如何通過Edman降解實(shí)現(xiàn)高效蛋白質(zhì)序列分析？實(shí)驗(yàn)室指南檢測(cè)技術(shù)服務(wù)詳情介紹

Edman降解是一種經(jīng)典且高度特異的dànbáizhìN端序列分析技術(shù)，至今仍在結(jié)構(gòu)dànbáizhì組學(xué)、抗體工程與生物藥研發(fā)中扮演著重要角色。盡管高分辨率質(zhì)譜技術(shù)日新月異，Edman降解因其對(duì)N端氨基酸的逐步解析能力，在某些特定應(yīng)用場(chǎng)景中仍具有bùkětìdài的價(jià)值。本文將從實(shí)驗(yàn)原理、操作流程、樣本準(zhǔn)備、結(jié)果解析及常見問題出發(fā)，系統(tǒng)解析如何高效開展Edman降解實(shí)驗(yàn)，助力科研人員獲得可靠的dànbáizhì序列信息。

一、什么是Edman降解？

Edman降解由Pehr Edman于1950年提出，是一種通過周期性化學(xué)反應(yīng)從多肽N端逐個(gè)釋放氨基酸殘基并進(jìn)行鑒定的技術(shù)。它的核心在于利用酚異硫氰酸酯（PITC）與N端氨基酸反應(yīng)，形成可被裂解和分析的衍生物，從而實(shí)現(xiàn)序列的“逐步拆解"。與質(zhì)譜分析不同，Edman降解不依賴質(zhì)量電荷比（m/z），而是基于化學(xué)選擇性，因而在已知目標(biāo)蛋白并需要驗(yàn)證N端完整性、識(shí)別修飾或突變時(shí)尤為有效。

二、Edman降解的適用場(chǎng)景

雖然現(xiàn)代dànbáizhì組學(xué)多依賴質(zhì)譜，但Edman降解仍在以下情境中發(fā)揮著dútè優(yōu)勢(shì)：

• 重組蛋白或單克隆抗體的N端驗(yàn)證

• 蛋白修飾或截?cái)嗟蔫b定

• 用于驗(yàn)證質(zhì)譜推測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性

• 無法離子化或質(zhì)譜響應(yīng)弱的樣本

在百泰派克生物科技的實(shí)際項(xiàng)目中，我們常結(jié)合Edman降解與質(zhì)譜分析交叉驗(yàn)證dànbáizhì序列，提升結(jié)果的可靠性。

三、Edman降解的基本流程

1、樣本固定（Immobilization）

Edman降解通常要求樣品被固定在聚偏二氟乙烯（PVDF）膜或玻璃纖維片上，防止反應(yīng)中蛋白丟失。通常通過SDS-PAGE轉(zhuǎn)膜完成，需避免使用干擾化學(xué)物質(zhì)如Tween-20。

2、N端氨基酸衍生化

使用酚異硫氰酸酯（PITC）與N端氨基反應(yīng)，形成環(huán)狀PTH氨基酸衍生物。該反應(yīng)在堿性條件下進(jìn)行，對(duì)水敏感，因此對(duì)環(huán)境控制較為嚴(yán)格。

3、裂解與回收

加入無水酸使肽鏈裂解，釋放PTH氨基酸。該步驟需高效回收PTH產(chǎn)物以確保后續(xù)分析的靈敏度。

4、分析與鑒定

利用高效液相色譜（HPLC）或毛細(xì)管電泳分析PTH衍生物，通過保留時(shí)間匹配標(biāo)準(zhǔn)氨基酸來確認(rèn)N端序列。

四、實(shí)驗(yàn)成功的關(guān)鍵因素

為了獲得高質(zhì)量的序列數(shù)據(jù)，以下幾點(diǎn)尤為關(guān)鍵：

1、樣本純度

Edman降解對(duì)樣本純度要求jígāo?；祀s蛋白會(huì)導(dǎo)致多重信號(hào)干擾，影響序列判斷。

2、N端可接近性

如果N端被封閉（如乙?；?、修飾或信號(hào)肽未切除），將無法進(jìn)行Edman降解。預(yù)處理酶切或化學(xué)去修飾可能是必要步驟。

3、轉(zhuǎn)膜完整性

蛋白在電泳后轉(zhuǎn)膜過程中若發(fā)生降解或遷移失敗，亦會(huì)影響反應(yīng)效率。

4、每循環(huán)反應(yīng)效率

隨著反應(yīng)周期增加，降解效率會(huì)逐步下降。通常建議讀取qián10–20個(gè)氨基酸。

五、Edman降解 vs 質(zhì)譜：如何選擇？

建議策略： 若關(guān)注N端序列完整性或修飾，Edman降解是優(yōu)選方法；若需獲取整體序列或高通量分析，質(zhì)譜更具優(yōu)勢(shì)。在百泰派克生物科技，我們提供Edman降解與高分辨質(zhì)譜相結(jié)合的綜合dànbáizhì測(cè)序方案，為客戶定制zuì合適的策略。

在百泰派克，我們擁有：

• 自動(dòng)化Edman降解儀

• 標(biāo)準(zhǔn)化PVDF轉(zhuǎn)膜流程與樣本前處理體系

• 與高分辨質(zhì)譜聯(lián)合驗(yàn)證方案

• 支持科研項(xiàng)目申報(bào)的完整技術(shù)資料與報(bào)告交付

無論您是進(jìn)行單抗質(zhì)量驗(yàn)證、N端修飾檢測(cè)，還是為藥物申報(bào)準(zhǔn)備質(zhì)量研究數(shù)據(jù)，我們都可提供高靈敏、高可靠的dànbáizhì序列分析服務(wù)。

盡管Edman降解是一項(xiàng)“老牌技術(shù)"，但其在dànbáizhìN端序列解析領(lǐng)域仍具有dútè價(jià)值。尤其在結(jié)構(gòu)驗(yàn)證、生物制藥質(zhì)控和蛋白工程中，準(zhǔn)確的N端信息往往是不可忽視的關(guān)鍵。如果您正在尋找高效、jīngzhǔn、可驗(yàn)證的dànbáizhì序列分析服務(wù)，歡迎聯(lián)系百泰派克生物科技。我們不僅提供技術(shù)，更提供zhídexìnlài的數(shù)據(jù)支持與科研合作伙伴關(guān)系。

百泰派克生物科技特色項(xiàng)目

一、蛋白測(cè)序

百泰派克生物科技使用Thermo公司新推出的Obitrap Fusion Lumos質(zhì)譜儀及島津公司埃德曼降解測(cè)序系統(tǒng)對(duì)dànbáizhì序列進(jìn)行分析，提供基于質(zhì)譜的蛋白測(cè)序分析服務(wù)，包括對(duì)dànbáizhì的氨基酸組成分析，Nduāncèxù，Cduāncèxù和全序列分析，以及基于埃德曼降解的dànbáizhìN端序列分析服務(wù)。對(duì)于未知理論序列的dànbáizhì，提供基于從頭測(cè)序法的dànbáizhì從頭測(cè)序服務(wù)，對(duì)蛋白序列進(jìn)行分析。

※服務(wù)優(yōu)勢(shì)：

1.采用目前世界上先進(jìn)的質(zhì)譜儀器 Obitrap Fusion Lumos;

2.可實(shí)現(xiàn)對(duì)所測(cè)定靶蛋白序列 100% 的覆蓋;

3.可測(cè)定蛋白N端多達(dá) 70個(gè)氨基酸序列;

4.可測(cè)定多種形式的樣品: 蛋白溶液、PVDF 蛋白條帶;

5.樣品用量低: 蛋白樣品僅需 5-10ug，即可完成檢測(cè);

6.測(cè)序不受N端封閉，PEC和和糖基化等N端修飾的影響。

二、dànbáizhì組學(xué)

百泰派克生物科技采用Thermo Fisher的Orbitrap Fusion Lumos質(zhì)譜平臺(tái)結(jié)合Nano-LC，提供定量dànbáizhì組學(xué)、靶向dànbáizhì組學(xué)、多肽組學(xué)、翻譯后修飾蛋白組學(xué)等多種dànbáizhì組學(xué)分析服務(wù)。此外，百泰派克生物科技新推出基于timsTOF Pro的4Ddànbáizhì組學(xué)服務(wù)，助力微量樣本蛋白組學(xué)、大樣本群醫(yī)學(xué)及高通量修飾組學(xué)等研究工作。

※服務(wù)優(yōu)勢(shì)：

1 .高通量定量蛋白分析:多對(duì)照組大規(guī)模實(shí)驗(yàn)分析，發(fā)現(xiàn)新的生物標(biāo)記物;

2.體內(nèi)體外多種dànbáizhì標(biāo)記方法，適用于分析組織、細(xì)胞、血液等多種樣品;

3.質(zhì)譜分析靈敏度高，實(shí)驗(yàn)結(jié)果重復(fù)度高;

4.可檢測(cè)較低豐度蛋白，線性范圍廣;

5.zhuānyè生物信息學(xué)分析，分析更系統(tǒng)準(zhǔn)確。

三、單細(xì)胞質(zhì)譜流式技術(shù)分析

百泰派克生物科技采用Fluidigm質(zhì)譜流式系統(tǒng)進(jìn)行單細(xì)胞質(zhì)譜流式技術(shù)分析，采用金屬元素標(biāo)記物（通常是金屬元素標(biāo)記的特異抗體）標(biāo)記細(xì)胞表面和內(nèi)部的分子，然后用流式細(xì)胞原理分離單個(gè)細(xì)胞，再用電感耦合等離子體質(zhì)譜（ICP-MS）分析單個(gè)細(xì)胞的原子質(zhì)量譜，zuì后將原子質(zhì)量譜數(shù)據(jù)轉(zhuǎn)換為細(xì)胞表面和內(nèi)部的信號(hào)分子表達(dá)量。

※服務(wù)優(yōu)勢(shì)：

1.技術(shù)先進(jìn)，填補(bǔ)技術(shù)空白

采用金屬標(biāo)記抗體技術(shù)，避免了傳統(tǒng)流式熒光通道少且易相互影響的問題。可在單細(xì)胞層面上對(duì)多種指標(biāo)同時(shí)進(jìn)行表征，百泰派克生物科技可做到同時(shí)檢測(cè)51個(gè)目標(biāo)蛋白。

2.分析數(shù)量大，成本較低

單細(xì)胞RNAseq受成本等因素限制，所有樣本細(xì)胞匯總的分析數(shù)目一般在2x10^4個(gè)左右，而流式質(zhì)譜技術(shù)一次（單樣本）就可分析至少10^5的細(xì)胞，實(shí)現(xiàn)了數(shù)量級(jí)的提高，且成本不高于單細(xì)胞RNAseq。

3.應(yīng)用前景大

①流式質(zhì)譜結(jié)果可以給出細(xì)胞亞群的變化，在臨床診斷、疾病機(jī)制研究等方面具有極大的研究前景；

②將金屬標(biāo)簽技術(shù)與其他技術(shù)結(jié)合會(huì)有新應(yīng)用方向。除常規(guī)蛋白外，質(zhì)譜流式細(xì)胞技術(shù)還可用于蛋白翻譯后修飾；

③可檢測(cè)細(xì)胞存活率、細(xì)胞大小、mRNA轉(zhuǎn)錄子表達(dá)量、DNA合成速率以及蛋白酶活性等。

四、基于高精度質(zhì)譜的免疫多肽組學(xué)分析及新抗原發(fā)現(xiàn)

百泰派克生物科技的基于高精度質(zhì)譜的免疫多肽組學(xué)分析及新抗原發(fā)現(xiàn)一站式解決方案包括我們專有的、高度敏感的免疫肽富集和鑒定方案。我們能夠幫助您實(shí)現(xiàn)10,000個(gè)以上I型多肽和10,000個(gè)以上II型多肽的鑒定和識(shí)別。通過我們優(yōu)化的高通量免疫多肽組學(xué)分析平臺(tái)進(jìn)行免疫肽組學(xué)分析，可從zuì小的樣品材料中進(jìn)行可重復(fù)的識(shí)別和定量。該服務(wù)可以應(yīng)用于大規(guī)模的研究，旨在助力科研工作者尋找癌癥、免疫疾病及傳染病的解決方案，深入挖掘未知的靶標(biāo)。

五、生物藥物表征

百泰派克基于高分辨率質(zhì)譜技術(shù)，MALDI TOF，高效色譜分離技術(shù)，提供一系列完善的生物藥物分析方案，從dànbáizhì、多肽、抗體、疫苗等生物制品的氨基酸組成和一級(jí)結(jié)構(gòu)分析，到產(chǎn)品變異性和純度分析。旨在提供優(yōu)質(zhì)生物藥物分析服務(wù)，幫助生物醫(yī)藥生產(chǎn)商提高生物藥物品質(zhì)。

百泰派克生物科技七大檢測(cè)平臺(tái)

百泰派克生物科技-生物制品表征，生物質(zhì)譜多組學(xué)優(yōu)質(zhì)服務(wù)商

北京百泰派克生物科技有限公司致力于為生物/制藥和醫(yī)療器械行業(yè)提供質(zhì)量控制檢測(cè)和項(xiàng)目驗(yàn)證等zhuānyè服務(wù)。公司實(shí)驗(yàn)室遵循NMPA、ICH、FDA和EMA等的法規(guī)和指導(dǎo)原則，通過CNAS/ISO9001雙重質(zhì)量體系認(rèn)證，建立了完備的質(zhì)量體系，數(shù)據(jù)冷熱/異地備份，設(shè)備定期計(jì)量/期間核查，軟件審計(jì)追蹤，為客戶提供一體化解決方案和技術(shù)服務(wù)，支持新藥研發(fā)、藥物申報(bào)注冊(cè)和生產(chǎn)放行。

1.公司采用ISO9001質(zhì)量控制體系，zhuānyè提供以質(zhì)譜為基礎(chǔ)的CRO檢測(cè)分析服務(wù)；

2.獲國(guó)家CNAS實(shí)驗(yàn)室認(rèn)可，為客戶提供符合全球藥政法規(guī)的藥物質(zhì)量研究服務(wù)；

3.業(yè)務(wù)范圍覆蓋dànbáizhì組學(xué)、多肽組學(xué)、代謝組學(xué)、生物藥物表征、單細(xì)胞分析、單細(xì)胞質(zhì)譜流式、生信云分析以及多組學(xué)生物質(zhì)譜整合分析等；

4.七大質(zhì)量控制檢測(cè)平臺(tái)，滿足您一站式服務(wù)需求；

5.服務(wù)3000+企業(yè)，10000+客戶的選擇；

6.致力于為您提供優(yōu)質(zhì)的生物質(zhì)譜分析服務(wù)!

如何通過Edman降解實(shí)現(xiàn)高效蛋白質(zhì)序列分析？實(shí)驗(yàn)室指南檢測(cè)技術(shù)服務(wù)詳情介紹