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上海達(dá)為科生物科技有限公司
中級(jí)會(huì)員 | 第6年
肝纖維化動(dòng)物模型的其他造模方法2022/06/03
肝纖維化動(dòng)物模型化學(xué)性損傷法:雄性Wistar大鼠,體重130g左右,用硫代乙酰胺腹腔內(nèi)注射,第1次20mg/100g體重,從第二次起12mg/100g體重,每周注射2次,共8周。評(píng)價(jià):第3周,在肝小葉間中間帶出現(xiàn)大片的肝細(xì)胞變性壞死和炎細(xì)胞浸潤,炎細(xì)胞浸潤、壞死細(xì)胞數(shù)和程度超過豬血清模型。6周后出現(xiàn)增生纖維束,纖維增生晚于和少于豬血清模型。大鼠肝纖維組織中有I型膠原的mRNA增多。肝纖維化動(dòng)物模型四氯化碳法:180~200gWistar或SD大鼠,皮下注射40%-50%CCl4,油溶液(0.3
大鼠肺缺血再灌注模型2022/06/03
肺缺血再灌注損傷是由于機(jī)體組織或器官在缺血再灌注后導(dǎo)致肺組織迅速損傷。缺血再灌注可能發(fā)生在肺,也可能是下肢或腹主動(dòng)脈等,導(dǎo)致肺泡上皮細(xì)胞和肺毛細(xì)胞血管內(nèi)皮細(xì)胞受損。究其原因可能與組織炎癥細(xì)胞聚集、氧自由基產(chǎn)生和促炎因子釋放等病理生理反應(yīng)有關(guān)。結(jié)扎法制備肺缺血再灌注損傷模型多,因其操作簡(jiǎn)單、成功率高、實(shí)用性強(qiáng),是研究肺缺血再灌注損傷發(fā)病機(jī)制和防治保護(hù)的關(guān)鍵。制備肺缺血再灌注模型我們選用適齡的SD大鼠,通過結(jié)扎手術(shù)進(jìn)行造模。
動(dòng)物實(shí)驗(yàn)檢測(cè)水迷宮實(shí)驗(yàn)?zāi)康氖鞘裁?/a>2022/06/03
動(dòng)物實(shí)驗(yàn)檢測(cè)水迷宮實(shí)驗(yàn)?zāi)康氖鞘裁丛卺t(yī)學(xué)界,動(dòng)物實(shí)驗(yàn)檢測(cè)的目的就是要通過對(duì)動(dòng)物本身生命現(xiàn)象的研究,進(jìn)而推用到人類,探索人類的生命奧秘,控制人類的疾病和衰老,延長人類的壽命。而水迷宮實(shí)驗(yàn)是一種強(qiáng)迫實(shí)驗(yàn)動(dòng)物(大鼠、小鼠)游泳,學(xué)習(xí)尋找隱藏在水中平臺(tái)的一種實(shí)驗(yàn),主要用于測(cè)試實(shí)驗(yàn)動(dòng)物對(duì)空間位置感和方向感(空間定位)的學(xué)習(xí)記憶能力。應(yīng)用于學(xué)習(xí)記憶、老年癡呆、海馬/外海馬研究、智力與衰老、新藥開發(fā)/篩選/評(píng)價(jià)、藥理學(xué)、毒理學(xué)、預(yù)防醫(yī)學(xué)、神經(jīng)生物學(xué)、動(dòng)物心理學(xué)及行為生物學(xué)等多個(gè)學(xué)科的科學(xué)研究和計(jì)算機(jī)輔助教學(xué)等領(lǐng)
特殊染色技術(shù)2022/05/23
病理組織切片染色技術(shù)作為病理實(shí)驗(yàn)室基本方法之一,具有較高的使用價(jià)值,也是目前臨床外科病理基本、常見的形態(tài)學(xué)檢驗(yàn)技術(shù)。組織切片染色就是利用染料在組織切片上給予不同顏色,使其與組織或者細(xì)胞內(nèi)的某種成分發(fā)生作用,經(jīng)過透明后通過光譜吸收和折射,使其各種微細(xì)結(jié)構(gòu)能顯現(xiàn)不同顏色,這樣在顯微鏡下就可顯示出組織細(xì)胞的各種成分。常見的組織染色是HE染色,另外睦科生物還可開展其他特殊染色項(xiàng)目,如masson染色、PAS染色、AB-PAS染色、EVG染色、VG染色、維多利亞藍(lán)染色、番紅-固綠染色、甲苯胺藍(lán)染色、油紅O
細(xì)胞增殖及活性檢測(cè)技術(shù)2022/05/23
細(xì)胞增殖是指細(xì)胞在周期調(diào)控因子的作用下,通過DNA復(fù)制、RNA轉(zhuǎn)錄和蛋白質(zhì)合成等復(fù)雜反應(yīng)而進(jìn)行的分裂系列過程。其中核DNA的復(fù)制倍增是整個(gè)過程的重要特征。細(xì)胞增殖檢測(cè)技術(shù)廣泛應(yīng)用于分子生物學(xué)遺傳學(xué)腫瘤生物學(xué)免疫學(xué)藥理和藥代動(dòng)力學(xué)等研究領(lǐng)域。檢測(cè)細(xì)胞存活與增殖的方法主要包括觀察DNA合成含量和檢測(cè)細(xì)胞代謝活性兩種,前者主要有Brdu、EDU檢測(cè)等,后者主要有MTT、CCK8等檢測(cè),客戶可根據(jù)處理藥物數(shù)量等因素選擇合適的檢測(cè)方法。
血管形成實(shí)驗(yàn)技術(shù)2022/05/23
血管形成體外模型可分為細(xì)胞水平的增殖實(shí)驗(yàn)、遷移實(shí)驗(yàn)和管腔形成實(shí)驗(yàn),以及器官水平的人胎盤血管段培養(yǎng)模型和大鼠動(dòng)脈環(huán)模型。目前通常所說的血管形成實(shí)驗(yàn)是指管腔形成實(shí)驗(yàn)。管腔形成反映毛細(xì)血管的早期過程,是體外檢查內(nèi)皮細(xì)胞功能最完整的指標(biāo)。血管形成過程中內(nèi)皮細(xì)胞會(huì)形成細(xì)胞條索,然后形成管腔,體外在特定條件下如基質(zhì)膠、膠原等培養(yǎng)時(shí)也能形成管腔。藥物通過抑制管腔形成或使形成的管腔斷裂來達(dá)到抑制血管形成的作用。借助計(jì)算機(jī)軟件計(jì)算小管數(shù)及小管之間的連接數(shù)及小管的長度和面積,可定量分析藥物對(duì)管腔形成的影響。
雙熒光素技術(shù)2022/05/23
熒光素酶報(bào)告基因系統(tǒng)是以熒光素(luciferin)為底物來檢測(cè)熒光素酶活性的一種報(bào)告系統(tǒng)。熒光素酶可以催化luciferin氧化成oxyluciferin,在luciferin氧化的過程中,會(huì)發(fā)出生物熒光(bioluminescence)。然后可以通過熒光測(cè)定儀(化學(xué)發(fā)光儀)測(cè)定luciferin氧化過程中釋放的生物熒光。熒光素和熒光素酶這一生物發(fā)光體系,可以極其靈敏、高效地檢測(cè)基因的表達(dá)。雙熒光素酶體系,即有兩種熒光素酶,比較常見的組合是螢火蟲熒光素酶和海腎熒光素酶,螢火蟲熒光素酶作用于甲蟲
細(xì)胞凋亡誘導(dǎo)技術(shù)2022/05/19
【實(shí)驗(yàn)方法與步驟】(1)細(xì)胞凋亡的誘導(dǎo):HeLa細(xì)胞常規(guī)傳代培養(yǎng)至對(duì)數(shù)生長期(見細(xì)胞傳代培養(yǎng))。實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞加入順鉑溶液(生理鹽水配置)至終濃度為20μmo1/L,37℃,5%CO2條件下繼續(xù)培養(yǎng)??瞻讓?shí)驗(yàn)對(duì)照加入等體積的生理鹽水,同樣條件繼續(xù)培養(yǎng)。24h后進(jìn)行染色及形態(tài)學(xué)觀察。(2)胰酶消化細(xì)胞,將培養(yǎng)基上清及消化下來的細(xì)胞一同轉(zhuǎn)入離心管中600~800r/min離心10min。(3)吸去上清,用1mLPBS重懸細(xì)胞沉淀,并轉(zhuǎn)入1.5mL微量離心管中,600~800r/min離心10min。(4
Transwell實(shí)驗(yàn)技術(shù)2022/05/19
微孔濾膜培養(yǎng)小室及雙室聯(lián)合培養(yǎng)系統(tǒng)(Transwell實(shí)驗(yàn)):應(yīng)用微孔濾膜培養(yǎng)小室,進(jìn)行膠質(zhì)瘤細(xì)胞與內(nèi)皮細(xì)胞的聯(lián)合培養(yǎng),可以更接近體內(nèi)環(huán)境,模擬瘤細(xì)胞對(duì)血管內(nèi)皮細(xì)胞的作用,濾膜上8μm的微孔可允許內(nèi)皮細(xì)胞穿過到達(dá)膜的下面,這些穿越遷移的內(nèi)皮細(xì)胞可粘附于膜的下面,通過計(jì)數(shù)濾膜下面的細(xì)胞可基本反映細(xì)胞的遷移情況。Transwell的基本原理是將Transwell小室放入培養(yǎng)板中,小室內(nèi)稱為上室,培養(yǎng)板內(nèi)稱為下室,上室內(nèi)添加上層培養(yǎng)液,下室內(nèi)添加下層培養(yǎng)液,上下層培養(yǎng)液以膜相隔。將細(xì)胞種在上室內(nèi),由于
活力染色技術(shù)2022/05/19
一、實(shí)驗(yàn)原理各種細(xì)胞操作,包括傳代、凍存和原代組織的分離,均能導(dǎo)致細(xì)胞死亡。為了確定群體細(xì)胞中的存活細(xì)胞數(shù),可采用臺(tái)盼藍(lán)染料排斥實(shí)驗(yàn)(Phillips1973)。正常的健康細(xì)胞能排斥染料,但細(xì)胞膜完整性喪失后臺(tái)盼藍(lán)可彌散入細(xì)胞內(nèi)。染料排斥實(shí)驗(yàn)是一種粗糙的估計(jì)細(xì)胞活力的方法,無法區(qū)別10%~20%的活力差異。除此之外,排斥染料的細(xì)胞有可能不貼壁或不能較長時(shí)問生存或繁殖。二、實(shí)驗(yàn)方法1)胰蛋白酶處理細(xì)胞,無菌狀態(tài)下取0.5ml細(xì)胞用PBS稀釋至每毫升2X105~4X105。2)向另一管中無菌加人0.
細(xì)胞轉(zhuǎn)染技術(shù)2022/05/19
一、細(xì)胞轉(zhuǎn)染細(xì)胞轉(zhuǎn)染是指將外源分子如DNA,RNA等導(dǎo)入真核細(xì)胞的技術(shù)。常規(guī)轉(zhuǎn)染技術(shù)可分為瞬時(shí)轉(zhuǎn)染和穩(wěn)定轉(zhuǎn)染兩大類。本實(shí)驗(yàn)室主要是質(zhì)粒轉(zhuǎn)染、miRcroRNA轉(zhuǎn)染、慢病毒轉(zhuǎn)染、藥物轉(zhuǎn)染、多肽轉(zhuǎn)染等。二、miRcroRNA轉(zhuǎn)染(一)實(shí)驗(yàn)材料及試劑六孔板、CO2培養(yǎng)箱、EP管、酒精燈等;無血清培養(yǎng)基、MEM-α或DMEM、RNA、lipofectamine2000、MSC細(xì)胞等。(二)實(shí)驗(yàn)內(nèi)容1當(dāng)六孔板中MSC細(xì)胞密度達(dá)90%時(shí),準(zhǔn)備轉(zhuǎn)染,將無血清培養(yǎng)基、MEM-α或DMEM取出復(fù)溫并注意平衡好;2
流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)細(xì)胞周期2022/05/19
流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)細(xì)胞周期1。實(shí)驗(yàn)原理用流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞周期,通常用碘化丙啶(propidiumiodide,PI)染細(xì)胞核。PI在一定波長的光下發(fā)出熒光,其強(qiáng)度與DNA含量成正比。通過流式細(xì)胞儀分析各時(shí)期的細(xì)胞百分?jǐn)?shù),可檢測(cè)細(xì)胞的增殖、凋亡。2。流式細(xì)胞儀檢測(cè)A549細(xì)胞周期步驟收集對(duì)數(shù)生長期細(xì)胞,計(jì)數(shù),以(1~5)×105/孔接種于6孔板,置37℃,5%CO2條件下培養(yǎng)過夜,使細(xì)胞貼壁。次日更換培養(yǎng)液,各孔分別加入含有0、80、400、2000、10000mg/L不同濃度茶氨酸的細(xì)胞培養(yǎng)液2m
人胃癌高轉(zhuǎn)移模型2022/05/16
人胃癌高轉(zhuǎn)移模型的建立可以:(1)研究腫瘤轉(zhuǎn)移機(jī)制;(2)研究腫瘤防治;(3)為腫瘤轉(zhuǎn)移研究提供更為理想的動(dòng)物模型。腫瘤組織塊原位移植法實(shí)驗(yàn)方法原理用人胃癌組織塊SGC-7901原位移植于SCID小鼠,第4周末移植瘤向淋巴結(jié)和肝臟等器官轉(zhuǎn)移,轉(zhuǎn)移率達(dá)66.7%(2/3),第6周末轉(zhuǎn)移率高達(dá)*(10/10)。實(shí)驗(yàn)材料雄性SPF級(jí)SCID小鼠人胃癌組織SGC-7901試劑、試劑盒水合氯醛福爾馬林液儀器、耗材飼養(yǎng)籠光學(xué)顯微鏡石蠟實(shí)驗(yàn)步驟一、實(shí)驗(yàn)材料準(zhǔn)備1.雄性SPF級(jí)SCID小鼠,6~7周齡,體重20
一般慢性炎癥的基本病理變化2022/05/14
1、炎癥灶內(nèi)主要是巨噬細(xì)胞、淋巴細(xì)胞和漿細(xì)胞浸潤。單核吞噬細(xì)胞的浸潤對(duì)慢性炎癥十分重要。單核細(xì)胞從血管游出后轉(zhuǎn)化為巨噬細(xì)胞。巨噬細(xì)胞還可被激活。在炎癥灶局部巨噬細(xì)胞的積聚有三方面的原因:①由于從炎癥灶不斷產(chǎn)生吸引單核細(xì)胞的趨化因子,如C5a、纖維蛋白多肽、陽離子蛋白質(zhì)及膠原和纖維粘連蛋白的分解產(chǎn)物等。因此,從血液循環(huán)中滲出的單核細(xì)胞源源不斷來到局部,這是局部巨噬細(xì)胞的主要來源。②游出的巨噬細(xì)胞在局部通過有絲分裂而增殖,但巨噬細(xì)胞局部增殖的起始動(dòng)因還不清楚。③炎癥灶內(nèi)的巨噬細(xì)胞壽命長,并能長期停留
激光掃描共聚焦顯微鏡操作步驟及注意事項(xiàng)2022/05/14
激光掃描共聚焦顯微鏡可測(cè)定的樣品種類很多.包括生物材料、組織(切片)、細(xì)胞(亞細(xì)胞)結(jié)構(gòu)等。樣品中熒光的來源主要有如下幾種:自發(fā)熒光(autofluorescence)、熒光染色、免疫熒光、熒光蛋白、誘發(fā)熒光(inducedfluorescence)及酶致熒光(enzymaticallyproducedfluorescence)等等。其中大部分熒光素的激發(fā)和發(fā)射波長均可在儀器自帶軟件的染料信息庫中找到。1.觀察步驟及儀器操作根據(jù)實(shí)驗(yàn)要求制備樣品完畢后。即可進(jìn)行觀察?;静襟E如下:(1)開啟儀器電
人非小細(xì)胞肺癌裸鼠原位種植轉(zhuǎn)移模型的建立實(shí)驗(yàn)2022/05/14
人非小細(xì)胞肺癌裸鼠原位種植轉(zhuǎn)移模型的建立:(1)探討肺癌遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移和阻斷其遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移的研究;(2)模擬晚期非小細(xì)胞肺癌轉(zhuǎn)移的自然發(fā)生過程;(3)在活體動(dòng)物的完整器官內(nèi)評(píng)估瘤細(xì)胞播散和腫瘤的生長。實(shí)驗(yàn)方法原理將表達(dá)GFP的質(zhì)粒pRNAT-U6/Neo轉(zhuǎn)染人肺腺癌細(xì)胞A549,G418篩選獲得穩(wěn)定表達(dá)GFP細(xì)胞,對(duì)比轉(zhuǎn)染前后細(xì)胞的生長活性和成瘤性。將轉(zhuǎn)染后細(xì)胞原位種植裸鼠預(yù)定標(biāo)準(zhǔn)處死。HE染色和免疫組化檢測(cè)轉(zhuǎn)移灶的位置和數(shù)目。利用KODAKIS2000MM系統(tǒng)檢測(cè)腫瘤播散情況。實(shí)驗(yàn)材料BALBcnunu
人胰腺癌裸小鼠模型2022/05/14
人胰腺癌裸小鼠模型實(shí)驗(yàn)方法原理將人胰腺癌細(xì)胞株8988接種于裸鼠腋窩處皮下,每周測(cè)量腫瘤大小,第42d處死小鼠。腫瘤組織及相關(guān)臟器送病理及電鏡檢查,放射免疫法檢測(cè)相關(guān)抗原。皮下腫瘤組織細(xì)胞及細(xì)胞株培養(yǎng),HE染色。實(shí)驗(yàn)材料裸小鼠BALBcnu-nu胰腺癌細(xì)胞株8988試劑、試劑盒RPMI-1640*培養(yǎng)基胰酶戊二醛儀器、耗材CO2培養(yǎng)箱試管實(shí)驗(yàn)步驟一、實(shí)驗(yàn)材料準(zhǔn)備裸小鼠BALB/cnu-nu,4~6周齡,體重16~20g,雌雄兼?zhèn)?,SPF級(jí)環(huán)境中飼養(yǎng),恒溫25~27℃,恒濕45%~50%,飲用水及
懸浮細(xì)胞的免疫熒光標(biāo)記實(shí)驗(yàn)2022/05/07
免疫熒光標(biāo)記技術(shù)(immunofluorescencetechnique)是將已知的抗體或抗原分子標(biāo)記上熒光素,當(dāng)與其相對(duì)應(yīng)的抗原或抗體起反應(yīng)時(shí),在形成的復(fù)合物上就帶有一定量的熒光素,在熒光顯微鏡下就可以看見發(fā)出熒光的抗原抗體結(jié)合部位,檢測(cè)出抗原或抗體。實(shí)驗(yàn)材料懸浮細(xì)胞試劑、試劑盒多聚-L-賴氨酸儀器、耗材離心機(jī)培養(yǎng)箱實(shí)驗(yàn)步驟1.細(xì)胞在冰浴中冷卻,然后用臺(tái)式離心機(jī)于4℃以800g離心5min,吸去培養(yǎng)液并以4℃PBS重懸細(xì)胞。2.離心吸去PBS,以1~2ml2%PFA固定液,或2%PFA固定液/
成年小鼠的灌流實(shí)驗(yàn)2022/04/30
進(jìn)行實(shí)驗(yàn)動(dòng)物灌流是獲得良好的形態(tài)學(xué)觀察結(jié)果以及保存腦、腎、心臟和其他許多器官所必需的。對(duì)于未經(jīng)訓(xùn)練的實(shí)驗(yàn)人員,初次進(jìn)行灌流可能會(huì)失敗,故建議首先用一些對(duì)照實(shí)驗(yàn)動(dòng)物練習(xí),以熟悉此過程?;痉桨笇?shí)驗(yàn)材料小鼠試劑、試劑盒PBS儀器、耗材23-G針頭注射管解剖器械實(shí)驗(yàn)步驟1.一支針管吸滿1×PBS,另一支吸4%PFA固定液(4℃),擱置待用。2.在袋中用CO2氣體處死小鼠。停止吸呼后,立刻背朝下放平小鼠,小心剖開胸腔防止過多出血,小心并迅速切開肋骨,剪去橫隔膜,暴露心臟。3.小心將吸有1×PBS的針管刺
實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的取血標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程(SOP)2022/04/30
名稱:實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的取血關(guān)鍵詞:動(dòng)物,取血,方法目的:規(guī)范實(shí)驗(yàn)動(dòng)物(家兔、狗,豚鼠)取血的方法和途徑,主體內(nèi)容:(一)家兔1.耳緣靜脈取血法選好耳緣靜脈,拔去被毛,用二甲苯或酒精涂擦局部,小血管夾夾緊耳根部,使血管充血擴(kuò)張。術(shù)者持粗針頭從耳尖部血管,逆回流方向刺入靜脈內(nèi)取血,或用刀片切開靜脈,血液自動(dòng)流出,取血后棉球壓迫止血,取血量2~3ml。壓住側(cè)支靜脈,血液更容易流出;取血前耳緣部涂擦液體石蠟,可防止血液凝固。2.耳中央動(dòng)脈取血法家兔固定箱內(nèi),用手揉擦耳部,使中央動(dòng)脈擴(kuò)張。左手固定兔耳,右手持注
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