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束縛應激引起的抑郁模型2022/03/04

動物雄性成年C57BL/6小鼠（8-16周齡；體重約20g）；造模在50ml塑料管上開幾個孔以保持氣流，將動物置于這樣的塑料管中，從而使動物暴露于慢性束縛應激中。實驗從上午11:00開始，每天4-8小時，整個過程持續(xù)14天，而對照組則在同一時間無束縛地剝奪食物和水。在慢性束縛的最后一天測量每只小鼠的體重。模型評估1.蔗糖偏好試驗小鼠單獨飼養(yǎng)，無任何應激條件下，給予1%蔗糖溶液和水2天；1%蔗糖溶液和水的瓶子位置在24小時切換。之后，小鼠被剝奪食物和水12小時；在黑暗環(huán)境下，同時暴露于1%蔗糖溶液

大黃酸對大鼠創(chuàng)傷性腦損傷的抗氧化作用與大黃相似2022/02/25

背景：顱腦外傷（TBI）是世界范圍內(nèi)威脅生命的疾病。大多數(shù)中國人由于運動受傷，辦公室或家中意外摔倒以及摩托車受傷而患有TBI。由于社會對疾病的了解不多，因此TBI被稱為“沉默流行病”。TBI后繼發(fā)性腦損傷引起病理，生理和生物學反應，導致腦功能障礙。生物和化學過程通常觸發(fā)連鎖反應，可導致炎癥細胞，能量缺乏，興奮性毒性，細胞凋亡和氧化應激。氧化應激在上述過程中起重要作用。氧化會增強炎癥和其他反應，因此促進炎癥和其他反應會加劇氧化應激并形成惡性循環(huán)。氧化應激在TBI后一小時發(fā)生，并立即成為病理反應。因

低氧預處理對大鼠子宮內(nèi)膜異位病灶形成的影響2022/02/25

目的：理解低氧預處置對子宮內(nèi)膜異位癥大鼠模型異位病灶構(gòu)成的影響，藉此進一步說明EMs發(fā)作開展的分子機制，從而為其防治供新思緒。辦法：Lewis雌性大鼠隨機分為兩組，分別給予HPC（8%O2）和常壓常氧（21%O2）處置8h，隨即取其子宮組織移植至正常大鼠腹壁。術后14d記載移植灶體積，并采用ELISA、免疫組化、Westernblot、RT-PCR和Tunnel法，對血清和腹腔液以及移植前子宮組織和移植病灶停止檢測。結(jié)果：HPC可顯著上調(diào)大鼠子宮血管內(nèi)皮生長因子（VEGF）mRNA（P結(jié)論：HP

細胞技術及活力測定2022/02/18

一、原理培養(yǎng)的細胞在一般條件下要求有一定的密度才能生長良好，所以要進行細胞計數(shù)。計數(shù)結(jié)果以每毫升細胞數(shù)表示。細胞計數(shù)的原理和方法與血細胞計數(shù)相同。在細胞群體中總有一些因各種原因而死亡的細胞，總細胞中活細胞所占的百分比叫做細胞活力，由組織中分離細胞一般也要檢查活力，以了解分離的過程對細胞是否有損傷作用。復蘇后的細胞也要檢查活力，了解凍存和復蘇的效果。用臺盼蘭染細胞，死細胞著色，活細胞不著色，從而可以區(qū)分死細胞與活細胞。利用細胞內(nèi)某些酶與特定的試劑發(fā)生顯色反應，也可測定細胞相對數(shù)和相對活力。二、儀器

細胞劃痕實驗2022/02/18

材料：6孔板marker筆直尺20微升槍頭（滅菌）無血清培養(yǎng)基PBS準備：所有能滅菌的器械都要滅菌，直尺和marker筆在操作前紫外照射30min（超凈臺內(nèi)）流程：1、先用marker筆在6孔板背后，用直尺比著，均勻地劃橫線，大約每隔0.5~1cm一道，橫穿過孔。每孔至少穿過5條線。2、在空中加入約5X105個細胞，具體數(shù)量因細胞不同而不同，掌握為過夜能鋪滿。3、第二天用槍頭比著直尺，盡量垂直于背后的橫線劃痕，槍頭要垂直，不要傾斜。4、用PBS洗細胞3次，去除劃下的細胞，加入無血清培養(yǎng)基。5、放

初代細胞培養(yǎng)實驗2022/02/18

初代培養(yǎng)或原代培養(yǎng)，是從供體獲取組織后的培養(yǎng)。組織和細胞剛剛離體，生物性狀尚未發(fā)生很大的變化，具有二倍體遺傳性狀，在供體來源充分、生物條件穩(wěn)定的情況下（年齡、性別），在一定程度上能反映體內(nèi)狀態(tài)。實驗方法原理消化培養(yǎng)法合成培養(yǎng)基胰蛋白酶消化培養(yǎng)法，能把組織塊分散成細胞團或單個細胞，便于細胞從培養(yǎng)液中攝取營養(yǎng)和排出代謝產(chǎn)物，細胞能較快地長成單層。本法尤適用于培養(yǎng)大量組織，細胞產(chǎn)量高；但用于經(jīng)常性小量培養(yǎng)工作稍顯繁瑣，無菌操作不良時且易污染。實驗材料組織試劑、試劑盒Hanks培養(yǎng)液胰蛋白酶儀器、耗材吸

腦出血模型簡介2022/01/14

原理：腦實質(zhì)內(nèi)注射膠原酶，膠原酶破壞血管的基底層，導致滲漏血液流入周圍組織。動物：雄性SD大鼠，年齡10-12周，體重300-350g。麻醉期間，大鼠體溫維持在37度，體溫維持直到從麻醉狀態(tài)蘇醒，恢復正常運動為止。建模：大鼠麻醉，固定立體定位儀上，在頭皮上做1cm長的中線切口。用棉簽除去覆蓋在大鼠頭皮上的軟組織，確認顱骨上的Bregma點位置。右側(cè)鉆孔的位置：Bregma點前0.6mm，側(cè)面2.9mm，微量注射器進入基底節(jié)，深度距顱骨平面5.5mm。以0.1ul/min速度注射1ul七型膠原酶，

6-羥基多巴胺誘導的帕金森病模型簡介2022/01/14

藥品：6-OHDAHCl：16μg溶解在4μLACSF中。ACSF：0.15MNaCl,2.75mMKCl,1.2mMCaCl2,ａnd0.85mMMgCl2。動物：雄性Wistar大鼠，重量300-400g。建模：1.大鼠常規(guī)麻醉，然后固定在立體定位儀上。2.暴露大鼠顱骨，在右側(cè)內(nèi)側(cè)前腦束（medialforebrainbundle,MFB）上方鉆孔，孔的坐標:(AP),-1.9mm,(ML),-1.9mm,(DV),-7.2mm。3.0.5μL/min，注射4ul，為避免藥物回流，每次輸液完

關于細胞株的構(gòu)建，這些你可能需要了解一下2022/01/04

1，什么是瞬時轉(zhuǎn)染和穩(wěn)定轉(zhuǎn)染？瞬時轉(zhuǎn)染：外源片段的表達時間短暫。這主要是因為外源導入的裸露的載體整合入基因組的幾率非常低，所以以染色體外(episomal)形式存在，不能隨細胞分裂而一同復制導致最后拷貝數(shù)被稀釋導致的。而且考慮到細胞分裂會稀釋質(zhì)粒的量，所以起初轉(zhuǎn)染的質(zhì)?？截悢?shù)*。這就導致瞬時轉(zhuǎn)染呈現(xiàn)一個高拷貝到低拷貝迅速降低的過程，且無法在這個系統(tǒng)上實現(xiàn)可誘導表達。穩(wěn)定轉(zhuǎn)染：是相對瞬時轉(zhuǎn)染而言，進入細胞的質(zhì)粒整合入細胞基因組中，并能隨細胞分裂穩(wěn)定傳遞下去。在這個系統(tǒng)中，質(zhì)粒表達穩(wěn)定，拷貝數(shù)低，且

動物肢體缺血模型原理2021/12/31

肢體缺血動物模型是進行缺血損傷機制、血管新生等研究的基礎，成功制作一種效果確切、重復性強的肢體缺血模型是保證實驗研究能夠順利進行的關鍵。當前缺血性疾病患者日漸增多，以糖尿病肢體動脈閉塞癥（DAO）、閉塞性動脈硬化癥（ASO）和血栓閉塞性脈管炎（TAO）為主的下肢缺血性疾病發(fā)病率逐年增加。國外資料顯示，70歲以上老年人群中僅動脈硬化閉塞癥患病率即可達15%~20%。而患病人群范圍可覆蓋至青壯年，其高發(fā)生率和廣泛累及率已嚴重危害著人們的身心健康和生存質(zhì)量，亟待探索其發(fā)生機制、預防措施及治療方法。建立

腦定位建模步驟2021/12/31

藥品：6-OHDAHCl：16μg溶解在4μLACSF中。ACSF：0.15MNaCl,2.75mMKCl,1.2mMCaCl2,ａnd0.85mMMgCl2。動物：雄性Wistar大鼠，重量300-400g。建模：1.大鼠常規(guī)麻醉，然后固定在立體定位儀上。2.暴露大鼠顱骨，在右側(cè)內(nèi)側(cè)前腦束（medialforebrainbundle,MFB）上方鉆孔，孔的坐標:(AP),-1.9mm,(ML),-1.9mm,(DV),-7.2mm。3.0.5μL/min，注射4ul，為避免藥物回流，每次輸液完

肝纖維化動物模型的其他造模方法有哪些？2021/12/24

肝纖維化動物模型化學性損傷法：雄性Wistar大鼠，體重130g左右，用硫代乙酰胺腹腔內(nèi)注射，第1次20mg/100g體重，從第二次起12mg/100g體重，每周注射2次，共8周。評價:第3周，在肝小葉間中間帶出現(xiàn)大片的肝細胞變性壞死和炎細胞浸潤，炎細胞浸潤、壞死細胞數(shù)和程度超過豬血清模型。6周后出現(xiàn)增生纖維束，纖維增生晚于和少于豬血清模型。大鼠肝纖維組織中有I型膠原的mRNA增多。肝纖維化動物模型四氯化碳法：180～200gWistar或SD大鼠，皮下注射40%-50%CCl4，油溶液(0.3

水迷宮行為學檢測操作步驟2021/12/24

.將水迷宮加入適當?shù)乃?，水溫控制?5±1℃。2.實驗前把動物帶入實驗室中熟悉環(huán)境。3.設置軟件。4.第一階段：（定位航行）將小鼠頭對著墻壁依次放入四個象限水迷宮進行實驗（所有大鼠需全部做完后換下一象限）。若動物在60s內(nèi)登上平臺區(qū)域，則錄像結(jié)束。若動物在60s內(nèi)未登上平臺區(qū)域，則用木棍指引大鼠游上平臺，并停留30s。每只小鼠每天訓練4次，訓練天數(shù)為5天。5.每只動物實驗結(jié)束后需用干毛巾擦拭，必要時需要使用電吹風吹干。6.第二階段（空間探索）：待第一到第四象限全部做完后，將水迷宮中的平臺撤走，將

大鼠腦缺血再灌注損傷模型步驟2021/12/17

大鼠腦缺血再灌注損傷模型模型：麻醉大鼠，然后在頸部中線切開一個切口，暴露頸外動脈和頸內(nèi)動脈，用無菌縫合線結(jié)扎，血管夾夾住頸內(nèi)動脈。隨后在頸總動脈上切口，然后插入線栓。2h后，大鼠進行再灌注。模型大鼠成功構(gòu)建的標準：大鼠出現(xiàn)癥狀如偏癱，對側(cè)前肢下垂和站立不穩(wěn)。Bederson評分在1-3分，48小時內(nèi)沒有死亡，就認為模型成功。文獻上用的是2-3分的模型。優(yōu)點：無需開顱，創(chuàng)傷較小；缺血部位相對固定，可控性好；可實現(xiàn)腦缺血后再灌注，是理想的標準局灶性腦缺血動物模型。動物選擇：目前多選用SD大鼠?？紤]大

達為科實驗中心建模目錄2021/12/17

科研實驗優(yōu)勢：1.獨立實驗室和動物中心：實驗室面積600多平方米，動物中心1000平方米，公司目前具備較好的的生物學、醫(yī)學技術服務平臺，能夠為廣大客戶提供醫(yī)學科研樣本檢測、合作研究、開發(fā)及生產(chǎn)服務；2.專業(yè)的技術人員：技術團隊包括研究員（博士后）2人，助理研究員（博士）4人，核心研究員（碩士）15人；科研實驗介紹：1.基因組學：基因芯片、SNP檢測、DNA甲基化檢測、生物信息學分析2.轉(zhuǎn)錄組學：microRNA芯片、LncRNA芯片、表達譜芯片、RNA-seq3.蛋白質(zhì)組學：2D-DIGE、SI

淺析Masson染色的原理及染色步驟2021/12/03

染色原理：所謂三色染色通常是指染胞核和能選擇性的顯示膠原纖維和肌纖維。該法染色原理不陰離子染料分子的大小和組織的滲透有關：分子的大小由分子量來體現(xiàn)，小分子量易穿透結(jié)構(gòu)致密、滲透性低的組織；而大分子量則只能進入結(jié)構(gòu)疏松的、滲透性高的組織。然而，淡綠或苯胺藍的分子量都很大，因此Masson染色后肌纖維呈紅色，膠原纖維呈綠色(淡綠)或藍色(苯胺藍)，主要用于區(qū)分膠原纖維和肌纖維。Masson染色特點：1、染色穩(wěn)定2、分化時間短，1～2s3、色彩清晰鮮艷4、適用范圍廣，適宜于組織的石蠟切片、冰凍切片等染

PCR反應混合物的分子實驗檢測步驟介紹2021/12/03

進行分子實驗檢測時需要先準備PCR反應混合物：根據(jù)DNA樣本的數(shù)量來確定除了DNA外其他混合物的體積（額外增加一份來確保有足夠的PCR反應混合物），將擴增每一個遺傳標記并且在每一個PCR反應管內(nèi)分19.5uL的反應混合物。配制膠溶液：將25g尿素、7.5mL40%丙烯酰胺：PDA(19:1)加入到250mL的錐形瓶中。加蒸餾水至50mL，充分混勻來溶解尿素(見注釋4)。準備制膠板：把膠板洗干凈，確保上面沒有灰塵，用硅化玻璃板。根據(jù)各個廠家的不同把玻璃板夾在一起并且用膠條封住底部（這一過程根據(jù)設備

石蠟切片基本技術操作2021/11/26

石蠟切片(paraffinsection)組織學常規(guī)制片技術中最為廣泛應用的方法。不僅用于觀察正常細胞組織的形態(tài)結(jié)構(gòu)，也是病理學和法醫(yī)學等學科用以研究、觀察及判斷細胞組織的形態(tài)變化的主要方法，而且也已相當廣泛地用于其他許多學科領域的研究中。教學中，光鏡下觀察切片標本多數(shù)是石蠟切片法制備的?；畹募毎蚪M織多為無色透明，各種組織間和細胞內(nèi)各種結(jié)構(gòu)之間均缺乏反差，在一般光鏡下不易清楚區(qū)別出;組織離開機體后很快就會死亡和產(chǎn)生組壞死，失去原有正常結(jié)構(gòu)，因此，組織要經(jīng)固定、石蠟包埋、切片及染色等步驟以免細胞

胎鼠皮層神經(jīng)元原代培養(yǎng)2021/11/26

一、背景大腦皮層是調(diào)節(jié)軀體運動的高級中樞。它由初級感覺區(qū)、初級運動區(qū)和聯(lián)合區(qū)三部分構(gòu)成。人類大腦皮層的神經(jīng)細胞約有140億個，面積約2200平方厘米，主要含有錐體形細胞、梭形細胞和星形細胞（顆粒細胞）及神經(jīng)纖維。體外原代培養(yǎng)神經(jīng)元作為神經(jīng)科學研究的有力手段，越來越受到廣大科研工作者的重視。由于神經(jīng)元是一種高度分化的細胞，動物出生后很少分裂，相對于其它細胞而言，神經(jīng)元在體外更難以存活和生長。因此，體外培養(yǎng)神經(jīng)元要求的培養(yǎng)方法和營養(yǎng)條件均較為特殊。二、實驗步驟1.無菌條件下，從懷孕18天的SD大鼠腹

胎鼠皮層神經(jīng)元的原代培養(yǎng)2021/11/16

一、背景大腦皮層是調(diào)節(jié)軀體運動的高級中樞。它由初級感覺區(qū)、初級運動區(qū)和聯(lián)合區(qū)三部分構(gòu)成。人類大腦皮層的神經(jīng)細胞約有140億個，面積約2200平方厘米，主要含有錐體形細胞、梭形細胞和星形細胞（顆粒細胞）及神經(jīng)纖維。體外原代培養(yǎng)神經(jīng)元作為神經(jīng)科學研究的有力手段，越來越受到廣大科研工作者的重視。由于神經(jīng)元是一種高度分化的細胞，動物出生后很少分裂，相對于其它細胞而言，神經(jīng)元在體外更難以存活和生長。因此，體外培養(yǎng)神經(jīng)元要求的培養(yǎng)方法和營養(yǎng)條件均較為特殊。二、實驗步驟1.無菌條件下，從懷孕18天的SD大鼠腹