量蛋白分析:多對照組大規(guī)模實驗分析,發(fā)現(xiàn)新的生物標記物;
2.體內體外多種dànbáizhì標記方法,適用于分析組織、細胞、血液等多種樣品;
3.質譜分析靈敏度高,實驗結果重復度高;
4.可檢測較低豐度蛋白,線性范圍廣;
5.zhuānyè生物信息學分析,分析更系統(tǒng)準確。
百泰派克生物科技采用Fluidigm質譜流式系統(tǒng)進行單細胞質譜流式技術分析,采用金屬元素標記物(通常是金屬元素標記的特異抗體)標記細胞表面和內部的分子,然后用流式細胞原理分離單個細胞,再用電感耦合等離子體質譜(ICP-MS)分析單個細胞的原子質量譜,zuì后將原子質量譜數(shù)據(jù)轉換為細胞表面和內部的信號分子表達量。
※服務優(yōu)勢:
1.技術先進,填補技術空白
采用金屬標記抗體技術,避免了傳統(tǒng)流式熒光通道少且易相互影響的問題??稍趩渭毎麑用嫔蠈Χ喾N指標同時進行表征,百泰派克生物科技可做到同時檢測51個目標蛋白。
2.分析數(shù)量大,成本較低
單細胞RNAseq受成本等因素限制,所有樣本細胞匯總的分析數(shù)目一般在2x10^4個左右,而流式質譜技術一次(單樣本)就可分析至少10^5的細胞,實現(xiàn)了數(shù)量級的提高,且成本不高于單細胞RNAseq。
3.應用前景大
①流式質譜結果可以給出細胞亞群的變化,在臨床診斷、疾病機制研究等方面具有極大的研究前景;
②將金屬標簽技術與其他技術結合會有新應用方向。除常規(guī)蛋白外,質譜流式細胞技術還可用于蛋白翻譯后修飾;
③可檢測細胞存活率、細胞大小、mRNA轉錄子表達量、DNA合成速率以及蛋白酶活性等。
百泰派克生物科技的基于高精度質譜的免疫多肽組學分析及新抗原發(fā)現(xiàn)一站式解決方案包括我們專有的、高度敏感的免疫肽富集和鑒定方案。我們能夠幫助您實現(xiàn)10,000個以上I型多肽和10,000個以上II型多肽的鑒定和識別。通過我們優(yōu)化的高通量免疫多肽組學分析平臺進行免疫肽組學分析,可從zuì小的樣品材料中進行可重復的識別和定量。該服務可以應用于大規(guī)模的研究,旨在助力科研工作者尋找癌癥、免疫疾病及傳染病的解決方案,深入挖掘未知的靶標。
百泰派克基于高分辨率質譜技術,MALDI TOF,高效色譜分離技術,提供一系列完善的生物藥物分析方案,從dànbáizhì、多肽、抗體、疫苗等生物制品的氨基酸組成和一級結構分析,到產品變異性和純度分析。旨在提供優(yōu)質生物藥物分析服務,幫助生物醫(yī)藥生產商提高生物藥物品質。
北京百泰派克生物科技有限公司致力于為生物/制藥和醫(yī)療器械行業(yè)提供質量控制檢測和項目驗證等zhuānyè服務。公司實驗室遵循NMPA、ICH、FDA和EMA等的法規(guī)和指導原則,通過CNAS/ISO9001雙重質量體系認證,建立了完備的質量體系,數(shù)據(jù)冷熱/異地備份,設備定期計量/期間核查,軟件審計追蹤,為客戶提供一體化解決方案和技術服務,支持新藥研發(fā)、藥物申報注冊和生產放行。
1.公司采用ISO9001質量控制體系,zhuānyè提供以質譜為基礎的CRO檢測分析服務;
2.獲國家CNAS實驗室認可,為客戶提供符合全球藥政法規(guī)的藥物質量研究服務;
3.業(yè)務范圍覆蓋dànbáizhì組學、多肽組學、代謝組學、生物藥物表征、單細胞分析、單細胞質譜流式、生信云分析以及多組學生物質譜整合分析等;
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